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黑曲霉酸性β-甘露聚糖酶基因克隆与表达的研究

摘要第1-4页
Abstract第4-5页
目录第5-7页
1 绪论第7-17页
   ·甘露聚糖的结构和甘露聚糖降解酶系统第7页
   ·β-甘露聚糖酶研究进展第7-13页
     ·β-甘露聚糖酶的来源与性质多样性第8-9页
     ·β-甘露聚糖酶分子结构的研究进展第9-10页
     ·β-甘露聚糖酶分子催化机制第10-11页
     ·β-甘露聚糖酶分子生物学研究进展第11-13页
     ·β-甘露聚糖酶的应用第13页
   ·木聚糖酶概述第13-14页
   ·共表达研究概述第14-15页
   ·立题依据第15页
   ·主要研究内容第15-17页
2 材料与方法第17-25页
   ·实验材料第17-18页
   ·实验方法第18-25页
3 结果与讨论第25-45页
   ·β-甘露聚糖酶基因 3'-cDNA 片段的克隆第25-26页
     ·A. niger LW-1 总 RNA 的提取第25页
     ·β-甘露聚糖酶基因 3'-cDNA 片段的扩增第25-26页
   ·β-甘露聚糖酶基因 5'端调控序列的克隆第26-27页
     ·酶切 A. niger LW-1 基因组第26页
     ·β-甘露聚糖酶基因 5'端调控序列的扩增第26-27页
   ·β-甘露聚糖酶基因全长 cDNA 的克隆与序列分析第27-32页
     ·β-甘露聚糖酶基因全长 cDNA 的克隆第27-29页
     ·β-甘露聚糖酶的一级序列同源性第29-30页
     ·β-甘露聚糖酶的系统进化树分析第30-31页
     ·β-甘露聚糖酶的三维结构建模第31-32页
   ·β-甘露聚糖酶成熟肽基因的克隆与表达第32-35页
     ·成熟肽基因(Anman5A)的 PCR 扩增第32-33页
     ·重组载体 pPICZαA-Anman5A 的构建第33页
     ·重组子的筛选与表达第33-34页
     ·重组子的 PCR 鉴定第34页
     ·P. pastoris GS115/Anman5A 表达产物 SDS-PAGE 分析第34-35页
   ·重组β-甘露聚糖酶的酶学性质研究第35-38页
     ·温度对酶活力的影响第35-36页
     ·温度对酶稳定性的影响第36-37页
     ·pH 对酶活力的影响第37页
     ·pH 对酶稳定性的影响第37-38页
     ·金属离子和 EDTA 对酶活力的影响第38页
     ·重组酶的底物专一性第38页
   ·β-甘露聚糖酶基因与木聚糖酶基因共表达第38-41页
     ·双重重组子的筛选与表达第38-39页
     ·双重重组子的 PCR 鉴定第39-40页
     ·双重重组子表达产物的 SDS-PAGE 分析第40-41页
     ·双重重组子的遗传稳定性第41页
   ·GSMX2 表达条件的初步优化第41-45页
     ·诱导时间对产酶的影响第41-42页
     ·甘油添加量对产酶的影响第42页
     ·培养基起始 pH 对产酶的影响第42-43页
     ·甲醇添加量对产酶的影响第43-45页
主要结论第45-46页
问题与展望第46-47页
致谢第47-48页
参考文献第48-54页
附录A:β-甘露聚糖酶基因 5'端调控序列第54-55页
附录B:作者在攻读硕士学位期间发表的论文第55页

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