| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 概述 | 第11-19页 |
| 1.1 谷氨酸棒状杆菌与基因工程 | 第11-12页 |
| 1.2 CRISPR-Cas系统 | 第12-14页 |
| 1.3 1类I型CRISPR-Cas系统的干扰机制 | 第14-16页 |
| 1.4 研究意义,研究内容和方案 | 第16-19页 |
| 第二章 cas753构建的蛋白表达质粒与基因编辑质粒对谷氨酸棒状杆菌的基因编辑 | 第19-49页 |
| 2.1 前言 | 第19页 |
| 2.2 材料和方法 | 第19-37页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第19-20页 |
| 2.2.2 主要仪器,试剂及试剂配制 | 第20-23页 |
| 2.2.3 实验方法 | 第23-37页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第37-48页 |
| 2.3.1 谷氨酸棒状杆菌基因组的提取 | 第37-38页 |
| 2.3.2 pXMJ19质粒制备 | 第38-39页 |
| 2.3.3 ldh基因上下游同源臂的制备 | 第39-40页 |
| 2.3.4 ldh基因的g-DNA制备 | 第40-41页 |
| 2.3.5 基因编辑质粒pXMJ19-t-△ldh的验证 | 第41-42页 |
| 2.3.6 基因编辑质粒pXMJ19-t/g-△ldh的验证 | 第42-43页 |
| 2.3.7 蛋白表达质粒pEC-XK99E-cas753的构建和验证结果 | 第43-45页 |
| 2.3.8 蛋白表达质粒pEC-XK99E-cas753转入谷氨酸棒状杆菌后的验证 | 第45-46页 |
| 2.3.9 蛋白表达质粒pEC-XK99E-cas753与基因编辑质粒pXMJ19-t/g-△ldh对谷氨酸棒状杆菌ldh基因的敲除与验证 | 第46-48页 |
| 2.4 结论 | 第48-49页 |
| 第三章 单基因Cas3构建的蛋白表达质粒与基因编辑质粒对谷氨酸棒状杆菌的基因编辑 | 第49-70页 |
| 3.1 前言 | 第49-50页 |
| 3.2 材料和方法 | 第50-59页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第50-51页 |
| 3.2.2 主要仪器,试剂及试剂配制 | 第51页 |
| 3.2.3 实验方法 | 第51-59页 |
| 3.3 结果和讨论 | 第59-69页 |
| 3.3.1 ldh基因上下游同源臂及插入片段的制备 | 第59-61页 |
| 3.3.2 ldh基因的gDNA制备 | 第61页 |
| 3.3.3 pXMJ19- t-△ldh::egfp与pXMJ19- t-△ldh::cat质粒的验证 | 第61-62页 |
| 3.3.4 基因编辑质粒pXMJ19-t/g-△ldh::egfp与pXMJ19-t/g-△ldh::cat的验证 | 第62页 |
| 3.3.5 蛋白表达质粒pEC-XK99E-cas3的构建和验证结果 | 第62-64页 |
| 3.3.6 蛋白表达质粒pEC-XK99E-cas3转入谷氨酸棒状杆菌后的验证 | 第64-65页 |
| 3.3.7 蛋白表达质粒pEC-XK99E-cas3与基因编辑质粒pXMJ19-t/g-△ldh::egfp、pXMJ19-t/g-△ldh::cat分别对谷氨酸棒状杆菌ldh基因的敲除与验证 | 第65-69页 |
| 3.4 结论 | 第69-70页 |
| 第四章 脱靶分析 | 第70-75页 |
| 4.1 前言 | 第70页 |
| 4.2 材料和方法 | 第70-72页 |
| 4.2.1 菌株与质粒 | 第70-71页 |
| 4.2.2 主要仪器,试剂及试剂配制 | 第71页 |
| 4.2.3 实验方法 | 第71-72页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第72-74页 |
| 4.4 结论 | 第74-75页 |
| 第五章 结论与展望 | 第75-77页 |
| 5.1 结论 | 第75-76页 |
| 5.2 展望 | 第76-77页 |
| 附图 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 文章与专利 | 第82页 |
