| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-36页 |
| ·枯草芽孢杆菌简介 | 第11页 |
| ·原核生物中启动子的结构及调控方式 | 第11-13页 |
| ·启动子的结构 | 第11-12页 |
| ·启动子的结构对表达效率的影响 | 第12-13页 |
| ·启动子活性的调控方式 | 第13页 |
| ·枯草芽孢杆菌中的σ因子 | 第13-16页 |
| ·大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中RNA聚合酶的比较 | 第14页 |
| ·枯草芽孢杆菌中的σ因子 | 第14-16页 |
| ·枯草芽孢杆菌中的电子传递链 | 第16-18页 |
| ·枯草芽孢杆菌中的终端氧化酶 | 第17-18页 |
| ·核黄素的工业化生产 | 第18-19页 |
| ·核黄素的理化性质功能与用途 | 第18-19页 |
| ·核黄素的工业化生产 | 第19页 |
| ·枯草芽孢杆菌中核黄素的生物合成 | 第19-23页 |
| ·核黄素操纵子结构 | 第19-21页 |
| ·核黄素操纵子结构基因所编码的酶及其功能 | 第21页 |
| ·核黄素生物合成途径 | 第21-23页 |
| ·产核黄素枯草芽孢杆菌工程菌的构建 | 第23-26页 |
| ·基于诱变技术的产核黄素工程菌的构建 | 第23-24页 |
| ·基于基因工程技术的产核黄素工程菌的构建 | 第24-25页 |
| ·基于基因组重排技术的产核黄素工程菌的构建 | 第25-26页 |
| ·代谢工程 | 第26-33页 |
| ·代谢通量分析 | 第27页 |
| ·代谢通量分析最新进展 | 第27-31页 |
| ·产核黄素枯草芽孢杆菌代谢工程 | 第31-33页 |
| ·选题背景及研究思路 | 第33-36页 |
| ·选题背景 | 第33页 |
| ·技术路线与研究内容 | 第33-36页 |
| 第二章 枯草芽孢杆菌启动子活性的比较 | 第36-53页 |
| ·实验材料 | 第36-40页 |
| ·质粒与菌种 | 第36-37页 |
| ·实验仪器 | 第37-38页 |
| ·实验试剂 | 第38-39页 |
| ·培养基 | 第39页 |
| ·主要溶液 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-45页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第40-41页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第41页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第41页 |
| ·DNA片段的回收纯化 | 第41-42页 |
| ·PCR反应体系 | 第42-43页 |
| ·酶切体系 | 第43页 |
| ·内切酶的失活 | 第43页 |
| ·连接体系的建立 | 第43-44页 |
| ·3’凹端的补平 | 第44页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第44页 |
| ·枯草芽孢杆菌Spizizen转化 | 第44页 |
| ·枯草芽孢杆菌染色体DNA的提取 | 第44-45页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性测定 | 第45页 |
| ·实验结果与讨论 | 第45-52页 |
| ·启动子-LacZ融合片断的构建 | 第45-49页 |
| ·启动子活性的比较 | 第49-52页 |
| ·本章小结 | 第52-53页 |
| 第三章 核黄素操纵子启动子替换对核黄素生物合成的影响 | 第53-71页 |
| ·实验材料 | 第54-56页 |
| ·质粒与菌种 | 第54-55页 |
| ·实验仪器 | 第55页 |
| ·实验试剂 | 第55页 |
| ·培养基 | 第55页 |
| ·主要溶液 | 第55-56页 |
| ·实验方法 | 第56-58页 |
| ·利用α互补筛选目的转化子 | 第56页 |
| ·发酵液中核黄素的测定 | 第56-57页 |
| ·枯草芽孢杆菌质粒的大规模提取 | 第57-58页 |
| ·工程菌遗传稳定性的测定方法 | 第58页 |
| ·实验结果与讨论 | 第58-70页 |
| ·启动子-rib融合片断的构建 | 第58-65页 |
| ·含启动子-rib融合片断的枯草芽孢杆菌整合型质粒的构建 | 第65-66页 |
| ·含启动子-rib融合片断的产核黄素基因工程菌的构建 | 第66页 |
| ·产核黄素基因工程菌生物合成能力的比较 | 第66-68页 |
| ·B. subtilis PK和B. subtilis RH::[PR863]n核黄素合成能力与菌种稳定性比较 | 第68页 |
| ·含P43-rib融合片断的游离型质粒的构建 | 第68-69页 |
| ·pXJ96 在产核黄素枯草芽孢杆菌中的表达 | 第69-70页 |
| ·本章小结 | 第70-71页 |
| 第四章 产核黄素工程菌B. subtils PK 代谢能力的研究 | 第71-79页 |
| ·实验材料 | 第71-72页 |
| ·菌种 | 第71-72页 |
| ·实验方法 | 第72页 |
| ·发酵液中葡萄糖含量的测定 | 第72页 |
| ·结果与讨论 | 第72-78页 |
| ·B. subtilis PK 代谢特性的考察 | 第72-73页 |
| ·B. subtilis 生化反应网络模型的建立 | 第73-74页 |
| ·B. subtilis 生化反应网络模型条件数的计算 | 第74页 |
| ·B. subtilis PK 理论值与实际值的比较 | 第74-78页 |
| ·本章小结 | 第78-79页 |
| 第五章ribA 扩增对核黄素生物合成能力的影响 | 第79-98页 |
| ·实验材料 | 第80-82页 |
| ·质粒与菌种 | 第80-81页 |
| ·实验仪器 | 第81页 |
| ·实验试剂 | 第81页 |
| ·培养基 | 第81页 |
| ·主要溶液 | 第81-82页 |
| ·实验方法 | 第82-83页 |
| ·菌落PCR | 第82页 |
| ·枯草芽孢杆菌总RNA 的提取 | 第82-83页 |
| ·总RNA 的分析和定量 | 第83页 |
| ·总RNA 中基因组DNA 的去除 | 第83页 |
| ·实验结果与讨论 | 第83-96页 |
| ·含P43-ribA 融合片断整合型质粒的构建 | 第83-87页 |
| ·ribA 基因扩增的产核黄素工程菌的构建 | 第87-88页 |
| ·ribA 基因扩增的产核黄素工程菌核黄素生物合成能力比较 | 第88-89页 |
| ·ribA 基因扩增工程菌及其受体菌mRNA 表达水平表征 | 第89-96页 |
| ·本章小结 | 第96-98页 |
| 第六章cyd 基因敲除对工程菌代谢特性的影响 | 第98-120页 |
| ·实验材料 | 第99-101页 |
| ·质粒与菌种 | 第99-100页 |
| ·实验仪器 | 第100页 |
| ·实验试剂 | 第100-101页 |
| ·培养基 | 第101页 |
| ·主要溶液 | 第101页 |
| ·实验方法 | 第101-102页 |
| ·菌体生长曲线的测定 | 第101页 |
| ·发酵液中有机酸的测定 | 第101-102页 |
| ·实验结果与讨论 | 第102-119页 |
| ·cyd 基因缺失菌株的构建 | 第102-108页 |
| ·cyd 基因缺失菌株及其受体菌生理参数表征 | 第108-111页 |
| ·cyd 基因缺失对工程菌维持能的影响 | 第111-112页 |
| ·cyd 基因缺失菌株及其受体菌核黄素生物合成能力比较 | 第112-113页 |
| ·对cyd 基因缺失工程菌及其受体菌进行发酵 | 第113-115页 |
| ·发酵液中有机酸的测定 | 第115-116页 |
| ·cyd 基因缺失工程菌及其受体菌代谢通量分析 | 第116-119页 |
| ·本章小结 | 第119-120页 |
| 第七章 通过基因组重排技术改进产核黄素B. subtilis 的性能 | 第120-132页 |
| ·实验材料 | 第121-122页 |
| ·菌种 | 第121页 |
| ·实验仪器 | 第121页 |
| ·实验试剂 | 第121页 |
| ·培养基 | 第121-122页 |
| ·主要溶液 | 第122页 |
| ·实验方法 | 第122-123页 |
| ·原生质体的制备及再生 | 第122-123页 |
| ·原生质体融合方法 | 第123页 |
| ·实验结果与讨论 | 第123-131页 |
| ·亲株生长曲线的测定 | 第123-124页 |
| ·最适溶菌酶浓度的确定 | 第124-125页 |
| ·原生质体融合 | 第125-126页 |
| ·融合子发酵初筛和目的融合子的鉴定 | 第126页 |
| ·目的融合子与其亲株部分特性的比较 | 第126-130页 |
| ·B. subtilis RP/pXJ96 的流加发酵 | 第130-131页 |
| ·本章小结 | 第131-132页 |
| 第八章 结论与展望 | 第132-136页 |
| ·结论和创新点 | 第132-134页 |
| ·主要结论 | 第132-133页 |
| ·创新点 | 第133-134页 |
| ·展望 | 第134-136页 |
| 参考文献 | 第136-147页 |
| 附录1 理论通量计算程序 | 第147-149页 |
| 附录2 实际通量计算程序 | 第149-153页 |
| 发表论文和科研情况说明 | 第153-154页 |
| 致谢 | 第154页 |
