| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-24页 |
| ·角蛋白酶研究进展 | 第12-17页 |
| ·角蛋白及角蛋白酶 | 第12页 |
| ·角蛋白酶的理化性质研究 | 第12-14页 |
| ·角蛋白酶降解角蛋白的机理研究 | 第14-15页 |
| ·角蛋白酶的分子生物学 | 第15-16页 |
| ·角蛋白酶的应用 | 第16-17页 |
| ·氨肽酶研究进展 | 第17-19页 |
| ·氨肽酶概述 | 第17页 |
| ·氨肽酶分类 | 第17-18页 |
| ·细菌氨肽酶研究进展 | 第18页 |
| ·氨肽酶的应用 | 第18-19页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第19-23页 |
| ·表达载体 | 第19-20页 |
| ·宿主细胞 | 第20-21页 |
| ·各种类型表达系统 | 第21-23页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 蛋白酶基因 sfp1 的表达研究 | 第24-43页 |
| 第一节 基因克隆与异源表达 | 第24-33页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·菌株和质粒 | 第24页 |
| ·引物合成 | 第24页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第24页 |
| ·溶液 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·实验仪器 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-29页 |
| ·弗氏链霉菌k11 总DNA 的提取 | 第25页 |
| ·已知蛋白酶基因sfp1 全序列的分析 | 第25页 |
| ·蛋白酶基因sfp1 全序列的克隆 | 第25-26页 |
| ·DNA 的回收(参照DNA 回收试剂盒说明书，天根生化科技有限公司) | 第26页 |
| ·DNA 的连接与转化 | 第26-27页 |
| ·重组子的筛选 | 第27页 |
| ·DNA 测序 | 第27页 |
| ·大肠杆菌表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和电击转化 | 第28-29页 |
| ·SFP1 的酶活测定方法 | 第29页 |
| ·SFP1 的诱导表达及检测 | 第29页 |
| ·结果与分析 | 第29-33页 |
| ·已知蛋白酶基因sfp1 全序列的分析 | 第29-32页 |
| ·重组表达载体 pET-22b-sfp1pro 的构建 | 第32-33页 |
| 第二节 重组蛋白酶SFP1 的酶学性质分析 | 第33-43页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·菌株 | 第33页 |
| ·酶、底物和生化试剂 | 第33页 |
| ·培养基 | 第33页 |
| ·实验仪器 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-37页 |
| ·重组蛋白酶SFP1 的表达和纯化 | 第33-35页 |
| ·SFP1 的酶活测定方法 | 第35页 |
| ·重组蛋白酶SFP1 酶学性质的分析 | 第35-37页 |
| ·实验结果 | 第37-43页 |
| ·sfp1 基因在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第37-39页 |
| ·重组蛋白酶SFP1 的酶学性质 | 第39-43页 |
| 第三章 氨肽酶基因的表达与酶学性质研究 | 第43-58页 |
| 第一节 基因的克隆与异源表达 | 第43-52页 |
| ·实验材料 | 第43-44页 |
| ·菌株与质粒 | 第43页 |
| ·引物合成 | 第43页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第43页 |
| ·溶液 | 第43页 |
| ·培养基 | 第43页 |
| ·实验仪器 | 第43-44页 |
| ·实验方法 | 第44-47页 |
| ·已知氨肽酶基因sfap 全序列的分析 | 第44页 |
| ·氨肽酶基因sfap 序列的克隆 | 第44页 |
| ·DNA 的回收 | 第44-45页 |
| ·DNA 的连接与转化 | 第45页 |
| ·重组子筛选 | 第45页 |
| ·DNA 测序 | 第45页 |
| ·重组表达载体pET-22b-sfap、pET-22b-sfapm 的构建 | 第45-46页 |
| ·热击转化 | 第46-47页 |
| ·SFAP 的酶活检测方法 | 第47页 |
| ·重组氨肽酶SFAPM 的诱导表达及检测 | 第47页 |
| ·结果与分析 | 第47-52页 |
| ·氨肽酶基因sfap 全序列的分析 | 第47-49页 |
| ·重组表达载体pET-22b-sfap 及pET-22b-sfapm 的构建 | 第49-52页 |
| 第二节 重组氨肽酶SFAPM 酶学性质的分析 | 第52-58页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·菌株 | 第52页 |
| ·酶、底物和生化试剂 | 第52页 |
| ·培养基 | 第52页 |
| ·实验仪器 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-54页 |
| ·s fapm 基因在大肠杆菌中的大量表达和纯化 | 第52-53页 |
| ·重组氨肽酶酶学性质的分析 | 第53-54页 |
| ·实验结果 | 第54-58页 |
| ·sfapm 基因在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第54页 |
| ·重组氨肽酶SFAPM 酶学性质 | 第54-58页 |
| 第四章 讨论 | 第58-62页 |
| ·实验材料的选择 | 第58页 |
| ·蛋白酶SFP1 | 第58-60页 |
| ·氨肽酶SFAP | 第60-61页 |
| ·对研究角蛋白降解酶系的建议 | 第61-62页 |
| 第五章 总结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简历 | 第71页 |
