土鳖虫纤溶成分的提取和基因克隆的研究
| 目录 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略语 | 第9-10页 |
| 1.前言 | 第10-20页 |
| ·血栓栓塞性疾病的现状 | 第10页 |
| ·血栓的形成 | 第10-11页 |
| ·机体的凝血系统和抗凝血系统 | 第10页 |
| ·血栓的形成 | 第10-11页 |
| ·抗血栓药物 | 第11-17页 |
| ·纤溶酶原激活剂 | 第11-17页 |
| ·纤溶系统的组成 | 第11-12页 |
| ·生理来源的抗血栓药物 | 第12-14页 |
| ·动物性来源的抗血栓药物 | 第14-17页 |
| ·土鳖虫抗血栓的实验研究进展 | 第17-18页 |
| ·本课题研究内容及意义 | 第18-20页 |
| ·研究意义 | 第18-19页 |
| ·研究内容 | 第19-20页 |
| 2.主要仪器与试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| 3.实验材料 | 第20-21页 |
| 4.实验方法 | 第21-29页 |
| ·土鳖纤溶酶原激酶成分的分离纯化 | 第21-23页 |
| ·纤溶活性测定 | 第21页 |
| ·土鳖纤溶酶原激活物的分离纯化 | 第21-22页 |
| ·样品纯度鉴定和分子量测定 | 第22页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第22-23页 |
| ·土鳖激酶性质的研究 | 第23页 |
| ·含糖量的测定 | 第23页 |
| ·土鳖纤溶成分的分离纯化和活性测定(制备电泳法) | 第23-24页 |
| ·土鳖纤溶成分(EFF)的分离纯化 | 第23-24页 |
| ·聚丙烯酰胺垂直板电泳 | 第24页 |
| ·样品纯度鉴定和分子量测定 | 第24页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第24页 |
| ·土鳖纤溶酶基因的cDNA的克隆 | 第24-29页 |
| ·土鳖总RNA提取 | 第24-25页 |
| ·简并引物的设计与合成 | 第25页 |
| ·RT-PCR合成土鳖纤溶酶cDNA | 第25-26页 |
| ·目的条带回收 | 第26页 |
| ·土鳖纤溶酶cDNA的克隆和测序 | 第26页 |
| ·土鳖纤溶酶DNA的比对分析 | 第26页 |
| ·土鳖纤溶酶成熟肽N段基因的克隆 | 第26-27页 |
| ·土鳖纤溶酶基因3’端序列的获取 | 第27-29页 |
| 5 结果与分析 | 第29-41页 |
| ·土鳖纤溶酶原激酶成分的分离纯化 | 第29-32页 |
| ·尿激酶标准曲线 | 第29页 |
| ·蛋白曲线的制作 | 第29页 |
| ·土鳖硫酸铵沉淀段的选取 | 第29页 |
| ·土鳖激酶的分离纯化 | 第29-30页 |
| ·土鳖激酶的性质研究 | 第30-32页 |
| ·土鳖纤溶成分的分离纯化和活性测定(制备电泳法) | 第32-33页 |
| ·土鳖纤溶成分的分离纯化结果 | 第32-33页 |
| ·土鳖虫纤溶酶基因的cDNA克隆 | 第33-41页 |
| ·土鳖虫总RNA纯度和完整性检测 | 第33页 |
| ·RT-PCR结果 | 第33页 |
| ·克隆测序结果 | 第33-34页 |
| ·Blastp序列分析 | 第34-35页 |
| ·土鳖纤溶酶成熟肽N段基因的克隆结果 | 第35-37页 |
| ·土鳖纤溶酶基因3’RACE结果 | 第37-41页 |
| 6 讨论 | 第41-48页 |
| ·生物纤溶物质的探讨 | 第41页 |
| ·土鳖纤溶组分的分离纯化分析 | 第41-42页 |
| ·土鳖激酶的性质研究 | 第42页 |
| ·制备电泳法分离纯化土鳖纤溶酶 | 第42页 |
| ·土鳖纤溶酶基因引物的设计 | 第42-44页 |
| ·克隆测序结果分析 | 第44-48页 |
| ·ET-Ⅰ结果分析 | 第44-45页 |
| ·ET-Ⅱ结果分析 | 第45-48页 |
| 小结 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
