| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-14页 |
| 1 前言 | 第14-34页 |
| ·RIP的定义和分类 | 第14-15页 |
| ·RIP的分布 | 第15-17页 |
| ·细菌RIP | 第15页 |
| ·真菌RIP | 第15-16页 |
| ·植物RIP | 第16-17页 |
| ·在不同科别中的分布 | 第16页 |
| ·在组织器官和细胞中的分布 | 第16-17页 |
| ·RIP的作用底物和酶学活性 | 第17-18页 |
| ·RIP的结构与功能 | 第18-21页 |
| ·初级结构与功能 | 第18-20页 |
| ·氨基酸组成特点和重要残基 | 第18-19页 |
| ·二硫键 | 第19页 |
| ·糖基 | 第19-20页 |
| ·空间结构与功能 | 第20-21页 |
| ·RIP在宿主中的生理功能和宿主对RIP的调控 | 第21-22页 |
| ·生理功能 | 第21页 |
| ·宿主植株对自身RIP的调控 | 第21-22页 |
| ·RIP在异源植株中的行为及在异源生物中的表达 | 第22-26页 |
| ·RIP在异源植株中的行为 | 第22-24页 |
| ·激活防卫反应 | 第22-23页 |
| ·加工与遗传 | 第23页 |
| ·扰乱异源植株 | 第23-24页 |
| ·RIP在异源生物中的表达 | 第24-26页 |
| ·利用大肠杆菌发酵生产 | 第24-25页 |
| ·利用酵母发酵生产 | 第25页 |
| ·转基因植物 | 第25页 |
| ·昆虫生物反应器 | 第25-26页 |
| ·RIP的应用 | 第26-31页 |
| ·在医学上的应用 | 第26-28页 |
| ·抗生育 | 第26页 |
| ·抗肿瘤 | 第26-27页 |
| ·抗病毒 | 第27-28页 |
| ·在植物保护上的应用 | 第28-31页 |
| ·防治农业害虫 | 第28页 |
| ·抵抗植物病原菌 | 第28-29页 |
| ·控制植物病毒 | 第29-31页 |
| ·其它应用 | 第31页 |
| ·问题与展望 | 第31-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-48页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·供试植物 | 第34页 |
| ·供试毒源 | 第34页 |
| ·层析介质 | 第34页 |
| ·菌株 | 第34页 |
| ·载体 | 第34页 |
| ·试剂及酶类 | 第34-35页 |
| ·主要实验仪器 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-48页 |
| ·总蛋白和碱性蛋白的制备 | 第35-36页 |
| ·抗TMV活性评价 | 第36页 |
| ·抗TMV蛋白的分离纯化 | 第36-38页 |
| ·样品处理 | 第36页 |
| ·(NH_4)_2SO_4分级沉淀 | 第36页 |
| ·亲和层析 | 第36页 |
| ·阳离子交换 | 第36-38页 |
| ·SDS／PAGE电泳 | 第38页 |
| ·N端序列测定及其分析 | 第38页 |
| ·植物总DNA的提取 | 第38-39页 |
| ·绞股蓝总RNA的提取 | 第39页 |
| ·引物设计和PCR扩增 | 第39-41页 |
| ·葫芦科RIP基因的快速筛选 | 第39页 |
| ·绞股蓝RIP DNA片段的克隆 | 第39-41页 |
| ·RACE扩增 | 第41页 |
| ·克隆操作 | 第41-42页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳及DNA片段的回收 | 第41页 |
| ·连接载体 | 第41页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的简易制备 | 第41-42页 |
| ·转化 | 第42页 |
| ·质粒的提取 | 第42页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第42页 |
| ·克隆子序列的测定及分析 | 第42页 |
| ·生物信息学分析 | 第42-43页 |
| ·反向互补及翻译 | 第42页 |
| ·基因或氨基酸序列比较与同源性分析 | 第42-43页 |
| ·蛋白质理化性质分析 | 第43页 |
| ·蛋白质的亚细胞定位 | 第43页 |
| ·蛋白质的二级结构预测 | 第43页 |
| ·蛋白质空间结构的同源模建 | 第43页 |
| ·3'UTR的二级结构预测 | 第43页 |
| ·系统发育分析 | 第43页 |
| ·原核表达 | 第43-44页 |
| ·融合表达载体的构建 | 第43页 |
| ·天然表达载体的构建 | 第43页 |
| ·诱导表达 | 第43-44页 |
| ·诱导表达产物的粗提取 | 第44页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第44页 |
| ·pEmu-609和pEmu-831植物表达载体的构建 | 第44页 |
| ·ZW-pK植物表达载体的构建 | 第44页 |
| ·三亲交配法转化农杆菌 | 第44-45页 |
| ·重组农杆菌对烟草品种K326的转化 | 第45-46页 |
| ·转基因植物的分子鉴定 | 第46-48页 |
| ·PCR扩增和序列测定 | 第46页 |
| ·外源片段转录的初步检测 | 第46-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-87页 |
| ·绞股蓝RIP的分离纯化 | 第48-51页 |
| ·硫酸铵分级沉淀 | 第48页 |
| ·亲和层析 | 第48页 |
| ·阳离子交换 | 第48-49页 |
| ·N-端序列测定与比较 | 第49-51页 |
| ·从葫芦科植物中快速筛选RIP新基因 | 第51-55页 |
| ·PCR扩增 | 第51页 |
| ·克隆和序列测定 | 第51页 |
| ·序列比较 | 第51-55页 |
| ·绞股蓝RIP的分子克隆和序列分析 | 第55-79页 |
| ·DNA片段克隆 | 第55-58页 |
| ·RACE扩增和cDNA克隆 | 第58-60页 |
| ·5'RACE扩增和序列分析 | 第58-59页 |
| ·3'RACE扩增和序列测定 | 第59页 |
| ·cDNA克隆和序列测定 | 第59-60页 |
| ·DNA克隆 | 第60-61页 |
| ·绞股蓝RIP基因家族及其编码的氨基酸序列分析 | 第61-74页 |
| ·绞股蓝RIP全长cDNA及其编码氨基酸的生物信息学分析 | 第74-79页 |
| ·碱基组成比较 | 第74页 |
| ·密码子偏倚性比较 | 第74-75页 |
| ·分子量、等电点以及氨基酸组成比较 | 第75-76页 |
| ·二级结构含量比较 | 第76页 |
| ·BLAST拟南芥基因组 | 第76-77页 |
| ·功能位点预测 | 第77-79页 |
| ·空间结构的同源模建 | 第79页 |
| ·在大肠杆菌中表达绞股蓝RIP | 第79-83页 |
| ·融合表达 | 第79-82页 |
| ·融合表达载体的构建 | 第79-81页 |
| ·诱导表达和读码框的确认 | 第81-82页 |
| ·天然表达 | 第82-83页 |
| ·天然表达载体的构建 | 第82页 |
| ·诱导表达和读码框的确认 | 第82-83页 |
| ·抗TMV活性测定 | 第83页 |
| ·绞股蓝RIP基因对烟草的转化 | 第83-87页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第83-85页 |
| ·pEmu-609和pEmu-831植物表达载体的构建 | 第83-84页 |
| ·ZW-pK植物表达载体的构建 | 第84-85页 |
| ·转化农杆菌 | 第85页 |
| ·ZW-pK-4404转化烟草叶盘 | 第85-87页 |
| ·转化、筛选和再生 | 第85页 |
| ·分子鉴定 | 第85-87页 |
| 4 讨论 | 第87-95页 |
| 总结 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 附录1: 缩写词和英汉对照 | 第110-113页 |
| 附录2: 所用试剂和缓冲液的配制 | 第113-120页 |
| 附录3: 攻博期间发表及整理的论文 | 第120-121页 |
| 附录4: 攻博期间登录的RIP及其基因 | 第121-122页 |
| 附录5: 绞股蓝RIP N-端氨基酸序列测定图谱 | 第122-125页 |
