| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-38页 |
| 1.1 三代虫简介 | 第20-25页 |
| 1.1.1 三代虫形态结构 | 第21-22页 |
| 1.1.2 三代虫分类学 | 第22-23页 |
| 1.1.3 三代虫感染宿主免疫反应 | 第23页 |
| 1.1.4 三代虫的危害以及防治策略 | 第23-25页 |
| 1.2 牛蒡子苷元研究进展 | 第25-28页 |
| 1.2.1 杀虫作用 | 第26页 |
| 1.2.2 抗炎作用 | 第26-27页 |
| 1.2.3 调节心血管系统 | 第27页 |
| 1.2.4 降血糖 | 第27-28页 |
| 1.2.5 抗肿瘤作用 | 第28页 |
| 1.2.6 其他生物活性 | 第28页 |
| 1.3 小分子化合物靶点鉴定方法概述 | 第28-34页 |
| 1.3.1 转录组学在药物靶点鉴定中的应用 | 第29-30页 |
| 1.3.2 蛋白组学在靶点鉴定中的应用 | 第30-32页 |
| 1.3.3 直接靶点鉴定方法 | 第32-34页 |
| 1.4 金纳米颗粒概述 | 第34-36页 |
| 1.4.1 金纳米粒子的制备 | 第34-35页 |
| 1.4.2 金纳米粒子表面修饰 | 第35页 |
| 1.4.3 金纳米粒子在药物靶点鉴定中的应用 | 第35-36页 |
| 1.5 选题目的和意义 | 第36-38页 |
| 第二章 小林三代虫感染金鱼实验模型的建立 | 第38-56页 |
| 2.1 材料与方法 | 第38-43页 |
| 2.1.1 动物和药品 | 第38页 |
| 2.1.2 试剂和仪器 | 第38-39页 |
| 2.1.3 无虫金鱼的获得 | 第39页 |
| 2.1.4 小林三代虫纯化培养 | 第39页 |
| 2.1.5 三代虫的种类鉴定 | 第39-41页 |
| 2.1.6 小林三代虫保种 | 第41页 |
| 2.1.7 酶切法快速鉴定金鱼三代虫种类 | 第41-42页 |
| 2.1.8 金鱼对小林三代虫感染的免疫应答 | 第42-43页 |
| 2.2 结果与分析 | 第43-54页 |
| 2.2.1 寄生金鱼三代虫种类 | 第43-45页 |
| 2.2.2 小林三代虫形态学鉴定结果 | 第45页 |
| 2.2.3 小林三代虫分子生物学鉴定结果 | 第45-49页 |
| 2.2.4 酶切法鉴定小林三代虫-金鱼模型纯化结果 | 第49页 |
| 2.2.5 金鱼对小林三代虫感染的免疫应答 | 第49-54页 |
| 2.3 讨论 | 第54-55页 |
| 2.3.1 小林三代虫是自然感染金鱼优势种类 | 第54-55页 |
| 2.3.2 小林三代虫感染金鱼实验模型可稳定传代 | 第55页 |
| 2.3.3 细胞因子的表达与清除三代虫感染有关 | 第55页 |
| 2.4 小结 | 第55-56页 |
| 第三章 牛蒡子苷元安全性评价及作用小林三代虫形态学研究 | 第56-71页 |
| 3.1 材料与方法 | 第56-60页 |
| 3.1.1 试验动物 | 第56页 |
| 3.1.2 试验药品 | 第56页 |
| 3.1.3 试剂和仪器 | 第56页 |
| 3.1.4 杀虫活性评价 | 第56-57页 |
| 3.1.5 金鱼安全性评价 | 第57-59页 |
| 3.1.6 ARG对三代虫活动能力的影响 | 第59页 |
| 3.1.7 ARG对三代虫超微结构的影响 | 第59-60页 |
| 3.1.8 ARG对三代虫肌肉结构的影响 | 第60页 |
| 3.2 结果与分析 | 第60-68页 |
| 3.2.1 ARG杀虫活性 | 第60-62页 |
| 3.2.2 ARG对金鱼的安全性评价结果 | 第62-64页 |
| 3.2.3 ARG处理后三代虫作用症状 | 第64-65页 |
| 3.2.4 三代虫表皮超微结构变化 | 第65-66页 |
| 3.2.5 三代虫内部超微结构变化 | 第66-68页 |
| 3.2.6 肌肉结构损伤结果 | 第68页 |
| 3.3 讨论 | 第68-70页 |
| 3.3.1 ARG显示较低的毒性 | 第69页 |
| 3.3.2 ARG显示新颖的杀灭三代虫机制 | 第69-70页 |
| 3.3.3 ARG杀虫机制与表皮破坏和呼吸抑制有关 | 第70页 |
| 3.4 小结 | 第70-71页 |
| 第四章 牛蒡子苷元对小林三代虫转录组水平的影响 | 第71-95页 |
| 4.1 材料与方法 | 第71-75页 |
| 4.1.1 供试动物 | 第71页 |
| 4.1.2 试验药品 | 第71页 |
| 4.1.3 试剂和仪器 | 第71页 |
| 4.1.4 小林三代虫的培养 | 第71-72页 |
| 4.1.5 ARG药浴三代虫的收集 | 第72页 |
| 4.1.6 总RNA提取及定量 | 第72页 |
| 4.1.7 cDNA文库的构建、质量检测及测序 | 第72-74页 |
| 4.1.8 测序数据组装和注释 | 第74页 |
| 4.1.9 基因差异表达分析 | 第74页 |
| 4.1.10 GO和 KEGG网络富集分析 | 第74页 |
| 4.1.11 qRT-PCR验证 | 第74-75页 |
| 4.2 结果与分析 | 第75-90页 |
| 4.2.1 ARG药浴的三代虫活动能力和存活率统计结果 | 第75-76页 |
| 4.2.2 总RNA质量检测 | 第76-77页 |
| 4.2.3 测序结果统计 | 第77页 |
| 4.2.4 转录本拼接统计 | 第77-78页 |
| 4.2.5 基因功能注释 | 第78-81页 |
| 4.2.6 基因差异表达分析 | 第81-82页 |
| 4.2.7 差异表达基因GO富集分析 | 第82-85页 |
| 4.2.8 差异表达基因KEGG富集分析 | 第85-87页 |
| 4.2.9 差异表达基因韦恩图分析 | 第87-90页 |
| 4.2.10 qRT-PCR验证结果 | 第90页 |
| 4.3 讨论 | 第90-94页 |
| 4.3.1 三代虫来源的RNA筛选方法可靠 | 第90-92页 |
| 4.3.2 转录组测序获得大量三代虫基因信息 | 第92页 |
| 4.3.3 ARG杀虫作用于体壁结构破坏有关 | 第92-93页 |
| 4.3.4 ARG药浴引起三代虫能量代谢紊乱 | 第93-94页 |
| 4.4 小结 | 第94-95页 |
| 第五章 牛蒡子苷元作用小林三代虫蛋白质组比较研究 | 第95-118页 |
| 5.1 材料与方法 | 第95-98页 |
| 5.1.1 供试动物 | 第95页 |
| 5.1.2 试剂和仪器 | 第95页 |
| 5.1.3 主要试剂配制 | 第95-96页 |
| 5.1.4 ARG药浴三代虫的收集 | 第96-97页 |
| 5.1.5 iTRAQ蛋白定量 | 第97页 |
| 5.1.6 蛋白质定量和差异蛋白GO、KEGG通路富集分析 | 第97页 |
| 5.1.7 转录组和蛋白质组关联分析 | 第97页 |
| 5.1.8 qRT-PCR分析 | 第97-98页 |
| 5.1.9 ATP含量检测 | 第98页 |
| 5.2 结果与分析 | 第98-114页 |
| 5.2.1 蛋白质量检测结果 | 第98-99页 |
| 5.2.2 蛋白质鉴定信息 | 第99-101页 |
| 5.2.3 蛋白质COG功能注释 | 第101-102页 |
| 5.2.4 差异表达蛋白鉴定与分析 | 第102-108页 |
| 5.2.5 蛋白质组与转录组关联分析 | 第108-111页 |
| 5.2.6 ARG对三代虫ATP酶以及呼吸链复合物基因表达的影响 | 第111-113页 |
| 5.2.7 ARG对小林三代虫ATP含量的影响 | 第113-114页 |
| 5.3 讨论 | 第114-117页 |
| 5.3.1 iTRAQ技术为研究ARG的杀虫机制奠定基础 | 第114-115页 |
| 5.3.2 ARG作用下小林三代虫差异蛋白分析 | 第115-117页 |
| 5.4 小结 | 第117-118页 |
| 第六章 利用金纳米探针鉴定牛蒡子苷元作用小林三代虫靶点 | 第118-134页 |
| 6.1 材料与方法 | 第118-123页 |
| 6.1.1 供试动物 | 第118页 |
| 6.1.2 试剂与仪器 | 第118-119页 |
| 6.1.3 化合物2 的合成与杀虫活性评价 | 第119-120页 |
| 6.1.4 化合物6和10 的设计与合成 | 第120-122页 |
| 6.1.5 金纳米探针GNP-6和GNP-10 的合成 | 第122页 |
| 6.1.6 金纳米探针透射电镜观察 | 第122页 |
| 6.1.7 傅立叶变换红外光谱检测 | 第122页 |
| 6.1.8 HPLC-MS/MS定量配体 | 第122页 |
| 6.1.9 金纳米探针虫体摄取的电镜观察 | 第122-123页 |
| 6.1.10 金纳米探针离体杀虫活性评价 | 第123页 |
| 6.1.11 小林三代虫裂解液的准备 | 第123页 |
| 6.1.12 靶点蛋白的鉴定 | 第123页 |
| 6.2 结果与分析 | 第123-132页 |
| 6.2.1 化合物1-10 的结构表征 | 第123-126页 |
| 6.2.2 化合物2 在体作用小林三代虫活性 | 第126页 |
| 6.2.3 金纳米探针形貌观察和粒径分布 | 第126-127页 |
| 6.2.4 金纳米探针傅里叶变换红外光谱检测 | 第127页 |
| 6.2.5 金纳米探针的表面配体定量 | 第127-129页 |
| 6.2.6 金纳米探针虫体定位研究及杀虫活性评价 | 第129-130页 |
| 6.2.7 化合物1 的靶点鉴定 | 第130-132页 |
| 6.3 讨论 | 第132页 |
| 6.3.1 MyosinⅡ是ARG作用小林三代虫直接靶点 | 第132页 |
| 6.3.2 肌球蛋白是一类重要的药物驱虫靶点 | 第132页 |
| 6.4 小结 | 第132-134页 |
| 第七章 结论 | 第134-135页 |
| 参考文献 | 第135-153页 |
| 附录 | 第153-179页 |
| 致谢 | 第179-180页 |
| 作者简介 | 第180-181页 |
