| 摘要 | 第1-3页 |
| ABSTRACT | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第4-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-28页 |
| ·研究的目的 | 第10-11页 |
| ·牙齿发育概述 | 第11-13页 |
| ·哺乳动物早期牙齿的发育模式(图1-1) | 第11页 |
| ·牙齿发育的分子机制简述 | 第11-13页 |
| ·介导牙齿发生的生长因子 | 第12页 |
| ·转录因子在牙齿发生中的作用 | 第12-13页 |
| ·WNTS | 第13-19页 |
| ·Wnts的属性 | 第14页 |
| ·Wnt信号的四条传导通路 | 第14-15页 |
| ·Wnt信号通路的分泌型拮抗物 | 第15-17页 |
| ·sFRP(secreted Fizzled-related proteins)家族蛋白 | 第15-16页 |
| ·发育中sFRP的表达模式 | 第16页 |
| ·sFRPs可以赋予Wnt活性 | 第16-17页 |
| ·sFRPs和细胞生长的调节 | 第17页 |
| ·发育中的牙齿表达一系列的Wnt基因 | 第17-19页 |
| ·牙齿发育的起始阶段(E11.5) | 第17-18页 |
| ·牙蕾时期(E13.5) | 第18页 |
| ·帽状期(E14.5) | 第18页 |
| ·钟状早期(E15.5) | 第18-19页 |
| ·基因转移载体 | 第19-23页 |
| ·HIV慢病毒载体 | 第20-23页 |
| ·慢病毒HIV | 第20-22页 |
| ·HIV慢病毒载体构建 | 第22-23页 |
| ·RNAi | 第23-26页 |
| ·RNAi发现背景 | 第23-24页 |
| ·RNAi的分子机制 | 第24-25页 |
| ·siRNA的表达 | 第25-26页 |
| ·实验设计和意义 | 第26-28页 |
| 第2章 实验内容 | 第28-66页 |
| ·材料 | 第28-31页 |
| ·菌株和载体 | 第28页 |
| ·细胞 | 第28页 |
| ·实验动物 | 第28页 |
| ·工具酶 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·耗材 | 第28-29页 |
| ·试剂 | 第29-30页 |
| ·引物和探针(Takara) | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-44页 |
| ·sfrp3-siRNA片段的设计 | 第31-32页 |
| ·登录GeneBank查询小鼠sfrp3基因的mRNA全序列 | 第31页 |
| ·siRNA的设计原则 | 第31页 |
| ·合成片段的设计 | 第31-32页 |
| ·合成单链寡聚核苷酸片段 | 第32页 |
| ·单链寡聚核苷酸片段的退火反应 | 第32页 |
| ·质粒的提取 | 第32-34页 |
| ·小剂量抽提---碱裂解法 | 第32-33页 |
| ·大剂量抽提---QIAGEN-tip100 | 第33-34页 |
| ·内切酶酶切 | 第34页 |
| ·末端去磷酸化 | 第34页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第34-35页 |
| ·连接 | 第35页 |
| ·细菌的转化 | 第35页 |
| ·293T细胞扩培与冻存 | 第35-36页 |
| ·jetPEI~(TM)试剂盒转染293T细胞,生产EGFP病毒 | 第36-37页 |
| ·磷酸钙法转染293T细胞,生产EGFP病毒 | 第37页 |
| ·EGFP病毒感染293T细胞 | 第37-38页 |
| ·EGFP病毒感染牙间充质细胞 | 第38页 |
| ·抽提总RNA(动物) | 第38-39页 |
| ·RT-PCR(两步法) | 第39-40页 |
| ·逆转录 | 第39页 |
| ·cDNA的PCR反应 | 第39-40页 |
| ·测序 | 第40页 |
| ·Realtime RT-PCR | 第40-42页 |
| ·设计探针 | 第40页 |
| ·Realtime RT-PCR(两步法) | 第40-41页 |
| ·制作sfrp3标准曲线 | 第41页 |
| ·检测RNAi抑制sfrp3表达的效率 | 第41-42页 |
| ·组织重组：病毒感染后的E13.5牙间充质与E10.5牙上皮重组 | 第42-43页 |
| ·整牙移植 | 第43-44页 |
| ·HE染色 | 第44页 |
| ·Azon染色 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-62页 |
| ·载体的鉴定 | 第44-47页 |
| ·HindⅢ酶切鉴定pSilencer 1.0-U_6-shsfrp3-Ⅰ质粒和pSilencer 1.0-U_6-shsfrp3-Ⅱ质粒 | 第44-45页 |
| ·测序鉴定pSilencer 1.0-U_6-shsfrp3-Ⅰ质粒和pSilencer 1.0-U_6-shsfrp3-Ⅱ质粒 | 第45页 |
| ·XbaI酶切鉴定pNL-EGFP-U_6-shsfrp3-Ⅰ质粒和pNL-EGFP-U_6-shsfrp3-Ⅱ质粒 | 第45-47页 |
| ·病毒的生产 | 第47-52页 |
| ·pNL-EGFP、pVSVG和pHelper三质粒共转染293T细胞,生产EGFP病毒 | 第47-48页 |
| ·jetPEI~(TM)试剂盒法和磷酸钙法转染293T细胞的比较 | 第48页 |
| ·EGFP病毒液感染293T细胞及牙间充质细胞 | 第48-52页 |
| ·检测RNAi抑制sfrp3表达的效率 | 第52-55页 |
| ·从总RNA中扩增sfrp3和β-actin基因的部分片段 | 第52页 |
| ·sfrp3标准曲线 | 第52-53页 |
| ·RNAi抑制sfrp_3表达的效率 | 第53-55页 |
| ·通过抑制牙间充质中sfrp3的表达研究牙齿的发育 | 第55-62页 |
| ·组织重组 | 第55页 |
| ·病毒感染后的E13.5牙间充质与E10.5牙上皮重组的成牙分析 | 第55-56页 |
| ·被EGFP-shsfrp3-Ⅱ病毒感染的E11.5的完整磨牙牙胚和被EGFP病毒感染的E11.5的完整磨牙牙胚发育的形态比较 | 第56-62页 |
| ·讨论 | 第62-66页 |
| ·载体构建 | 第62页 |
| ·病毒的生产 | 第62-63页 |
| ·检测RNAi抑制sfrp3表达的效率 | 第63页 |
| ·通过抑制牙间充质中sfrp3的表达研究牙齿的发育 | 第63-66页 |
| 结论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 附录一 | 第76-77页 |
| 附录二 | 第77-78页 |
| 附录三 | 第78-79页 |
| 附录四 | 第79-81页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 个人简历 | 第83-85页 |
| 福建师范大学学位论文使用授权声明 | 第85页 |
