摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-15页 |
第一章 文献综述 | 第15-34页 |
·小麦黄矮病的研究进展 | 第15-19页 |
·小麦黄矮病的发生及危害 | 第15-16页 |
·小麦黄矮病的病原及其特征 | 第16页 |
·大麦黄矮病毒的分类地位及株系划分 | 第16-17页 |
·大麦黄矮病毒传播特性和发病症状 | 第17-18页 |
·大麦黄矮病毒基因组结构及功能 | 第18页 |
·小麦黄矮病的防治策略 | 第18-19页 |
·小麦矮缩病的研究概况 | 第19-22页 |
·小麦矮缩病的发生及危害 | 第19-20页 |
·小麦矮缩病的病原及其特征 | 第20页 |
·小麦矮缩病毒传播特性和发病症状 | 第20-21页 |
·小麦矮缩病毒基因组结构及功能 | 第21页 |
·小麦矮缩病的防治策略 | 第21-22页 |
·小麦基因工程研究进展 | 第22-29页 |
·转基因植物国内外发展概况 | 第22页 |
·小麦基因工程研究进展 | 第22-25页 |
·RNAi 的发现 | 第25页 |
·RNAi 的作用机制 | 第25页 |
·RNAi 的特点 | 第25-26页 |
·外源基因沉默策略 | 第26-28页 |
·RNAi 在小麦抗病毒基因工程中的重要性 | 第28-29页 |
·小麦转基因主要方法概述 | 第29-31页 |
·农杆菌介导法 | 第29-30页 |
·小麦花粉管通道法 | 第30页 |
·小麦基因枪法 | 第30-31页 |
·小麦主要转基因方法的比较 | 第31页 |
·无筛选标记及骨架序列转基因小麦培育 | 第31-33页 |
·标记基因的安全性问题 | 第31-32页 |
·获得无标记转基因植株技术 | 第32页 |
·基因枪介导的最小表达框转化技术 | 第32页 |
·基因枪介导的共转化技术 | 第32-33页 |
·研究目的与意义 | 第33-34页 |
第二章 适合基因枪转化的 RNA 干扰载体的构建 | 第34-48页 |
·材料与方法 | 第34-38页 |
·病毒分离物 | 第34页 |
·质粒和菌株 | 第34页 |
·酶及实验试剂酶及实验试剂: | 第34页 |
·小麦叶组织总 RNA 的提取 | 第34-35页 |
·引物设计 | 第35页 |
·反转录 PCR(RT-PCR) | 第35-36页 |
·PCR 产物的回收、连接及转化感受态细胞 | 第36-37页 |
·序列的测定及分析 | 第37页 |
·正向片段与载体 pMCG161 的连接转化 | 第37-38页 |
·反向片段与载体 pMCG161 的连接转化 | 第38页 |
·结果与分析 | 第38-46页 |
·BYDV-GAV CP 全长基因的克隆、测序 | 第38页 |
·BYDV-GAV CP 基因的部分片段克隆、测序 | 第38-39页 |
·WDV-CP 全长基因的克隆、测序 | 第39页 |
·WDV-CP 部分片段克隆、测序 | 第39-40页 |
·BYDV-WDV-CP 串连基因(简写为 BW-CP 基因)的连接、测序 | 第40页 |
·BYDV-WDV-HCP 串连基因(简写为 HBW-CP 基因)的连接、测序 | 第40-41页 |
·pMCG161+/-W 单价干涉载体的构建 | 第41-42页 |
·pMCG161+/-BW 双价干涉载体的构建 | 第42-44页 |
·pWMB006+/-HBW 双价干涉载体的构建 | 第44-46页 |
·+/-HBW 最小表达框的构建: | 第46页 |
·讨论 | 第46-48页 |
第三章 利用基因枪法对小麦品种进行遗传转化 | 第48-56页 |
·材料与方法 | 第48-52页 |
·小麦品种 | 第48页 |
·小麦遗传转化用到的培养基: | 第48-50页 |
·准备靶材料 | 第50-51页 |
·利用基因枪法转化小麦受体 | 第51页 |
·小麦遗传转化体的筛选和植株的再生 | 第51-52页 |
·结果与分析 | 第52-54页 |
·小麦基因枪转化小麦幼胚获得转基因植株的流程图 | 第53-54页 |
·基因枪转化转基因植株完成情况 | 第54页 |
·讨论 | 第54-56页 |
第四章 转基因小麦后代植株的分子检测 | 第56-67页 |
·材料与方法 | 第56-60页 |
·材料 | 第56页 |
·转基因小麦植株叶片的 DNA 提取 | 第56-58页 |
·外源基因的 PCR 检测 | 第58页 |
·小麦基因组 DNA 的 Southen 杂交 | 第58-59页 |
·转基因小麦植株叶片的 RNA 提取 | 第59页 |
·实时荧光定量 PCR 检测 | 第59-60页 |
·结果与分析 | 第60-66页 |
·转化 pMCG161+/-BW 干扰载体小麦植株 PCR 检测 | 第60-61页 |
·转化 pMCG161+/-W 干扰载体的小麦植株的 PCR 检测 | 第61-62页 |
·转 pWMB006HBW-CP 干扰载体的小麦植株的 PCR 检测 | 第62页 |
·转+/-HBW 最小表达框的 PCR 检测 | 第62-63页 |
·转基因小麦植株的基因组 DNA 的 Southe blotting 检测 | 第63页 |
·转基因植株的 Q-RT-PCR 分析 | 第63-64页 |
·转基因小麦分子检测结果和转化率 | 第64-66页 |
·讨论 | 第66-67页 |
第五章 转基因小麦植株的抗病性鉴定 | 第67-71页 |
·材料与方法 | 第67-68页 |
·研究材料 | 第67页 |
·接种 | 第67页 |
·接种后的发病级别调查 | 第67-68页 |
·结果与分析 | 第68-70页 |
·BYDV-GAV 抗性植株的鉴定 | 第68-70页 |
·WDV-CP 抗性植株的鉴定 | 第70页 |
·讨论 | 第70-71页 |
第六章 全文结论 | 第71-72页 |
参考文献 | 第72-84页 |
附录 | 第84-90页 |
致谢 | 第90-92页 |
作者简介 | 第92-93页 |