| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 前言 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-26页 |
| ·核黄素的生产 | 第9页 |
| ·产核黄素基因工程菌研究现状 | 第9-10页 |
| ·B.subtilis产核黄素工程菌 | 第10-12页 |
| ·B.subtilis核黄素操纵子结构 | 第10-11页 |
| ·B.subtilis核黄素操纵子编码产物的功能 | 第11-12页 |
| ·B.subtilis产核黄素工程菌的优点 | 第12页 |
| ·B.subtilis 合成核黄素的代谢工程 | 第12-17页 |
| ·代谢工程的基本原理 | 第12-13页 |
| ·B.subtilis 合成核黄素的代谢分析 | 第13-15页 |
| ·B.subtilis产核黄素工程菌构建思路 | 第15-17页 |
| ·B.subtilis 中的同源重组 | 第17-19页 |
| ·RecA蛋白的功能 | 第17-18页 |
| ·同源重组的相关基因簇及表达产物 | 第18-19页 |
| ·枯草芽孢杆菌中质粒的复制及稳定性 | 第19-20页 |
| ·B.subtilis 整合型质粒 | 第20-24页 |
| ·整合型质粒的原理 | 第20-21页 |
| ·整合型质粒的用途 | 第21-24页 |
| ·常见的枯草芽孢杆菌整合型质粒 | 第24页 |
| ·克隆位点整合的质粒 | 第24页 |
| ·定点整合的质粒 | 第24页 |
| ·本文的主要研究内容 | 第24-26页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第26-41页 |
| ·实验材料 | 第26-32页 |
| ·菌种和质粒 | 第26-27页 |
| ·主要实验仪器 | 第27页 |
| ·药品与试剂 | 第27-30页 |
| ·主要药品 | 第27-28页 |
| ·主要试剂 | 第28-30页 |
| ·培养基 | 第30-32页 |
| ·核黄素的发酵和测定方法 | 第32-33页 |
| ·菌体生长曲线的测定 | 第32页 |
| ·菌种的纯化和保藏 | 第32页 |
| ·发酵初筛 | 第32页 |
| ·发酵液中核黄素的测定 | 第32-33页 |
| ·基因工程方法 | 第33-41页 |
| ·原生质体转化 | 第33-34页 |
| ·原生质体的制备 | 第33页 |
| ·原生质体转化 | 第33-34页 |
| ·Spizizen 转化 | 第34页 |
| ·质粒的小规模提取 | 第34页 |
| ·枯草芽孢杆菌质粒的大规模提取 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第36页 |
| ·革兰氏阳性菌染色体DNA的提取 | 第36页 |
| ·用于转化和构建载体的DNA片段的制备 | 第36-38页 |
| ·PCR 扩增recA 基因 | 第36-37页 |
| ·PCR扩增核黄素操纵子 | 第37页 |
| ·PCR 扩增ribA 结构基因 | 第37-38页 |
| ·DNA 的酶切和连接 | 第38-39页 |
| ·DNA的酶切 | 第38页 |
| ·DNA的连接 | 第38-39页 |
| ·DNA 片段的回收和纯化 | 第39-41页 |
| ·琼脂糖凝胶中DNA片段的回收和纯化 | 第39页 |
| ·水溶液中DNA片段的纯化和浓缩 | 第39-41页 |
| 第三章 实验结果和讨论 | 第41-55页 |
| ·受体菌的改造 | 第42-44页 |
| ·recA基因的扩增及酶切鉴定 | 第43页 |
| ·DNA片段的原生质体转化及recA+菌株的筛选 | 第43-44页 |
| ·产核黄素整合型表达载体的构建 | 第44-49页 |
| ·SPO2-rib 整合型表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·P43-rib 整合型表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·P1-rib（原启动子）产核黄素整合型表达载体的构建 | 第47-49页 |
| ·PCR扩增枯草杆菌核黄素操纵子 | 第48页 |
| ·整合型表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·整合型表达载体在E.coli中的表达 | 第49页 |
| ·整合型表载体在B.subtilis中的表达 | 第49-52页 |
| ·质粒Spizizen法转化B.subtilis D3 | 第50页 |
| ·转化子的整合方式和核黄素产量 | 第50-52页 |
| ·ribA 基因载体的构建和表达 | 第52-55页 |
| ·PCR扩增枯草杆菌ribA结构基因 | 第52-53页 |
| ·克隆载体的构建 | 第53-55页 |
| 第四章 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 附录 | 第60-71页 |
| Ⅰ 生化名词缩写表 | 第60-62页 |
| Ⅱ pUC86构建示意图 | 第62-64页 |
| Ⅲ pUC83构建示意图 | 第64-66页 |
| Ⅳ pDRI 构建示意图 | 第66-67页 |
| Ⅴ pDRII构建示意图 | 第67-68页 |
| Ⅵ pDRIII 构建示意图 | 第68-69页 |
| Ⅶ 常用限制性内切酶的在不同缓冲液中的活性 | 第69-71页 |
| 论文发表 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |