| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-27页 |
| ·概述 | 第12-14页 |
| ·中温酸性 α-淀粉酶的研究进展 | 第14-24页 |
| ·酶源及酶催化特性的生物多样性 | 第14-15页 |
| ·中温酸性α-淀粉酶的发酵生产及分离纯化 | 第15-17页 |
| ·中温酸性α-淀粉酶基因克隆和表达的研究 | 第17-18页 |
| ·α-淀粉酶耐酸性机理的研究 | 第18-21页 |
| ·定向进化技术用于α-淀粉酶的耐酸性改造 | 第21-23页 |
| ·生淀粉水解酶类的研究进展 | 第23-24页 |
| ·本课题研究内容 | 第24-27页 |
| ·本课题研究目的和意义 | 第24-26页 |
| ·本课题研究思路与内容 | 第26-27页 |
| 第二章 产酶菌株YX-1 的分离鉴定、分类及诱变选育 | 第27-41页 |
| ·前言 | 第27-28页 |
| ·材料与方法 | 第28-32页 |
| ·菌种与质粒 | 第28页 |
| ·培养基与溶液 | 第28-29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·菌株YX-1 的培养 | 第29页 |
| ·电镜研究 | 第29页 |
| ·生理生化特性 | 第29-30页 |
| ·产酶菌株16S rDNA 序列的扩增和分析 | 第30-31页 |
| ·淀粉酶酶活测定方法 | 第31页 |
| ·紫外诱变育种 | 第31页 |
| ·淀粉酶发酵过程跟踪 | 第31-32页 |
| ·酶的初步纯化 | 第32页 |
| ·结果与讨论 | 第32-40页 |
| ·菌株菌体形态以及部分生理生化特性的测定 | 第32页 |
| ·16S rDNA 的PCR 扩增和序列分析 | 第32-33页 |
| ·菌株YX-1 的16S rDNA 序列和系统发育分析 | 第33-36页 |
| ·紫外诱变选育优良菌株 | 第36-40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 第三章 Bacillus sp. YX-1 α-淀粉酶的分离纯化及其水解特征 | 第41-49页 |
| ·前言 | 第41页 |
| ·材料与方法 | 第41-44页 |
| ·菌种 | 第41页 |
| ·培养基与溶液 | 第41-42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·淀粉酶的培养和收集 | 第42页 |
| ·淀粉酶的分离纯化 | 第42-43页 |
| ·酶活测定方法 | 第43页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第43页 |
| ·淀粉酶活性染色 | 第43页 |
| ·蛋白质含量测定方法 | 第43页 |
| ·还原糖测定方法 | 第43页 |
| ·酶对可溶性淀粉的水解效果及特征分析 | 第43-44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-48页 |
| ·淀粉酶的分离纯化 | 第44-45页 |
| ·酶的纯度检测 | 第45-46页 |
| ·淀粉酶的纯化结果 | 第46页 |
| ·Bacillus sp.YX-1 淀粉酶对可溶性淀粉的水解分析 | 第46-48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第四章 Bacillus sp. YX-1 中温 α-淀粉酶酶学特性的研究 | 第49-61页 |
| ·前言 | 第49页 |
| ·材料与方法 | 第49-52页 |
| ·菌种 | 第49页 |
| ·培养基与溶液 | 第49-50页 |
| ·主要试剂 | 第50页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| ·酶活测定方法 | 第50页 |
| ·蛋白质测定方法 | 第50页 |
| ·还原糖测定方法 | 第50页 |
| ·主要酶学性质分析 | 第50-51页 |
| ·AMY (YX)与商品中温α-淀粉酶的催化效果的比较 | 第51页 |
| ·酶对生淀粉的水解效果 | 第51-52页 |
| ·酶的部分氨基酸序列分析 | 第52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-60页 |
| ·酶的最适反应pH 和pH 稳定性 | 第52页 |
| ·酶的最适反应温度和热稳定性 | 第52-53页 |
| ·金属离子对酶活的影响 | 第53-54页 |
| ·Bacillus sp. YX-1 α-淀粉酶与商品中温α-淀粉酶的水解效果的比较 | 第54页 |
| ·Bacillus sp. YX-1 α-淀粉酶对于生淀粉底物的水解效果 | 第54-59页 |
| ·酶源和酶学特性生物多样性的比较 | 第59-60页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 第五章 Bacillus sp. YX-1 中温 α-淀粉酶的基因克隆及序列分析 | 第61-81页 |
| ·前言 | 第61页 |
| ·材料与方法 | 第61-67页 |
| ·菌种与质粒 | 第61-62页 |
| ·培养基与溶液 | 第62页 |
| ·主要试剂 | 第62-63页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| ·Bacillus sp. YX-1 中温α-淀粉酶基因的克隆 | 第63-65页 |
| ·pMD18-T-amy 测序质粒的构建 | 第65页 |
| ·大肠杆菌E. coli JM109 感受态细胞的制备及转化 | 第65-66页 |
| ·质粒的小量制备(碱裂解法) | 第66页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第66页 |
| ·目的基因序列的测定与分析 | 第66-67页 |
| ·结果与讨论 | 第67-80页 |
| ·Bacillus sp.YX-1 中温α-淀粉酶基因的扩增 | 第67-69页 |
| ·PCR 产物的克隆 | 第69-70页 |
| ·Bacillus sp.YX-1 中温α-淀粉酶基因的测序及序列分析 | 第70-74页 |
| ·Bacillus sp.YX-1 中温α-淀粉酶基因序列分析 | 第74-80页 |
| ·小结 | 第80-81页 |
| 第六章 Bacillus sp. YX-1 中温 α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第81-94页 |
| ·前言 | 第81-82页 |
| ·材料与方法 | 第82-85页 |
| ·菌种与质粒 | 第82页 |
| ·培养基与溶液 | 第82页 |
| ·主要试剂 | 第82页 |
| ·主要仪器 | 第82页 |
| ·Bacillus sp. YX-1 的培养及基因组DNA 的提取 | 第82-83页 |
| ·表达引物设计及目的基因的扩增 | 第83页 |
| ·PCR 扩增产物的回收纯化及浓缩 | 第83页 |
| ·外源基因及质粒pET-28a 的酶切 | 第83页 |
| ·外源基因与质粒pET-28a 的连接 | 第83-84页 |
| ·表达重组质粒转化大肠杆菌 | 第84页 |
| ·表达重组质粒的提取及鉴定 | 第84页 |
| ·诱导表达培养 | 第84页 |
| ·表达产物SDS-PAGE 分析 | 第84页 |
| ·酶活力及蛋白含量的测定 | 第84-85页 |
| ·重组中温α-淀粉酶的纯化 | 第85页 |
| ·结果与讨论 | 第85-92页 |
| ·Bacillus sp. YX-1 中温α-淀粉酶基因表达质粒的构建 | 第85-87页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第87-88页 |
| ·酶活力的测定 | 第88-90页 |
| ·Bacillus sp. YX-1 中温α-淀粉酶基因表达效果的分析 | 第90-92页 |
| ·重组α-淀粉酶的纯化 | 第92页 |
| ·小结 | 第92-94页 |
| 主要结论 | 第94-96页 |
| 论文创新点 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-112页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表(含待发表)的论文 | 第112-113页 |
| 附图 | 第113-119页 |
