| 中文摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 1 前言 | 第16-23页 |
| 2 材料和方法 | 第23-65页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·试剂耗材 | 第24-28页 |
| ·试剂配制和实验方法 | 第28-65页 |
| ·细胞培养方法及药物处理 | 第28-34页 |
| ·总RNA提取-反转录-常规PCR和实时荧光定量PCR(QT-RT-PCR) | 第34-41页 |
| ·Western Blotting | 第41-49页 |
| ·基因启动子克隆及报告基因质粒重构 | 第49-53页 |
| ·细胞转染和报告基因荧光素酶活性测定 | 第53-55页 |
| ·染色质免疫沉淀(ChIP) | 第55-59页 |
| ·免疫共沉淀(Co-IP) | 第59-60页 |
| ·免疫组织化学染色法(HIC) | 第60-61页 |
| ·siRNA干扰实验 | 第61-63页 |
| ·PGE_2和Progesterone EIA测定 | 第63-64页 |
| ·统计学分析 | 第64-65页 |
| 3 实验结果 | 第65-109页 |
| ·皮质醇诱导人羊膜成纤维细胞cPLA_(2α)表达,而抑制人胎儿肺成纤维细胞株cPLA_(2α)表达 | 第65-72页 |
| ·皮质醇对人羊膜成纤维细胞和HFL-1细胞cPLA_(2α)表达的不同影响 | 第65-68页 |
| ·皮质醇对人羊膜成纤维细胞cPLA_(2α)的诱导作用可以被RU486阻断 | 第68-71页 |
| ·DRB和CHX能够阻断皮质醇诱导人羊膜成纤维细胞cPLA_(2α)mRNA表达 | 第71-72页 |
| ·皮质醇诱导人羊膜成纤维细胞抑炎因子IκBα表达并抑制促炎症细胞因子表达 | 第72-75页 |
| ·孕激素及其受体对皮质醇反常诱导人羊膜成纤维细胞cPLA_(2α)表达的影响 | 第75-85页 |
| ·人羊膜成纤维细胞能够合成和分泌少量孕激素 | 第75页 |
| ·人羊膜成纤维细胞主要表达孕激素受体A亚型 | 第75-78页 |
| ·内源性孕激素和PRA削弱皮质醇对人羊膜成纤维细胞cPLA_(2α)表达的诱导作用 | 第78-83页 |
| ·外源性孕激素竞争性抑制皮质醇对人羊膜成纤维细胞cPLA_(2α)表达的诱导作用 | 第83-85页 |
| ·cPLA_(2α)基因启动子的GRE顺式元件分别介导皮质醇对人羊膜成纤维细胞cPLA_(2α)基因的促表达作用和对HFL-1细胞cPLA_(2α)基因的抑制作用 | 第85-93页 |
| ·皮质醇促进人羊膜成纤维细胞-595bp cPLA_(2α)启动子活性 | 第87-88页 |
| ·位于-490bp--485bp的GRE元件介导皮质醇对人羊膜成纤维细胞-595bp cPLA_(2α)启动子活性的促进作用 | 第88-89页 |
| ·皮质醇促进人羊膜成纤维细胞GR与cPLA_(2α)启动子GRE元件的结合 | 第89-91页 |
| ·位于-490bp--485bp的GRE元件介导皮质醇对HFL-1细胞-595bp cPLA_(2α)启动子活性的抑制作用 | 第91-93页 |
| ·CAMP/PKA/CREB-1信号转导通路在皮质醇反常诱导人羊膜成纤维细胞cPLA_(2α)表达中的关键作用 | 第93-102页 |
| ·PKA抑制剂H89可以阻断皮质醇对人羊膜成纤维细胞cPLA_(2α)表达的诱导作用 | 第95-97页 |
| ·皮质醇促进CREB-1第133位Ser磷酸化,磷酸化CREB-1参与皮质醇对人羊膜成纤维细胞cPLA_(2α)表达的诱导作用 | 第97-99页 |
| ·皮质醇促进人羊膜成纤维细胞CREB-1与GR形成促转录复合体,并定位到cPLA_(2α)启动子GRE上 | 第99-102页 |
| ·皮质醇对Gα_s表达的诱导作用是皮质醇反常诱导人羊膜成纤维细胞cPLA_(2α)表达的关键事件 | 第102-109页 |
| ·皮质醇诱导人羊膜成纤维细胞Gα_s的表达,该诱导作用可以被RU486阻断 | 第102-103页 |
| ·Gα_s抑制剂NF449可以阻断皮质醇对人羊膜成纤维细胞CREB-1的磷酸化作用,以及对cPLA_(2α)和COX-2表达的促进作用 | 第103-104页 |
| ·皮质醇对HFL-1细胞Gα_s表达、CREB-1磷酸化和CREB-1结合cPLA_(2α)启动子能力的影响 | 第104-109页 |
| 5 结论 | 第109-110页 |
| 6 讨论 | 第110-122页 |
| ·cPLA_(2α)在人类分娩中的重要作用 | 第110-111页 |
| ·糖皮质激素对cPLA_(2α)和前列腺素合成的反常诱导作用 | 第111-115页 |
| ·炎症通路对糖皮质激素反常诱导cPLA_(2α)和前列腺素合成的影响 | 第115-116页 |
| ·孕激素及其受体对糖皮质激素反常诱导cPLA_(2α)和前列腺素合成的影响 | 第116-119页 |
| ·糖皮质激素在人类胎膜激活中的作用探讨 | 第119-122页 |
| 参考文献 | 第122-133页 |
| 附录1 综述-子宫内组织前列腺素在分娩启动中的作用 | 第133-141页 |
| 1 前列腺素的合成及受体 | 第133-135页 |
| 2 子宫内组织前列腺素合成代谢酶与分娩启动的关系 | 第135-140页 |
| ·磷脂酶A_2与分娩启动的关系 | 第135-137页 |
| ·环氧合酶与分娩启动的关系 | 第137-139页 |
| ·前列腺素合酶PGES和PGFS与分娩启动的关系 | 第139页 |
| ·前列腺素失活酶与分娩启动的关系 | 第139-140页 |
| 3 前列腺素受体和分娩启动的关系 | 第140-141页 |
| 附录2 综述-哺乳类动物妊娠晚期孕激素撤退的三种机制 | 第141-169页 |
| 1 前言 | 第141页 |
| 2 妊娠期孕激素及其受体亚型 | 第141-143页 |
| ·孕激素 | 第141-142页 |
| ·孕激素受体 | 第142-143页 |
| 3 哺乳动物分娩启动中的"孕激素撤退"机制 | 第143-169页 |
| ·黄体溶解 | 第143-146页 |
| ·胎盘P450c17羟化酶的表达上调 | 第146-148页 |
| ·孕激素功能性撤退 | 第148-169页 |
| 附录3 博士研究生期间已发表文章 | 第169-171页 |
| 致谢 | 第171-172页 |
