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杏自交不亲和相关基因的克隆及表达分析

中文摘要第1-11页
1 引言第11-22页
 1.1 自交不亲和性的分类第11-13页
 1.2 配子体自交不亲和性的分子基础第13-17页
 1.3 孢子体自交不亲和性的分子基础第17-18页
 1.4 自交不亲和性的起源与进化第18页
 1.5 果树自交不亲和的研究进展第18-21页
  1.5.1 S-蛋白的分离鉴定第18-19页
  1.5.2 S-蛋白序列测定及基因片断的克隆第19-21页
 1.6 本研究的目的和意义第21-22页
2 材料与方法第22-37页
 2.1 材料第22页
 2.2 方法第22-37页
  2.2.1 花柱离体培养第22-23页
  2.2.2 花柱原位印迹分析第23页
  2.2.3 花柱蛋白对花粉萌发的影响第23-24页
   2.2.3.1 花柱蛋白的制备第23页
   2.2.3.2 花柱蛋白对花粉萌发的作用第23-24页
  2.2.4 DNA的提取第24页
  2.2.5 RNA的提取第24-25页
  2.2.6 cDNA链的合成第25-26页
  2.2.7 RACE扩增第26-27页
  2.2.8 特异片段的回收、克隆及鉴定第27-30页
   2.2.8.1 特异片段的回收第27-28页
   2.2.8.2 特异片段的克隆与鉴定第28-30页
  2.2.9 插入片段的序列测定第30-31页
  2.2.10 序列比较和系统树的构建第31页
  2.2.11 S-等位基因专一性PCR扩增反应体系和反应条件第31页
  2.2.12 Southern blotting第31-33页
  2.2.13 Northern blotting第33页
  2.2.14 Western blotting第33-37页
   2.2.14.1 抗体的制备第33-35页
   2.2.14.2 抗原(花柱蛋白质)的制备第35页
   2.2.14.3 Western blotting第35-37页
第一部分 品种间亲和性分析第37-46页
 1 结果与分析第37-46页
  1.1 花柱离体培养第37-42页
   1.1.1 自交不亲和品种巴旦水杏和自交亲和品种凯特杏的花柱离体培养第37-38页
   1.1.2 不同品种自交后离体花柱培养花粉管的生长第38-39页
   1.1.3 杂交亲和组合离体花柱培养花粉管的生长第39-41页
   1.1.4 杂交不亲和组合离体花柱培养花粉管的生长第41-42页
  1.2 花柱蛋白对花粉萌发的作用第42-44页
   1.2.1 花柱蛋白浓度对离体花粉萌发的影响第43页
   1.2.2 花柱蛋白浓度对花粉管伸长的影响第43-44页
  1.3 花柱S-RNases活性原位印迹第44-46页
第二部分 S-RNases基因的克隆和序列分析第46-69页
 2 结果与分析第46-69页
  2.1 巴旦水杏、红玉杏、凯特杏S-RNase cDNA的RT-PCR第46页
  2.2 阳性克隆的PCR鉴定第46-48页
  2.3 重组质粒的酶切第48-49页
  2.4 RT-PCR所得到的中间片段的序列分析第49-50页
  2.5 凯特杏S-RNase基因cDNA序列全长和巴旦水杏、红玉杏的3’端cDNA序列第50-52页
  2.6 基因组的中间片段第52-54页
  2.7 基因组DNA在C2和C5区段内含子检测第54-58页
   2.7.1 巴旦水杏的PAlcDNA和与对应的基因组DNAS_8碱基序列比较第54-56页
   2.7.2 红玉杏PA2cDNA和与相对应的基因组DNAS_(10)的序列比较第56-57页
   2.7.3 凯特杏的PA3cDNA和与相对应的基因组DNAS_(10)的比较结果第57-58页
  2.8 蔷薇科S-RNases氨基酸序列比较第58-62页
  2.9 蔷薇科S-RNases系统树的构建第62-65页
  2.10 S-等位基因专一性PCR扩增第65-66页
  2.11 等位基因专一性PCR产物的Southern杂交第66页
  2.12 S-RNase基因多态性分析第66-69页
第三部分 S-RNase基因的表达分析第69-85页
 3 结果与分析第69-76页
  3.1 Northern Blotting结果第69-72页
   3.1.1 S-基因表达部位的分析第69-70页
   3.1.2 不同时期mRNA表达量第70-72页
  3.2 Western Blotting第72-76页
   3.2.1 巴旦水杏、凯特杏花柱发育不同时期S-蛋白的表达第72-74页
   3.2.2 授粉后48小时后蛋白的变化第74-76页
 4 讨论第76-84页
  4.1 花粉在花柱中生长受抑的部位及可能的原因第76-77页
  4.2 花柱蛋白与自交不亲和的关系第77-78页
  4.3 蔷薇科家族S-核糖核酸酶的特性分析第78-80页
  4.4 凯特杏自交亲和的原因第80-81页
  4.5 杏树种上S-等位基因专一性PCR扩增鉴定基因型方法的评价第81-84页
 5 结论第84-85页
参考文献第85-99页
英文摘要第99-101页
附录第101-105页
致谢第105页

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