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利用RNAi介导抗BYDV和WDV小麦新种质的研究

摘要第1-7页
Abstract第7-15页
第一章 文献综述第15-34页
   ·小麦黄矮病的研究进展第15-19页
     ·小麦黄矮病的发生及危害第15-16页
     ·小麦黄矮病的病原及其特征第16页
     ·大麦黄矮病毒的分类地位及株系划分第16-17页
     ·大麦黄矮病毒传播特性和发病症状第17-18页
     ·大麦黄矮病毒基因组结构及功能第18页
     ·小麦黄矮病的防治策略第18-19页
   ·小麦矮缩病的研究概况第19-22页
     ·小麦矮缩病的发生及危害第19-20页
     ·小麦矮缩病的病原及其特征第20页
     ·小麦矮缩病毒传播特性和发病症状第20-21页
     ·小麦矮缩病毒基因组结构及功能第21页
     ·小麦矮缩病的防治策略第21-22页
   ·小麦基因工程研究进展第22-29页
     ·转基因植物国内外发展概况第22页
     ·小麦基因工程研究进展第22-25页
     ·RNAi 的发现第25页
     ·RNAi 的作用机制第25页
     ·RNAi 的特点第25-26页
     ·外源基因沉默策略第26-28页
     ·RNAi 在小麦抗病毒基因工程中的重要性第28-29页
   ·小麦转基因主要方法概述第29-31页
     ·农杆菌介导法第29-30页
     ·小麦花粉管通道法第30页
     ·小麦基因枪法第30-31页
     ·小麦主要转基因方法的比较第31页
   ·无筛选标记及骨架序列转基因小麦培育第31-33页
     ·标记基因的安全性问题第31-32页
     ·获得无标记转基因植株技术第32页
     ·基因枪介导的最小表达框转化技术第32页
     ·基因枪介导的共转化技术第32-33页
   ·研究目的与意义第33-34页
第二章 适合基因枪转化的 RNA 干扰载体的构建第34-48页
   ·材料与方法第34-38页
     ·病毒分离物第34页
     ·质粒和菌株第34页
     ·酶及实验试剂酶及实验试剂:第34页
     ·小麦叶组织总 RNA 的提取第34-35页
     ·引物设计第35页
     ·反转录 PCR(RT-PCR)第35-36页
     ·PCR 产物的回收、连接及转化感受态细胞第36-37页
     ·序列的测定及分析第37页
     ·正向片段与载体 pMCG161 的连接转化第37-38页
     ·反向片段与载体 pMCG161 的连接转化第38页
   ·结果与分析第38-46页
     ·BYDV-GAV CP 全长基因的克隆、测序第38页
     ·BYDV-GAV CP 基因的部分片段克隆、测序第38-39页
     ·WDV-CP 全长基因的克隆、测序第39页
     ·WDV-CP 部分片段克隆、测序第39-40页
     ·BYDV-WDV-CP 串连基因(简写为 BW-CP 基因)的连接、测序第40页
     ·BYDV-WDV-HCP 串连基因(简写为 HBW-CP 基因)的连接、测序第40-41页
     ·pMCG161+/-W 单价干涉载体的构建第41-42页
     ·pMCG161+/-BW 双价干涉载体的构建第42-44页
     ·pWMB006+/-HBW 双价干涉载体的构建第44-46页
     ·+/-HBW 最小表达框的构建:第46页
   ·讨论第46-48页
第三章 利用基因枪法对小麦品种进行遗传转化第48-56页
   ·材料与方法第48-52页
     ·小麦品种第48页
     ·小麦遗传转化用到的培养基:第48-50页
     ·准备靶材料第50-51页
     ·利用基因枪法转化小麦受体第51页
     ·小麦遗传转化体的筛选和植株的再生第51-52页
   ·结果与分析第52-54页
     ·小麦基因枪转化小麦幼胚获得转基因植株的流程图第53-54页
     ·基因枪转化转基因植株完成情况第54页
   ·讨论第54-56页
第四章 转基因小麦后代植株的分子检测第56-67页
   ·材料与方法第56-60页
     ·材料第56页
     ·转基因小麦植株叶片的 DNA 提取第56-58页
     ·外源基因的 PCR 检测第58页
     ·小麦基因组 DNA 的 Southen 杂交第58-59页
     ·转基因小麦植株叶片的 RNA 提取第59页
     ·实时荧光定量 PCR 检测第59-60页
   ·结果与分析第60-66页
     ·转化 pMCG161+/-BW 干扰载体小麦植株 PCR 检测第60-61页
     ·转化 pMCG161+/-W 干扰载体的小麦植株的 PCR 检测第61-62页
     ·转 pWMB006HBW-CP 干扰载体的小麦植株的 PCR 检测第62页
     ·转+/-HBW 最小表达框的 PCR 检测第62-63页
     ·转基因小麦植株的基因组 DNA 的 Southe blotting 检测第63页
     ·转基因植株的 Q-RT-PCR 分析第63-64页
     ·转基因小麦分子检测结果和转化率第64-66页
   ·讨论第66-67页
第五章 转基因小麦植株的抗病性鉴定第67-71页
   ·材料与方法第67-68页
     ·研究材料第67页
     ·接种第67页
     ·接种后的发病级别调查第67-68页
   ·结果与分析第68-70页
     ·BYDV-GAV 抗性植株的鉴定第68-70页
     ·WDV-CP 抗性植株的鉴定第70页
   ·讨论第70-71页
第六章 全文结论第71-72页
参考文献第72-84页
附录第84-90页
致谢第90-92页
作者简介第92-93页

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