| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第13-15页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-33页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征 | 第15页 |
| ·PRRS 的流行病学特点 | 第15-17页 |
| ·PRRSV 病原特性 | 第17-19页 |
| ·PRRSV 的分类 | 第17页 |
| ·PRRSV 的理化学特性 | 第17页 |
| ·PRRSV 的抗原性 | 第17-18页 |
| ·PRRSV 的细胞培养特性 | 第18-19页 |
| ·PRRSV 的致病机理 | 第19页 |
| ·PRRSV 分子生物学研究进展 | 第19-28页 |
| ·PRRSV 基因组的结构与功能 | 第19-22页 |
| ·PRRSV 的蛋白质 | 第22-25页 |
| ·PRRSV 的基因组变异和RNA 重组 | 第25-27页 |
| ·PRRSV 的抗原性变异 | 第27页 |
| ·PRRSV 的毒力变异 | 第27-28页 |
| ·正链RNA 病毒的感染性克隆的概述 | 第28-33页 |
| ·RNA 病毒反向遗传操作技术体系的提出 | 第28-29页 |
| ·正链RNA 病毒的感染性克隆的操作 | 第29-33页 |
| 第2章 研究目的和意义 | 第33-35页 |
| 第3章 材料与方法 | 第35-52页 |
| ·毒株、细胞、菌株及质粒 | 第35-36页 |
| ·酶及主要试剂 | 第36-37页 |
| ·培养基与抗生素及其配制 | 第37-38页 |
| ·缓冲液 | 第38-39页 |
| ·病毒的大量增殖、浓缩和纯化 | 第39-40页 |
| ·病毒的增殖 | 第39页 |
| ·病毒的浓缩、纯化 | 第39-40页 |
| ·病毒RNA 的提取 | 第40页 |
| ·全基因组的反转录聚合酶链式反应（RT-PCR） | 第40-42页 |
| ·引物设计合成 | 第40-41页 |
| ·病毒基因组的反转录 | 第41页 |
| ·病毒cDNA 的PCR 扩增 | 第41-42页 |
| ·全基因组cDNA 的克隆 | 第42-45页 |
| ·PCR 产物的回收与纯化 | 第42页 |
| ·连接反应 | 第42-43页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第43页 |
| ·连接产物的转化 | 第43-44页 |
| ·质粒DNA 的小量制备（碱裂解法） | 第44页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第44-45页 |
| ·PRRSV 全基因组毒株序列测定与分析 | 第45页 |
| ·全基因组cDNA 的连接 | 第45-47页 |
| ·PCR 产物或酶切产物的电泳检测 | 第45-46页 |
| ·线性质粒DNA 末端去磷酸化 | 第46页 |
| ·外源DNA 片段与质粒载体的连接反应 | 第46页 |
| ·质粒的制备与鉴定 | 第46-47页 |
| ·全长质粒pOK-Clone20 质粒转染（脂质体介导转染法） | 第47-48页 |
| ·RT-PCR 法检测恢复病毒 | 第48页 |
| ·PRRSV 复制子cDNA 的连接 | 第48页 |
| ·PRRSV 复制子在BHK-21 细胞内的表达 | 第48-49页 |
| ·复制子质粒pOK-Clone20-rep 质粒转染 | 第48页 |
| ·转染后的荧光检测 | 第48-49页 |
| ·流式细胞检测 | 第49页 |
| ·RT-PCR 检测EGFP mRNA 和N mRNA | 第49页 |
| ·动物试验 | 第49页 |
| ·N-ELISA 试验 | 第49-50页 |
| ·EGFP-ELISA 试验 | 第50页 |
| ·细胞免疫的检测 | 第50-52页 |
| ·小鼠脾淋巴细胞的制备 | 第50页 |
| ·淋巴细胞增殖反应试验（Lymphocytes Proliferation） | 第50-51页 |
| ·实时荧光定量 PCR 检测免疫小鼠脾细胞中的 IFN-γ 相对表达水平 | 第51-52页 |
| 第4章 结果与分析 | 第52-84页 |
| ·PRRSV Clone20 株全基因组序列的测定及序列分析 | 第52-63页 |
| ·病毒纯化 | 第52页 |
| ·病毒基因组亚克隆片段的RT-PCR 扩增结果 | 第52-53页 |
| ·亚克隆质粒的构建与鉴定 | 第53-56页 |
| ·亚克隆质粒序列测定和病毒基因组全序列拼接 | 第56页 |
| ·PRRSV Clone20 株全基因组序同源性和进化树列分析 | 第56-60页 |
| ·PRRSV 在进化过程中的重组分析 | 第60-63页 |
| ·PRRSV Clone20 株全基因组感染性cDNA 克隆的构建 | 第63-70页 |
| ·PRRSV 基因组全长cDNA 的构建 | 第63-69页 |
| ·PRRSV 感染性病毒的拯救 | 第69-70页 |
| ·PRRSV 复制子载体研究 | 第70-84页 |
| ·PRRSV 复制子cDNA 的构建 | 第70-77页 |
| ·PRRSV 复制子在BHK-21 细胞内的表达 | 第77-81页 |
| ·免疫小鼠的模式基因（EGFP）的ELISA 抗体水平 | 第81-82页 |
| ·免疫小鼠的复制子载体N 蛋白基因的ELISA 抗体水平 | 第82页 |
| ·实时荧光定量PCR 检测免疫小鼠脾细胞中 IFN-γmRNA 表达 | 第82-84页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第84-92页 |
| ·讨论 | 第84-91页 |
| ·关于PRRSV 全基因组序列的测定及序列分析 | 第84-85页 |
| ·关于PRRSV 全基因组感染性cDNA 克隆的构建 | 第85-88页 |
| ·关于PRRSV 的复制子载体的研究 | 第88-91页 |
| ·结论 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 附录 | 第110页 |
