| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-17页 |
| 文献综述 | 第17-55页 |
| 第一章 体细胞核移植经典回顾 | 第17-23页 |
| ·核移植设想的提出及付诸行动 | 第17-18页 |
| ·胚胎细胞核移植 | 第18-19页 |
| ·胚胎干细胞核移植 | 第19-20页 |
| ·体细胞核移植 | 第20-21页 |
| ·异种细胞核移植 | 第21页 |
| ·国内体细胞核移植研究现状 | 第21-23页 |
| 第二章 体细胞核移植理论基础 | 第23-32页 |
| ·供核基因表达的变化 | 第23页 |
| ·表观遗传修饰类型 | 第23-25页 |
| ·DNA 甲基化 | 第24页 |
| ·组蛋白乙酰化 | 第24页 |
| ·其他组蛋白修饰方式 | 第24-25页 |
| ·正常发育过程中表观遗传编程 | 第25-26页 |
| ·合子前期 | 第25页 |
| ·受精卵 | 第25-26页 |
| ·植入前期 | 第26页 |
| ·克隆过程表观遗传重编程 | 第26-30页 |
| ·DNA 甲基化与去甲基化及其他方式 | 第27-28页 |
| ·印迹基因表达 | 第28-29页 |
| ·X 染色体失活和端粒长度调整 | 第29-30页 |
| ·核移植效率低的主要原因 | 第30-32页 |
| ·核不完全重编程 | 第30-31页 |
| ·克隆胚胎缺陷 | 第31-32页 |
| 第三章 影响猪卵母细胞体外成熟的因素 | 第32-37页 |
| ·猪卵母细胞减数分裂成熟的机理 | 第32-33页 |
| ·影响猪卵母细胞体外成熟的因素 | 第33-36页 |
| ·猪的品种 | 第33页 |
| ·年龄及健康状态 | 第33页 |
| ·营养状态 | 第33-34页 |
| ·卵泡的大小 | 第34页 |
| ·卵巢运输温度 | 第34页 |
| ·卵丘细胞 | 第34页 |
| ·体外培养时间 | 第34页 |
| ·添加物 | 第34-35页 |
| ·渗透压 | 第35-36页 |
| ·水 | 第36页 |
| ·其他 | 第36页 |
| ·猪卵母细胞体外成熟的主要培养液 | 第36-37页 |
| 第四章 猪体细胞核移植技术体系 | 第37-49页 |
| ·成功体细胞克隆猪简要回顾 | 第37-39页 |
| ·供核细胞的准备 | 第39-40页 |
| ·供体细胞类型对核移植效率的影响 | 第39-40页 |
| ·供核细胞的周期 | 第40页 |
| ·供核细胞的准备方案 | 第40页 |
| ·受体卵母细胞的准备 | 第40-41页 |
| ·核移植方法 | 第41-43页 |
| ·融合法 | 第41页 |
| ·胞质内注射法 | 第41-42页 |
| ·无透明带显微操作法 | 第42页 |
| ·“二步”核移植法 | 第42页 |
| ·四倍体胚胎辅助法 | 第42页 |
| ·损伤恢复核移植方法 | 第42-43页 |
| ·卵母细胞去核方法 | 第43-44页 |
| ·盲吸法 | 第43页 |
| ·Hoechst33342 辅助法 | 第43页 |
| ·Spindle-View 系统辅助法 | 第43页 |
| ·挤压法 | 第43页 |
| ·化学法 | 第43页 |
| ·离心法 | 第43-44页 |
| ·末期去核法 | 第44页 |
| ·半卵法 | 第44页 |
| ·功能性去核法 | 第44页 |
| ·融合与激活 | 第44-45页 |
| ·重构胚体外培养 | 第45-46页 |
| ·微滴培养体系 | 第45页 |
| ·孔中孔培养体系 | 第45页 |
| ·明胶-孔系统 | 第45页 |
| ·共培养系统 | 第45-46页 |
| ·贯序培养系统 | 第46页 |
| ·输卵管离体培养系统 | 第46页 |
| ·胚胎移植 | 第46-47页 |
| ·显微工具的制备 | 第47-49页 |
| ·制针前玻璃管的处理 | 第47页 |
| ·固定管的制作 | 第47页 |
| ·去核针和注核针的制作 | 第47-49页 |
| 第五章 体细胞核移植技术的应用前景 | 第49-55页 |
| ·体细胞核移植在生物医学上的应用 | 第49-53页 |
| ·治疗性克隆 | 第49-52页 |
| ·异种器官移植 | 第52-53页 |
| ·生物反应器 | 第53页 |
| ·体细胞核移植在克隆动物及其他领域中的应用 | 第53-55页 |
| ·优良家畜的快速扩繁 | 第53-54页 |
| ·转基因动物 | 第54页 |
| ·克隆宠物 | 第54页 |
| ·濒危及珍稀动物的保护 | 第54页 |
| ·生物学基础研究 | 第54-55页 |
| 试验研究 | 第55-112页 |
| 前言 | 第55-56页 |
| 第六章 供核细胞的准备 | 第56-70页 |
| ·材料和方法 | 第57-62页 |
| ·试验材料与耗材 | 第57页 |
| ·仪器设备 | 第57页 |
| ·试验方法 | 第57-62页 |
| ·结果 | 第62-65页 |
| ·供核细胞的分离、培养与冻存 | 第62-63页 |
| ·胎猪骨髓间充质干细胞生长曲线 | 第63页 |
| ·胎猪骨髓间充质干细胞表面标志的检测 | 第63页 |
| ·胎猪骨髓间充质干细胞细胞周期 | 第63页 |
| ·核型分析 | 第63页 |
| ·胎猪骨髓间充质干细胞电镜观察 | 第63页 |
| ·胎猪骨髓间充质干细胞向神经细胞诱导分化 | 第63-65页 |
| ·讨论 | 第65-66页 |
| ·pFF 及pESF 的分离与培养 | 第65页 |
| ·关于胎猪骨髓间充质干细胞 | 第65-66页 |
| ·供核细胞类型对克隆效率的影响 | 第66页 |
| ·小结 | 第66-70页 |
| 第七章 猪卵母细胞体外成熟培养体系的建立 | 第70-82页 |
| ·材料和方法 | 第70-74页 |
| ·试验材料 | 第70-71页 |
| ·试验方法 | 第71-74页 |
| ·结果 | 第74-77页 |
| ·培养基对猪卵母细胞体外成熟的影响 | 第74-75页 |
| ·外源激素对猪卵母细胞体外成熟的影响 | 第75页 |
| ·血清对猪卵母细胞体外成熟及电激活后孤雌胚胎发育的影响 | 第75-76页 |
| ·猪卵泡液对猪卵母细胞体外成熟及电激活后孤雌胚胎发育的影响 | 第76页 |
| ·表皮生长因子对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响 | 第76页 |
| ·ITS 对猪卵母细胞体外成熟及电激活后孤雌胚胎发育的影响 | 第76-77页 |
| ·颗粒细胞层数对猪卵母细胞体外成熟及电激活后孤雌胚胎发育的影响 | 第77页 |
| ·讨论 | 第77-79页 |
| ·小结 | 第79-82页 |
| 第八章 猪卵母细胞孤雌激活的研究 | 第82-89页 |
| ·材料与方法 | 第82-84页 |
| ·试验材料 | 第82-83页 |
| ·试验方法 | 第83-84页 |
| ·结果 | 第84-85页 |
| ·电场强度对猪孤雌胚胎发育能力的影响 | 第84页 |
| ·不同脉冲时程对猪孤雌胚胎卵裂率及囊胚率的影响 | 第84页 |
| ·不同的激活方法对猪卵母细胞发育能力的影响 | 第84-85页 |
| ·不同的培养液对猪孤雌胚胎发育能力的影响 | 第85页 |
| ·添加胰岛素对猪孤雌胚胎发育能力的影响 | 第85页 |
| ·讨论 | 第85-87页 |
| ·关于电激活参数 | 第85-86页 |
| ·关于激活方法 | 第86页 |
| ·关于孤雌激活后胚胎培养 | 第86-87页 |
| ·小结 | 第87-89页 |
| 第九章 猪体细胞核移植的研究 | 第89-103页 |
| ·材料与方法 | 第89-92页 |
| ·材料 | 第89-90页 |
| ·试验方法 | 第90-92页 |
| ·结果 | 第92-95页 |
| ·电场强度对猪重构胚体外发育的影响 | 第92-93页 |
| ·血清饥饿处理对猪重构胚体外发育的影响 | 第93页 |
| ·供核细胞代数对重构胚体外发育的影响 | 第93页 |
| ·供核细胞类型对猪体细胞核移植效率的影响 | 第93-94页 |
| ·核移植方法对猪体细胞核移植效率的影响 | 第94页 |
| ·不同的培养液对猪体细胞核移植效率的影响 | 第94页 |
| ·表皮生长因子和胰岛素对猪体细胞核移植影响 | 第94-95页 |
| ·克隆胚移植情况 | 第95页 |
| ·讨论 | 第95-98页 |
| ·关于去核 | 第95-96页 |
| ·电激活参数对猪体细胞核移植效率的影响 | 第96页 |
| ·关于供核细胞 | 第96-97页 |
| ·核移植方法对猪体细胞核移植效率的影响 | 第97页 |
| ·关于培养液 | 第97页 |
| ·克隆胚胚胎移植后妊娠的维持 | 第97-98页 |
| ·小结 | 第98-103页 |
| 第十章 从猪孤雌激活及体细胞核移植囊胚中分离胚胎干细胞的初步探索 | 第103-112页 |
| ·材料方法 | 第104-105页 |
| ·材料 | 第104页 |
| ·方法 | 第104-105页 |
| ·结果 | 第105-107页 |
| ·pPB 和pNTB 在饲养层上生长行为及类 ESCs 的分离培养 | 第105-106页 |
| ·类pPESCs 和类pNTESCs 集落的形态学观察 | 第106页 |
| ·类pPESCs 和类pNTESCs 分离效率的比较 | 第106-107页 |
| ·类pPESCs 和类pNTESCs 的初步鉴定 | 第107页 |
| ·讨论 | 第107-109页 |
| ·胚胎干细胞分离培养方法 | 第107页 |
| ·孤雌激活源胚胎干细胞 | 第107页 |
| ·体细胞核移植源胚胎干细胞 | 第107-108页 |
| ·关于如何提高pPESCs 和pNTESCs 的分离效率的探讨 | 第108-109页 |
| ·小结 | 第109-112页 |
| 结论 | 第112-113页 |
| 本研究创新点 | 第113页 |
| 进一步研究的课题 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-129页 |
| 英文缩略词表 | 第129-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
| 个人简历 | 第132页 |
