重组大肠杆菌DH5α生产rNGR-Tum-5工艺的研究
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-21页 |
| ·引言 | 第9页 |
| ·多肽靶向分子重组人NGR-Tum-5 | 第9-12页 |
| ·Tumstatin | 第10-11页 |
| ·Tum-5的结构与功能 | 第11页 |
| ·NGR导向肽的发现及其在治疗中的作用 | 第11-12页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第12-14页 |
| ·大肠杆菌表达系统概述 | 第12页 |
| ·外源蛋白的表达方式 | 第12-13页 |
| ·大肠杆菌表达载体 | 第13页 |
| ·大肠杆菌表达系统与真核表达系统的区别 | 第13-14页 |
| ·工程菌发酵 | 第14-17页 |
| ·培养基优选 | 第14-15页 |
| ·摇瓶培养条件 | 第15-16页 |
| ·重组大肠杆菌高密度培养 | 第16-17页 |
| ·重组大肠杆菌表达系统的前景 | 第17-18页 |
| ·重组蛋白的分离纯化 | 第18-20页 |
| ·层析分离方式 | 第18-19页 |
| ·亲和层析 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-28页 |
| ·材料 | 第21-23页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·菌种 | 第21页 |
| ·分子生物学试剂 | 第21页 |
| ·质粒载体 | 第21-22页 |
| ·发酵与纯化试剂 | 第22-23页 |
| ·电泳试剂 | 第23页 |
| ·配制方法 | 第23-24页 |
| ·培养基的配制 | 第23-24页 |
| ·纯化试剂的配制 | 第24页 |
| ·培养方法 | 第24-26页 |
| ·质粒的提取及酶切鉴定 | 第25页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第25页 |
| ·菌种筛选 | 第25页 |
| ·重组大肠杆菌的培养 | 第25-26页 |
| ·种子制备(发酵罐) | 第26页 |
| ·补料培养 | 第26页 |
| ·亲和纯化 | 第26页 |
| ·结果分析 | 第26-28页 |
| ·菌体浓度的测定 | 第26页 |
| ·rNGR-Tum-5表达量的测定 | 第26-28页 |
| 1) 样品的处理 | 第26-27页 |
| 2) 电泳操作 | 第27页 |
| 3) 胶的染色和脱色 | 第27-28页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第28-45页 |
| ·重组大肠杆菌DH5α发酵培养基的筛选 | 第28-35页 |
| ·工程菌的选育 | 第28页 |
| ·培养基种类对工程菌生长和目标蛋白表达的影响 | 第28-29页 |
| ·培养基筛选 | 第29-34页 |
| ·培养基筛选结果 | 第34-35页 |
| ·重组大肠杆菌DH5α摇瓶发酵的筛选 | 第35-39页 |
| ·温度对工程菌生长和蛋白表达的影响 | 第35-36页 |
| ·摇床转速对工程菌生长和蛋白表达的影响 | 第36页 |
| ·种子菌龄对工程菌生长和蛋白表达的影响 | 第36-37页 |
| ·诱导时机工程菌生长和蛋白表达的影响 | 第37-38页 |
| ·IPTG浓度对工程菌生长和蛋白表达的影响 | 第38页 |
| ·表达时间对工程菌生长和蛋白表达的影响 | 第38-39页 |
| ·重组大肠杆菌DH5α在5L发酵罐中的培养 | 第39-43页 |
| ·接种量对工程菌生长和目标蛋白表达的影响 | 第40-41页 |
| ·pH对工程菌生长和目标蛋白表达的影响 | 第41-42页 |
| ·发酵产物分离纯化鉴定 | 第42-43页 |
| ·本章小结 | 第43-45页 |
| 第四章 对后续工作的建议 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-53页 |
| 研究成果 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
