| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-12页 |
| 第一部分 PcG 靶基因FOXC1 抑制乳腺癌转移及相关机制研究 | 第12-62页 |
| 引言 | 第12-34页 |
| 一、PcG 蛋白结构及功能简介 | 第12-18页 |
| （一） PcG 蛋白复合物 | 第12-15页 |
| （二） EZH2 蛋白与癌症发生及转移 | 第15-18页 |
| 二、乳腺癌恶性转移相关机制研究进展 | 第18-27页 |
| （一） 乳腺癌转移机制研究进展 | 第19-23页 |
| （二） 转移相关因子的研究现状 | 第23-27页 |
| 三、FOX 转录因子家族简介 | 第27-32页 |
| （一） FOX 家族成员 | 第27-29页 |
| （二） FOX 家族蛋白的主要功能 | 第29-31页 |
| （三） FOXC1 基因及功能研究进展 | 第31-32页 |
| 四、本论文研究的内容和意义 | 第32-34页 |
| （一） 立题依据 | 第32-33页 |
| （二） 本论文的研究内容和意义 | 第33-34页 |
| 实验材料与方法 | 第34-46页 |
| 一、实验材料 | 第34页 |
| （一） 质粒 | 第34页 |
| （二） 蛋白质和抗体 | 第34页 |
| （三） 哺乳动物细胞系 | 第34页 |
| （四） 试剂 | 第34页 |
| 二、实验方法 | 第34-46页 |
| I.分子生物学实验方法 | 第34-41页 |
| （一） 分子克隆 | 第34-35页 |
| （二） DNA 的琼脂糖电泳 | 第35页 |
| （三） 质粒大量制备的方法 | 第35-36页 |
| （四） 哺乳动物细胞总 RNA 的提取和 RT-PCR | 第36-39页 |
| （五） 染色质免疫沉淀实验 | 第39-40页 |
| （六） RNA 干涉（RNAi） | 第40-41页 |
| II. 细胞生物学实验方法 | 第41-45页 |
| （一） 哺乳动物细胞系的培养 | 第41页 |
| （二） 真核生物细胞系的瞬时转染和稳定转染 | 第41页 |
| （三） 蛋白质的Western blot 分析 | 第41-43页 |
| （四） MTT 细胞活性检测实验 | 第43-44页 |
| （五） 细胞体外划痕实验 | 第44页 |
| （六） 肿瘤细胞迁移和侵袭实验 | 第44-45页 |
| （七） 细胞衰老染色实验 | 第45页 |
| III. 统计分析 | 第45-46页 |
| 实验结果与分析 | 第46-58页 |
| 一、Polycomb参与FOXC1基因的表达调控及机制 | 第46-51页 |
| （一） polycomb 家族蛋白表达与 FOXC1 的表达呈现明显的负相关，FOXC1 是受polycomb 调控的靶基因 | 第46-49页 |
| （二） Polycomb通过影响组蛋白甲基化和乙酰化修饰调控FOXC1的表达 | 第49-51页 |
| 二、FOXC1 抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭 | 第51-58页 |
| （一） MDA-MB-231-FOXC1 稳定转染细胞系的构建及鉴定 | 第51页 |
| （二） FOXC1 抑制肿瘤细胞的增殖 | 第51-52页 |
| （三） FOXC1 抑制肿瘤细胞的恶性转移 | 第52-56页 |
| （四） FOXC1诱导MDA-MB-231细胞衰老 | 第56-58页 |
| 讨论 | 第58-62页 |
| 一、FOXC1 表达与ER 的关系 | 第58页 |
| 二、PcG 家族蛋白转录调控FOXC1 的具体分子机制 | 第58-60页 |
| 三、FOXC1 参与抑制乳腺癌的转移 | 第60页 |
| 四、PcG 蛋白参与乳腺癌恶化的分子机制 | 第60-62页 |
| 第二部分 丁酸钠诱导p18~(INK4C) 基因表达上调参与K562 细胞G_0/G_1阻滞和红系分化 | 第62-82页 |
| 引言 | 第62-69页 |
| 一、组蛋白去乙酰化酶抑制剂及其在红白血病分化治疗中的应用 | 第62-64页 |
| （一） 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 | 第62-63页 |
| （二） 白血病分化治疗模型及丁酸钠的应用 | 第63-64页 |
| 二、p18~(INK4C) 基因及其转录调控机制的研究进展 | 第64-67页 |
| （一） 细胞周期调控的分子机制 | 第64-66页 |
| （二） 人p18~(INK4C)基因的结构和功能 | 第66-67页 |
| （三） 人p18~(INK4C)基因的转录调控 | 第67页 |
| 三、本论文研究的内容和意义 | 第67-69页 |
| （一） 立题依据 | 第67-68页 |
| （二） 本文的研究内容和意义 | 第68-69页 |
| 实验材料和方法 | 第69-72页 |
| 一、实验材料 | 第69页 |
| （一） 质粒 | 第69页 |
| （二） 蛋白质和抗体 | 第69页 |
| （三） 哺乳动物细胞系 | 第69页 |
| （四） 试剂 | 第69页 |
| 二、实验方法 | 第69-72页 |
| Ⅰ.分子生物学实验方法 | 第69页 |
| Ⅱ.细胞生物学实验方法 | 第69-71页 |
| （一） 哺乳动物细胞系的培养 | 第69-70页 |
| （二） 细胞的药物刺激 | 第70页 |
| （三） 真核生物细胞的瞬时转染和荧光素酶报告基因检测 | 第70-71页 |
| （四） 流式细胞术 | 第71页 |
| （五） 联苯胺染色法 | 第71页 |
| Ⅲ.蛋白的生物化学实验方法 | 第71页 |
| Ⅳ.统计分析 | 第71-72页 |
| 结果与分析 | 第72-79页 |
| 一、K562 红系分化过程中丁酸钠对p18~(INK4C) 基因转录调控的影响及分子机制研究 | 第72-76页 |
| （一） 丁酸钠处理K562 细胞明显提高内源p18~(INK4C)的m RNA 和蛋白表达水平 | 第72页 |
| （二） 丁酸钠处理激活p18~(INK4C)启动子活性，且激活作用依赖于启动子处Sp1 结合簇的完整性 | 第72-74页 |
| （三） 丁酸钠处理提高p18~(INK4C)启动子处组蛋白H3和H4的乙酰化水平以及转录因子Sp1 的结合能力 | 第74-76页 |
| 二、K562 细胞中过表达p18~(INK4C) 基因可诱导细胞G_0/G_1 期阻滞和部分红系分化 | 第76-79页 |
| （一） 过表达p18~(INK4C)基因可诱导K562 细胞周期的G_0/G_1期阻滞 | 第76-77页 |
| （二） 过表达p18~(INK4C)基因可诱导K562 细胞部分红系分化 | 第77-79页 |
| 讨论 | 第79-82页 |
| 一、HDAC抑制剂丁酸钠对p18基因转录调控的作用 | 第79-80页 |
| 二、丁酸钠刺激对于转录因子结合的影响 | 第80页 |
| 三、p18 对于K562 细胞周期和分化的影响 | 第80-82页 |
| 主要结论和创新点 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-93页 |
| 附录 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第95页 |
