| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 前言 | 第11-17页 |
| 1 研究背景 | 第11-14页 |
| ·p53-MDM2与肿瘤/癌症发生发展的关系 | 第11页 |
| ·p53-MDM2复合物的结构研究 | 第11-12页 |
| ·p53-MDM2抑制剂的研究与意义 | 第12-13页 |
| ·天然毒素微型蛋白(多肽) | 第13页 |
| ·前期工作基础与技术平台 | 第13-14页 |
| 2 课题设计和研究内容 | 第14-15页 |
| ·研究目的和内容 | 第14-15页 |
| ·课题创新点 | 第15页 |
| 参考文献 | 第15-17页 |
| 第一部分 抑制p53与MDM2结合的活性多肽设计、制备与表征 | 第17-56页 |
| 第一节 基于蛋白"嫁接"策略的L型多肽设计与表征 | 第17-33页 |
| 1 仪器与试剂 | 第18页 |
| ·仪器 | 第18页 |
| ·材料与试剂 | 第18页 |
| 2 实验方法 | 第18-24页 |
| ·p53-MDM2的L型多肽抑制剂(微型蛋白stoppin-1)设计 | 第18-20页 |
| ·具有潜在穿膜能力的微型蛋白stoppin-2和对照的设计 | 第20-21页 |
| ·stoppin的制备 | 第21-22页 |
| ·stoppin的二硫键配搭表征 | 第22页 |
| ·stoppin的圆二色谱学结构表征 | 第22页 |
| ·stoppin不同状态下的色氨酸荧光谱测定 | 第22页 |
| ·stoppin对MDM2蛋白亲和力常数的测定 | 第22-24页 |
| ·细胞试验 | 第24页 |
| ·稳定性考察 | 第24页 |
| 3 结果与讨论 | 第24-30页 |
| ·stoppin的制备 | 第24-26页 |
| ·stoppin的表征 | 第26-29页 |
| ·stoppin的抗肿瘤活性与机制 | 第29-30页 |
| ·stoppin-2的稳定性 | 第30页 |
| 4 小结 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-33页 |
| 第二节 L型多肽的优化设计 | 第33-48页 |
| 1 仪器与试剂 | 第34页 |
| ·仪器 | 第34页 |
| ·材料与试剂 | 第34页 |
| 2 实验方法 | 第34-35页 |
| ·基于丙氨酸扫描和端基截取获取同源性多肽 | 第34页 |
| ·同源性多肽的制备与表征 | 第34-35页 |
| ·L型多肽的优化设计(微型蛋白stingin的设计) | 第35页 |
| ·stingin的制备与表征 | 第35页 |
| ·stingin对MDM2蛋白亲和力常数的测定 | 第35页 |
| 3 结果与讨论 | 第35-46页 |
| ·同源性多肽的制备 | 第35-36页 |
| ·PMI结合MDM2的关键位点与区域 | 第36-37页 |
| ·~((17-28))p53及其同源性多肽与MDM2的结合情况 | 第37-38页 |
| ·PMI、~((17-28))p53与MDM2结合的比较研究 | 第38-41页 |
| ·stingin的制备 | 第41页 |
| ·stingin特异性结合MDM2 | 第41-44页 |
| ·stingin与stoppin的比较 | 第44页 |
| ·PMI的额外启示 | 第44-46页 |
| 4 小结 | 第46页 |
| 参考文献 | 第46-48页 |
| 第三节 抑制p53与MDM2结合的D型多肽制备与表征 | 第48-56页 |
| 1 仪器与试剂 | 第49页 |
| ·仪器 | 第49页 |
| ·材料与试剂 | 第49页 |
| 2 实验方法 | 第49-50页 |
| ·D型多肽的制备与表征 | 第49-50页 |
| ·D型多肽与MDM2的结合 | 第50页 |
| ·D型多肽的稳定性考察 | 第50页 |
| 3 结果与讨论 | 第50-55页 |
| ·D型多肽的制备 | 第50-51页 |
| ·D-PMIα特异性结合MDM2 | 第51-53页 |
| ·D-PMIα的稳定性 | 第53-54页 |
| ·逆反异构化技术的局限性 | 第54-55页 |
| 4 小结 | 第55页 |
| 参考文献 | 第55-56页 |
| 第二部分 抑制p53与MDM2结合的活性多肽靶向递送研究 | 第56-87页 |
| 第一节 RGD介导靶向肿瘤细胞的脂质体递药系统构建 | 第56-68页 |
| 1 仪器与试剂 | 第57页 |
| ·仪器 | 第57页 |
| ·材料与试剂 | 第57页 |
| 2 实验方法 | 第57-62页 |
| ·膜材料的合成 | 第57-59页 |
| ·合成产物的鉴定 | 第59页 |
| ·多肽定量分析方法的建立 | 第59-60页 |
| ·载多肽脂质体的制备及表征 | 第60-62页 |
| 3 结果与讨论 | 第62-65页 |
| ·合成产物 | 第62-63页 |
| ·多肽定量检测方法的可靠性 | 第63页 |
| ·载多肽脂质体的理化性质 | 第63-65页 |
| 4 小结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-68页 |
| 第二节 抑制p53与MDM2结合的多肽抗肿瘤药效与机制研究 | 第68-78页 |
| 1 仪器与试剂 | 第68页 |
| ·仪器 | 第68页 |
| ·材料与试剂 | 第68页 |
| 2 实验方法 | 第68-71页 |
| ·体外药效评价 | 第68-69页 |
| ·体内药效评价 | 第69-70页 |
| ·抗肿瘤机制研究 | 第70-71页 |
| 3. 结果与讨论 | 第71-75页 |
| ·c(RGD~DYK)介导脂质体递送活性多肽抑制肿瘤细胞生长的药效 | 第71-72页 |
| ·体内抗肿瘤药效 | 第72-74页 |
| ·活性多肽抗肿瘤机制的探讨 | 第74-75页 |
| 4 小结 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-78页 |
| 第三节 脂肪酸化多肽脂质体的构建及其评价 | 第78-87页 |
| 1 仪器与试剂 | 第78-79页 |
| ·仪器 | 第78-79页 |
| ·材料与试剂 | 第79页 |
| 2 实验方法 | 第79-81页 |
| ·脂肪酸修饰的活性多肽制备 | 第79页 |
| ·多肽定量分析方法的建立 | 第79-80页 |
| ·载多肽脂质体的制备及表征 | 第80-81页 |
| ·载多肽脂质体的体外药效评价 | 第81页 |
| ·体内抗肿瘤药效 | 第81页 |
| 3 结果与讨论 | 第81-86页 |
| ·多肽的制备与表征 | 第81-82页 |
| ·多肽定量检测方法的可靠性 | 第82-83页 |
| ·载多肽脂质体的理化性质 | 第83-84页 |
| ·体外抗肿瘤药效 | 第84-85页 |
| ·体内抗肿瘤药效 | 第85-86页 |
| 4 小结 | 第86页 |
| 参考文献 | 第86-87页 |
| 总结与展望 | 第87-89页 |
| 攻读博士学位期间科研成果 | 第89-92页 |
| 科研论文 | 第89-90页 |
| 专利申请 | 第90页 |
| 科研工作获国际同行评价 | 第90-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
