| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 引言 | 第9-15页 |
| ·褐环粘盖牛肝菌 | 第9页 |
| ·异柠檬酸裂解酶的研究概况 | 第9-12页 |
| ·异柠檬酸裂解酶的生理意义 | 第9-10页 |
| ·异柠檬酸裂解酶的研究进展 | 第10-12页 |
| ·cDNA末端快速扩增(RACE)技术 | 第12-14页 |
| ·RACE技术研究背景 | 第12-13页 |
| ·RACE技术原理 | 第13-14页 |
| ·试验研究的目的、意义和内容 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-26页 |
| ·引物的设计与合成 | 第15页 |
| ·cDNA的合成 | 第15页 |
| ·PCR扩增ICL片段cDNA序列 | 第15-16页 |
| ·PCR的大量扩增 | 第16页 |
| ·PCR产物的回收 | 第16页 |
| ·ICL cDNA片段的测序 | 第16-18页 |
| ·ICL的连接转化 | 第16-17页 |
| ·ICL的菌落PCR | 第17页 |
| ·质粒的小量制备 | 第17页 |
| ·ICL的酶切鉴定 | 第17-18页 |
| ·RACE法获得ICL cDNA全序列 | 第18-22页 |
| ·RACE特异性引物设计 | 第18页 |
| ·3, RACE获得ICL的3,端序列 | 第18-19页 |
| ·5, RACE获得ICL的5,端序列 | 第19-21页 |
| ·ICL的cDNA片段序列、3,端序列、5,端序列拼接及分析. | 第21-22页 |
| ·ICL的DNA序列的克隆测序 | 第22-23页 |
| ·总DNA的提取 | 第22-23页 |
| ·PCR扩增 | 第23页 |
| ·PCR扩增产物克隆、测序及分析 | 第23页 |
| ·生物信息学分析 | 第23-24页 |
| ·ICL的相似性分析 | 第23页 |
| ·ICL氨基酸一级结构的分析 | 第23页 |
| ·ICL氨基酸二级结构的预测 | 第23页 |
| ·ICL蛋白质功能位点分析 | 第23-24页 |
| ·ICL氨基酸三级结构的预测 | 第24页 |
| ·系统发育分析 | 第24页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第24-26页 |
| ·pMD 19-T-ICL质粒的大量酶切 | 第24页 |
| ·pET-28a(+)质粒的酶切 | 第24-25页 |
| ·ICL与pET-28a(+)载体的连接 | 第25页 |
| ·连接产物的转化 | 第25页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第25-26页 |
| 3 试验结果 | 第26-44页 |
| ·引物的设计 | 第26-27页 |
| ·ICL cDNA片段序列 | 第27-30页 |
| ·ICL cDNA片段的扩增 | 第27页 |
| ·ICL cDNA片段序列与过度载体的连接及鉴定 | 第27-28页 |
| ·质粒pMD 19-T-ICL1测序结果 | 第28-30页 |
| ·ICL全长cDNA序列 | 第30-33页 |
| ·3,端cDNA序列 | 第30-31页 |
| ·5,端cDNA序列 | 第31-32页 |
| ·ICL全长cDNA序列 | 第32-33页 |
| ·ICL氨基酸序列的分析 | 第33页 |
| ·ICL DNA序列 | 第33-34页 |
| ·ICL的总DNA | 第33-34页 |
| ·ICL在DNA中的扩增 | 第34页 |
| ·生物信息学分析 | 第34-43页 |
| ·ICL核苷酸序列和氨基酸序列相似性分析 | 第34-37页 |
| ·氨基酸基本性质的预测 | 第37-38页 |
| ·氨基酸二级结构的预测 | 第38-40页 |
| ·ICL蛋白质功能位点预测 | 第40-41页 |
| ·氨基酸H级结构巧測 | 第41-42页 |
| ·ILC编码蛋白质的系统发育分析 | 第42-43页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-47页 |
| ·简并引物的设计 | 第44-45页 |
| ·RNA和DNA的提取 | 第45-46页 |
| ·RACE技术获得全长序列 | 第46-47页 |
| ·重组质粒的构建 | 第47页 |
| 5 结论 | 第47-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 附录 | 第55-68页 |
| 作者简介 | 第68页 |