| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 论文综述部分 c-Src蛋白的结构、功能及其研究应用进展 | 第6-31页 |
| 前言 | 第7页 |
| 1 c-src因及其蛋白的发现 | 第7-8页 |
| 2 c-Src蛋白组成及结构 | 第8-14页 |
| 2．1 一级结构 | 第8-10页 |
| 2．2 二级结构 | 第10-13页 |
| 2．2．1 二级结构详细分析 | 第10-12页 |
| 2．2．2 二级结构域组成 | 第12-13页 |
| 2．3 空间结构 | 第13-14页 |
| 3 c-Src蛋白的活性调节机制 | 第14-16页 |
| 3．1 c-src基因的转录调控 | 第14-15页 |
| 3．2 c-Src蛋白翻译后调控 | 第15-16页 |
| 4 c-Src的细胞功能 | 第16-21页 |
| 4．1 c-Src蛋白和信号转导通路 | 第16-18页 |
| 4．2 c-Src蛋白和细胞行为调控 | 第18-21页 |
| 4．2．1 细胞迁移 | 第18页 |
| 4．2．2 细胞增殖 | 第18-19页 |
| 4．2．3 细胞存活 | 第19-20页 |
| 4．2．4 其它 | 第20-21页 |
| 5 c-Src与人类疾病相关 | 第21-25页 |
| 5．1 Src蛋白与肿瘤 | 第21-25页 |
| 5．1．1 肿瘤的发生 | 第22-23页 |
| 5．1．2 肿瘤的发展 | 第23页 |
| 5．1．3 骨转移 | 第23-25页 |
| 5．2 心脑血管疾病 | 第25页 |
| 6 c-Src应用前景展望 | 第25-26页 |
| 参考文献 | 第26-31页 |
| 论文实验部分 人c-Src全长基因的克隆及其在大肠杆菌中表达的研究 | 第31-69页 |
| 前言 | 第32-34页 |
| 1 实验材料和仪器 | 第34-39页 |
| 1．1 细胞及菌种 | 第34-35页 |
| 1．2 质粒 | 第35页 |
| 1．3 酶 | 第35页 |
| 1．4 分子量标准 | 第35页 |
| 1．5 各种试剂盒 | 第35-36页 |
| 1．6 缓冲液及其他溶液 | 第36-37页 |
| 1．7 培养基 | 第37页 |
| 1．8 其它主要试剂和商品来源 | 第37-38页 |
| 1．9 主要仪器设备 | 第38-39页 |
| 2 实验方法与步骤 | 第39-48页 |
| 2．1 PCR扩增 | 第39-40页 |
| 2．2 组织细胞总 RNA提取(Trizol法) | 第40-41页 |
| 2．3 质粒 DNA抽提 | 第41-42页 |
| 2．4 酶切与 DNA回收 | 第42-43页 |
| 2．5 连接重组 | 第43-44页 |
| 2．6 大肠杆菌转化及筛选 | 第44-45页 |
| 2．7 蛋白质的表达与鉴定 | 第45-46页 |
| 2．8 蛋白纯化 | 第46-47页 |
| 2．9 活性测定 | 第47-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-63页 |
| 3．1 hc-src基因的获得 | 第48-51页 |
| 3．1．1 从获赠c-src/ pcDNA质粒来源 | 第48-49页 |
| 3．1．2 从人肺腺癌细胞来源 | 第49-51页 |
| 3．2 克隆重组构建 | 第51-53页 |
| 3．2．1 与 T载体的克隆重组 | 第51-52页 |
| 3．2．2 阳性克隆重组子的序列测定 | 第52-53页 |
| 3．3 表达重组构建 | 第53-57页 |
| 3．3．1 构建pET表达重组 | 第53-55页 |
| 3．3．2 构建pP_(Ro)EX表达重组 | 第55-57页 |
| 3．4 蛋白表达 | 第57-60页 |
| 3．4．1 确定工程菌 | 第57-58页 |
| 3．4．2 优化表达条件 | 第58-60页 |
| 3．5 蛋白纯化 | 第60-61页 |
| 3．6 激酶活性测定 | 第61-63页 |
| 4 讨论 | 第63-66页 |
| 4．1 hc-Src基因的获得 | 第63-64页 |
| 4．2 表达重组的构建 | 第64-65页 |
| 4．3 真核基因在大肠杆菌中的表达 | 第65-66页 |
| 5 结论与展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-69页 |
| 附录一 pUCm-T质粒图谱 | 第69-70页 |
| 附录二 pET-28a(+)质粒图谱 | 第70-71页 |
| 附录三 pET-22b(+)质粒图谱 | 第71-72页 |
| 附录四 pP_(RO)EX HTC质粒图谱 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
