| 符号说明 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1. 引言 | 第12-23页 |
| ·PRRSV 的生物学特征 | 第12-21页 |
| ·PRRSV 的基因组结构 | 第13-17页 |
| ·PRRSV 的遗传变异 | 第17页 |
| ·PRRSV 免疫学反应 | 第17-19页 |
| ·PRRSV 致病机制 | 第19页 |
| ·PRRSV 受体的研究进展 | 第19-21页 |
| ·PRRS 的预防和控制 | 第21页 |
| ·非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链 A | 第21-22页 |
| ·Blebbistatin | 第22页 |
| ·研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 2. 材料和方法 | 第23-39页 |
| ·材料 | 第23-27页 |
| ·细胞及 PRRSV 毒株 | 第23页 |
| ·实验试剂及耗材 | 第23页 |
| ·质粒及受体菌 | 第23-25页 |
| ·主要试剂配制 | 第25-26页 |
| ·主要仪器及设备 | 第26-27页 |
| ·方法 | 第27-39页 |
| ·Marc-145 细胞的传代及收集 | 第27页 |
| ·PRRSV 的纯化和扩繁 | 第27页 |
| ·PRRSV 的 TCID50 的测定 | 第27-28页 |
| ·Marc-145 细胞总 RNA 的提取 | 第28页 |
| ·克隆构建所需引物的设计和合成 | 第28-29页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第29-30页 |
| ·PCR 产物的回收和连接 | 第30页 |
| ·氯化钙法制备感受态细胞 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的转化 | 第31页 |
| ·重组质粒的提取和鉴定 | 第31页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白质样品的制备和电泳分析 | 第32-33页 |
| ·洗涤包涵体和的 Ni 柱纯化原核表达蛋白 | 第33页 |
| ·原核表达蛋白的 PH 梯度透析复性 | 第33-34页 |
| ·Western-blot 鉴定 PRA 蛋白与 Ma62-5G2 结合 | 第34页 |
| ·I-ELISA 鉴定 PRA 蛋白与 Ma62-5G2 结合 | 第34-35页 |
| ·间接免疫荧光实验（Indirect fluorescent assay，IFA） | 第35页 |
| ·IFA 实验验证 PRA 蛋白对 Marc-145 细胞的影响 | 第35-36页 |
| ·多肽的合成，溶解和保存及 Blebbistatin 的溶解和稀释 | 第36页 |
| ·(R)-(+)-Blebbistatin 对 Marc-145 细胞的分裂周期的影响的观察 | 第36页 |
| ·病毒中和实验（Virus neutralization，VN） | 第36-37页 |
| ·PRA蛋白对PRRSV感染Marc-145细胞的阻断作用 | 第36-37页 |
| ·(R)-(+)-Blebbistatin对PRRSV感染Marc-145细胞的阻断作用 | 第37页 |
| ·多肽对PRRSV感染Marc-145细胞的阻断作用 | 第37页 |
| ·间接免疫荧光实验（IFA）鉴定 PRRSV 感染 Marc-145 细胞 | 第37页 |
| ·荧光病毒中和实验（Fluorescent focus neutralization，FFN） | 第37-38页 |
| ·荧光定量 PCR 检测 PRRSV 感染量 | 第38页 |
| ·重组质粒转染 Marc-145 细胞 | 第38页 |
| ·转染了重组质粒pEGFP-N1-PRA 的 Marc-145 细胞对 PRRSV 感染量变化的检测 | 第38-39页 |
| 3. 结果 | 第39-51页 |
| ·PRA 克隆的结果 | 第39页 |
| ·多个重组质粒构建的鉴定结果 | 第39-40页 |
| ·分段蛋白的原核表达鉴定 | 第40-42页 |
| ·Western-blot 确定 PRA 蛋白与 Ma62-5G2 的结合位点 | 第42-43页 |
| ·I-ELISA 确定 PRA 蛋白与 Ma62-5G2 的结合位点 | 第43-44页 |
| ·间接免疫荧光实验鉴定 PRA 蛋白结合 Marc-145 细胞 | 第44-45页 |
| ·IFA 实验验证 PRA 蛋白对 Marc-145 细胞分裂周期的影响 | 第45-46页 |
| ·(R)-(+)-Blebbistatin 对 Marc-145 细胞的胞质分裂的影 | 第46页 |
| ·VN 实验探求PRA 蛋白，和(R)-(+)-Blebbistatin 对PRRSV 感染Marc-145 细胞的阻断作用 | 第46-47页 |
| ·VN 实验探求多肽对 PRRSV 感染 Marc-145 细胞的阻断作 | 第47-48页 |
| ·IFA 鉴定 PRRSV 感染 Mar-145 细胞 | 第48-49页 |
| ·FFN 实验探求 PRA 蛋白对 PRRSV 感染 Marc-145 细胞的阻断 | 第49页 |
| ·荧光定量 PCR 实验探求重组质粒转染 Marc-145 细胞对 PRRSV 感染 | 第49-50页 |
| ·重组质粒转染 Marc-145 细胞的鉴定 | 第50页 |
| ·重组质粒pEGFP-N1-PRA 转染后对 PRRSV 感染 Marc-145 细胞的 | 第50-51页 |
| 4. 讨论 | 第51-53页 |
| ·PRA蛋白对PRRSV感染Marc-145细胞的阻断作用机理的讨论 | 第51-52页 |
| ·转染重组质粒pEGFP-N1-PRA 后对PRRSV 感染Marc-145 细胞的阻断作用的机理的讨论 | 第52页 |
| ·PRA 蛋白与抗独特型抗体 Ma62-5G2 的结合位点的确定的讨论 | 第52页 |
| ·(R)-(+)-Blebbistatin 对 PRRSV 感染 Marc-145 细胞的阻断作用的讨论 | 第52-53页 |
| 5. 结论 | 第53-55页 |
| ·RT-PCR克隆得到Marc-145细胞中NMHC-ⅡA的羧基端基因（PRA | 第53页 |
| ·非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A蛋白在PRRSV感染Marc-145细胞中的作用 | 第53页 |
| ·PRA蛋白与抗独特型抗体Ma62-5G2的结合位点的确定 | 第53页 |
| ·(R)-(+)-Blebbistatin对PRRSV感染Marc-145细胞的阻断作用 | 第53-55页 |
| 6. 参考文献 | 第55-63页 |
| 7. 致谢 | 第63-64页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第64-65页 |
| 硕士学位论文内容简介及自评 | 第65页 |
