| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-38页 |
| ·蛋白质的合理设计 | 第14-20页 |
| ·定点突变（site-directed mutation） | 第15-16页 |
| ·蛋白质的结构域重组（domain recombination） | 第16-19页 |
| ·全新的蛋白质设计（de novo design） | 第19-20页 |
| ·蛋白质的序列基序（sequence motif）和结构基序（structuremotif） | 第20-22页 |
| ·蛋白质的序列基序 | 第20-21页 |
| ·蛋白质的结构基序 | 第21-22页 |
| ·α/β水解酶超家族 | 第22-28页 |
| ·嗜热酯酶 AFEST | 第24-25页 |
| ·嗜热酯酶 apAPH | 第25-26页 |
| ·中温脂肪酶 Lip1 | 第26-28页 |
| ·立题依据和实验设计 | 第28-29页 |
| ·参考文献 | 第29-38页 |
| 第二章 结构域交换及界面优化改变酶底物特异性 | 第38-66页 |
| ·引言 | 第38-39页 |
| ·材料与方法 | 第39-46页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第39页 |
| ·实验用菌株及质粒 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-46页 |
| ·同源模建构建嵌合酶的结构模型 | 第40页 |
| ·嵌合酶基因的克隆 | 第40-42页 |
| ·嵌合酶的表达、纯化、性质表征及动力学测定 | 第42-45页 |
| ·圆二色谱的测定 | 第45页 |
| ·非变性电泳和活力染色 | 第45-46页 |
| ·实验结果 | 第46-63页 |
| ·嵌合酶 PA，AA 的设计 | 第46-50页 |
| ·分析和优化嵌合酶的结构域界面 | 第50-57页 |
| ·嵌合酶 PAR 和 AAM7 的表达和纯化 | 第57-58页 |
| ·嵌合酶的性质表征 | 第58-63页 |
| ·温度对嵌合酶的活力影响 | 第58-59页 |
| ·pH 对嵌合酶的活力影响 | 第59-60页 |
| ·嵌合酶的热稳定性 | 第60-61页 |
| ·嵌合酶的底物特异性 | 第61-63页 |
| ·讨论 | 第63-64页 |
| ·小结 | 第64页 |
| ·参考文献 | 第64-66页 |
| 第三章 关键基序指导的结构域重组构建嗜热脂肪酶 | 第66-96页 |
| ·引言 | 第66页 |
| ·材料与方法 | 第66-69页 |
| ·使用的数据库及软件 | 第66-67页 |
| ·实验方法 | 第67-69页 |
| ·关键基序查找 | 第67-68页 |
| ·同源模建构建嵌合酶的结构模型 | 第68页 |
| ·进化树的构建 | 第68页 |
| ·嵌合酶基因的克隆 | 第68-69页 |
| ·嵌合酶的表达、纯化、性质表征及动力学测定 | 第69页 |
| ·圆二色谱的测定 | 第69页 |
| ·分子表面静电势的计算 | 第69页 |
| ·实验结果 | 第69-90页 |
| ·关键基序指导的结构域重组方法（KMDR） | 第69-73页 |
| ·用 KMDR 方法设计和构建嵌合酶 LAf | 第73-82页 |
| ·嵌合酶 LAf 的基因构建，表达和纯化 | 第82-84页 |
| ·嵌合酶 LAf 的性质表征 | 第84-87页 |
| ·嵌合酶 LAf 的最适温度和热稳定性 | 第84-85页 |
| ·嵌合酶 LAf 的最适 pH | 第85-87页 |
| ·嵌合酶 LAf 的底物特异性 | 第87-90页 |
| ·讨论 | 第90-93页 |
| ·小结 | 第93页 |
| ·参考文献 | 第93-96页 |
| 第四章 关键基序指导的结构域重组方法的普适性 | 第96-116页 |
| ·引言 | 第96-98页 |
| ·实验方法 | 第98-100页 |
| ·同源模建构建嵌合酶 LAp 的结构模型 | 第98页 |
| ·嵌合酶 LAp 基因的克隆 | 第98-99页 |
| ·嵌合酶 LAp 的表达、纯化、性质表征及动力学测定 | 第99页 |
| ·圆二色谱的测定 | 第99页 |
| ·分子表面静电势的计算 | 第99-100页 |
| ·实验结果 | 第100-112页 |
| ·嵌合酶 LAp 的设计 | 第100-103页 |
| ·嵌合酶 LAp 的构建、表达和纯化 | 第103-104页 |
| ·嵌合酶 LAp 的性质表征 | 第104-108页 |
| ·嵌合酶 LAp 的最适温度和热稳定性 | 第104-106页 |
| ·嵌合酶 LAp 的最适 pH | 第106-108页 |
| ·嵌合酶 LAp 的底物特异性 | 第108-109页 |
| ·通过定点突变提高嵌合酶 LAp 的活力 | 第109-112页 |
| ·讨论 | 第112-114页 |
| ·小结 | 第114页 |
| ·参考文献 | 第114-116页 |
| 创新点 | 第116-118页 |
| 展望 | 第118-120页 |
| 作者简介及攻读博士期间科研成果 | 第120-122页 |
| 参与的研究课题 | 第122-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
