| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 动物早期胚胎发育 | 第16-28页 |
| 1.1 脊椎动物早期卵裂 | 第16-17页 |
| 1.1.1 快速卵裂的胚胎 | 第16-17页 |
| 1.1.2 缓慢卵裂的胚胎 | 第17页 |
| 1.2 母源-合子转换 | 第17-28页 |
| 1.2.1 卵源性物质的降解 | 第18-19页 |
| 1.2.2 合子基因组激活 | 第19-25页 |
| 1.2.3 MZT的调控机制 | 第25-28页 |
| 第二章 体细胞核移植重编程 | 第28-38页 |
| 2.1 动物体细胞核移植的研究 | 第28-29页 |
| 2.2 核移植重编程中的分子事件 | 第29-33页 |
| 2.2.1 供体细胞核膜破裂 | 第29-30页 |
| 2.2.2 激活 | 第30页 |
| 2.2.3 染色质重构 | 第30-32页 |
| 2.2.4 表观修饰的擦除与重建 | 第32-33页 |
| 2.3 重编程效率的影响因素与改进方法 | 第33-38页 |
| 2.3.1 核移植供体细胞的选择 | 第34页 |
| 2.3.2 卵母细胞的选择与去核 | 第34-35页 |
| 2.3.3 克隆胚胎的体外培养 | 第35页 |
| 2.3.4 异常组蛋白标记的修正 | 第35-36页 |
| 2.3.5 异常DNA甲基化的修正 | 第36-37页 |
| 2.3.6 Xist基因异常表达的修正 | 第37-38页 |
| 第三章 牛克隆胚胎中H3K27me3 的异常表达及修正 | 第38-54页 |
| 3.1 材料和试剂 | 第39页 |
| 3.2 方法 | 第39-44页 |
| 3.2.1 原代细胞分离与培养 | 第39-40页 |
| 3.2.2 卵母细胞的准备 | 第40页 |
| 3.2.3 体外受精 | 第40页 |
| 3.2.4 体细胞核移植 | 第40-41页 |
| 3.2.5 孤雌激活 | 第41页 |
| 3.2.6 显微注射 | 第41页 |
| 3.2.7 细胞转染 | 第41页 |
| 3.2.8 RNA提取、反转录PCR和实时荧光定量PCR | 第41-43页 |
| 3.2.9 免疫荧光染色 | 第43页 |
| 3.2.10 蛋白免疫印迹 | 第43-44页 |
| 3.3 结果 | 第44-52页 |
| 3.3.1 牛附植前IVF和 SCNT胚胎中H3K27me3 表达水平的检测 | 第44-45页 |
| 3.3.2 GSK343 处理导致牛克隆胚胎发育阻滞 | 第45-47页 |
| 3.3.3 EZH2 基因敲降抑制牛核移植胚胎发育能力 | 第47-52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-53页 |
| 3.5 小结 | 第53-54页 |
| 第四章 KDM6A过表达促进牛核移植重编程效率 | 第54-79页 |
| 4.1 材料和试剂 | 第54页 |
| 4.2 方法 | 第54-60页 |
| 4.2.1 动物组织RNA的提取 | 第54-55页 |
| 4.2.2 反转录PCR和实时定量PCR | 第55页 |
| 4.2.3 真核表达载体的构建 | 第55-56页 |
| 4.2.4 体外转录 | 第56-58页 |
| 4.2.5 显微注射 | 第58页 |
| 4.2.6 亚硫酸氢盐测序 | 第58-59页 |
| 4.2.7 RNA-seq | 第59-60页 |
| 4.3 结果 | 第60-75页 |
| 4.3.1 牛KDM6A基因过表达载体的构建 | 第60页 |
| 4.3.2 KDM6A促进牛核移植桑葚胚至囊胚转换 | 第60-63页 |
| 4.3.3 转录组测序数据的质量控制 | 第63-66页 |
| 4.3.4 转录组测序数据比对牛基因组数据 | 第66-67页 |
| 4.3.5 组间差异表达基因的生物学进程分析 | 第67-69页 |
| 4.3.6 KDM6A参与调节细胞粘附相关基因的表达 | 第69-70页 |
| 4.3.7 KDM6A参与调节X染色体连锁基因和印迹基因的表达 | 第70-72页 |
| 4.3.8 MBD3L2 敲降导致牛核移植重编程效率降低 | 第72-75页 |
| 4.4 讨论 | 第75-78页 |
| 4.5 小结 | 第78-79页 |
| 第五章 牛核移植重编程中体细胞记忆的研究 | 第79-93页 |
| 5.1 材料和试剂 | 第79-80页 |
| 5.2 方法 | 第80页 |
| 5.2.1 核移植供体细胞的准备 | 第80页 |
| 5.2.2 体细胞核移植 | 第80页 |
| 5.2.3 孤雌激活 | 第80页 |
| 5.2.4 体外受精 | 第80页 |
| 5.2.5 RNA-seq | 第80页 |
| 5.3 结果 | 第80-91页 |
| 5.3.1 转录组测序数据原始读值的分布状态 | 第80-82页 |
| 5.3.2 转录组测序数据的比对结果 | 第82页 |
| 5.3.3 BFF和 IVF8C差异表达基因的生物学进程分析 | 第82-83页 |
| 5.3.4 IVF8C和 NT8C差异表达基因的生物学进程分析 | 第83-84页 |
| 5.3.5 活化记忆基因与沉默记忆基因的鉴定 | 第84-86页 |
| 5.3.6 BFF、IVF8C和 NT8C差异表达基因的生物学进程分析 | 第86页 |
| 5.3.7 供体细胞、体外受精胚胎和核移植胚胎整体转录水平的分析 | 第86-88页 |
| 5.3.8 牛核移植重编程中待选体细胞记忆基因的展示 | 第88-91页 |
| 5.4 讨论 | 第91-92页 |
| 5.5 小结 | 第92-93页 |
| 第六章 KDM5B通过对体细胞记忆基因的双向调控改善牛核移植重编程 | 第93-106页 |
| 6.1 材料和试剂 | 第93页 |
| 6.2 方法 | 第93-95页 |
| 6.2.1 动物组织RNA的提取 | 第93-94页 |
| 6.2.2 反转录PCR和实时定量PCR | 第94页 |
| 6.2.3 牛KDM5B基因过表达载体的构建 | 第94页 |
| 6.2.4 体细胞核移植 | 第94页 |
| 6.2.5 孤雌激活 | 第94页 |
| 6.2.6 体外转录 | 第94页 |
| 6.2.7 显微注射 | 第94-95页 |
| 6.2.8 RNA-seq | 第95页 |
| 6.3 结果 | 第95-104页 |
| 6.3.1 KDM5B真核表达载体的构建 | 第95页 |
| 6.3.2 KDM5B过表达改善牛核移植重编程效率 | 第95-98页 |
| 6.3.3 转录组测序数据的质量控制 | 第98-99页 |
| 6.3.4 转录组测序数据的比对结果 | 第99-100页 |
| 6.3.5 KDM5B改善牛克隆胚胎合子激活时期的转录重编程 | 第100-101页 |
| 6.3.6 KDM5B修正牛SCNT重编程中异常的体细胞记忆 | 第101-102页 |
| 6.3.7 特定体细胞记忆基因表达模式的展示 | 第102-104页 |
| 6.4 讨论 | 第104-105页 |
| 6.5 小结 | 第105-106页 |
| 全文总结 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-126页 |
| 附录 | 第126-134页 |
| 致谢 | 第134-136页 |
| 个人简介 | 第136页 |
