中文摘要 | 第1-11页 |
1 引言 | 第11-22页 |
1.1 自交不亲和性的分类 | 第11-13页 |
1.2 配子体自交不亲和性的分子基础 | 第13-17页 |
1.3 孢子体自交不亲和性的分子基础 | 第17-18页 |
1.4 自交不亲和性的起源与进化 | 第18页 |
1.5 果树自交不亲和的研究进展 | 第18-21页 |
1.5.1 S-蛋白的分离鉴定 | 第18-19页 |
1.5.2 S-蛋白序列测定及基因片断的克隆 | 第19-21页 |
1.6 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
2 材料与方法 | 第22-37页 |
2.1 材料 | 第22页 |
2.2 方法 | 第22-37页 |
2.2.1 花柱离体培养 | 第22-23页 |
2.2.2 花柱原位印迹分析 | 第23页 |
2.2.3 花柱蛋白对花粉萌发的影响 | 第23-24页 |
2.2.3.1 花柱蛋白的制备 | 第23页 |
2.2.3.2 花柱蛋白对花粉萌发的作用 | 第23-24页 |
2.2.4 DNA的提取 | 第24页 |
2.2.5 RNA的提取 | 第24-25页 |
2.2.6 cDNA链的合成 | 第25-26页 |
2.2.7 RACE扩增 | 第26-27页 |
2.2.8 特异片段的回收、克隆及鉴定 | 第27-30页 |
2.2.8.1 特异片段的回收 | 第27-28页 |
2.2.8.2 特异片段的克隆与鉴定 | 第28-30页 |
2.2.9 插入片段的序列测定 | 第30-31页 |
2.2.10 序列比较和系统树的构建 | 第31页 |
2.2.11 S-等位基因专一性PCR扩增反应体系和反应条件 | 第31页 |
2.2.12 Southern blotting | 第31-33页 |
2.2.13 Northern blotting | 第33页 |
2.2.14 Western blotting | 第33-37页 |
2.2.14.1 抗体的制备 | 第33-35页 |
2.2.14.2 抗原(花柱蛋白质)的制备 | 第35页 |
2.2.14.3 Western blotting | 第35-37页 |
第一部分 品种间亲和性分析 | 第37-46页 |
1 结果与分析 | 第37-46页 |
1.1 花柱离体培养 | 第37-42页 |
1.1.1 自交不亲和品种巴旦水杏和自交亲和品种凯特杏的花柱离体培养 | 第37-38页 |
1.1.2 不同品种自交后离体花柱培养花粉管的生长 | 第38-39页 |
1.1.3 杂交亲和组合离体花柱培养花粉管的生长 | 第39-41页 |
1.1.4 杂交不亲和组合离体花柱培养花粉管的生长 | 第41-42页 |
1.2 花柱蛋白对花粉萌发的作用 | 第42-44页 |
1.2.1 花柱蛋白浓度对离体花粉萌发的影响 | 第43页 |
1.2.2 花柱蛋白浓度对花粉管伸长的影响 | 第43-44页 |
1.3 花柱S-RNases活性原位印迹 | 第44-46页 |
第二部分 S-RNases基因的克隆和序列分析 | 第46-69页 |
2 结果与分析 | 第46-69页 |
2.1 巴旦水杏、红玉杏、凯特杏S-RNase cDNA的RT-PCR | 第46页 |
2.2 阳性克隆的PCR鉴定 | 第46-48页 |
2.3 重组质粒的酶切 | 第48-49页 |
2.4 RT-PCR所得到的中间片段的序列分析 | 第49-50页 |
2.5 凯特杏S-RNase基因cDNA序列全长和巴旦水杏、红玉杏的3’端cDNA序列 | 第50-52页 |
2.6 基因组的中间片段 | 第52-54页 |
2.7 基因组DNA在C2和C5区段内含子检测 | 第54-58页 |
2.7.1 巴旦水杏的PAlcDNA和与对应的基因组DNAS_8碱基序列比较 | 第54-56页 |
2.7.2 红玉杏PA2cDNA和与相对应的基因组DNAS_(10)的序列比较 | 第56-57页 |
2.7.3 凯特杏的PA3cDNA和与相对应的基因组DNAS_(10)的比较结果 | 第57-58页 |
2.8 蔷薇科S-RNases氨基酸序列比较 | 第58-62页 |
2.9 蔷薇科S-RNases系统树的构建 | 第62-65页 |
2.10 S-等位基因专一性PCR扩增 | 第65-66页 |
2.11 等位基因专一性PCR产物的Southern杂交 | 第66页 |
2.12 S-RNase基因多态性分析 | 第66-69页 |
第三部分 S-RNase基因的表达分析 | 第69-85页 |
3 结果与分析 | 第69-76页 |
3.1 Northern Blotting结果 | 第69-72页 |
3.1.1 S-基因表达部位的分析 | 第69-70页 |
3.1.2 不同时期mRNA表达量 | 第70-72页 |
3.2 Western Blotting | 第72-76页 |
3.2.1 巴旦水杏、凯特杏花柱发育不同时期S-蛋白的表达 | 第72-74页 |
3.2.2 授粉后48小时后蛋白的变化 | 第74-76页 |
4 讨论 | 第76-84页 |
4.1 花粉在花柱中生长受抑的部位及可能的原因 | 第76-77页 |
4.2 花柱蛋白与自交不亲和的关系 | 第77-78页 |
4.3 蔷薇科家族S-核糖核酸酶的特性分析 | 第78-80页 |
4.4 凯特杏自交亲和的原因 | 第80-81页 |
4.5 杏树种上S-等位基因专一性PCR扩增鉴定基因型方法的评价 | 第81-84页 |
5 结论 | 第84-85页 |
参考文献 | 第85-99页 |
英文摘要 | 第99-101页 |
附录 | 第101-105页 |
致谢 | 第105页 |