| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-35页 |
| 1.1 选题的目的和意义 | 第14页 |
| 1.2 研究思路和主要内容 | 第14-15页 |
| 1.3 风险评估及规避方案 | 第15-16页 |
| 1.4 递呈抗原表位的载体在口蹄疫表位疫苗中的应用 | 第16-20页 |
| 1.4.1 前言 | 第16页 |
| 1.4.2 构建口蹄疫表位疫苗的关键抗原表位 | 第16-17页 |
| 1.4.3 免疫刺激复合物作为递呈口蹄疫抗原表位的载体 | 第17页 |
| 1.4.4 脂质体作为递呈口蹄疫抗原表位的载体 | 第17-18页 |
| 1.4.5 纳米颗粒作为递呈口蹄疫抗原表位的载体 | 第18页 |
| 1.4.6 载体蛋白作为递呈口蹄疫抗原表位的载体 | 第18-19页 |
| 1.4.7 病毒活载体作为递呈口蹄疫抗原表位的载体 | 第19页 |
| 1.4.8 细菌活载体作为递呈口蹄疫抗原表位的载体 | 第19-20页 |
| 1.4.9 小结 | 第20页 |
| 1.5 鞭毛蛋白作为一种疫苗佐剂的研究进展 | 第20-35页 |
| 1.5.0 前言 | 第20-21页 |
| 1.5.1 鞭毛蛋白的结构特征 | 第21-22页 |
| 1.5.2 鞭毛蛋白介导的免疫反应 | 第22-25页 |
| 1.5.3 鞭毛蛋白作为佐剂与疫苗抗原混合免疫 | 第25-26页 |
| 1.5.4 在活细菌株中鞭毛蛋白与外源抗原的嵌合表达或共展示 | 第26-28页 |
| 1.5.5 鞭毛蛋白和抗原结合的重组融合蛋白 | 第28-30页 |
| 1.5.6 鞭毛蛋白作为免疫增强剂结合于纳米颗粒 | 第30页 |
| 1.5.7 鞭毛蛋白作为抗肿瘤免疫佐剂 | 第30-31页 |
| 1.5.8 TLR激动剂的联合递送 | 第31-32页 |
| 1.5.9 基于鞭毛蛋白载体的候选疫苗的临床研究 | 第32-34页 |
| 1.5.10 小结 | 第34-35页 |
| 第二章 Flgellin-FMDV重组融合蛋白的构建与表达 | 第35-53页 |
| 2.1 材料和方法 | 第35-41页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第35-36页 |
| 2.1.2 试验试剂及耗材 | 第36-37页 |
| 2.1.3 试验仪器和设备 | 第37-38页 |
| 2.1.4 Flgellin-FMDV重组融合基因的构建 | 第38页 |
| 2.1.5 Flgellin-FMDV重组质粒的提取 | 第38页 |
| 2.1.6 Flgellin-FMDV重组质粒的转化 | 第38页 |
| 2.1.7 Flgellin-FMDV重组融合基因的表达 | 第38-39页 |
| 2.1.7.1 Flgellin-FMDV重组融合蛋白的小量表达 | 第38-39页 |
| 2.1.7.2 Flgellin-FMDV重组融合蛋白的大量表达 | 第39页 |
| 2.1.8 重组融合蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| 2.1.8.1 可溶性重组融合蛋白的纯化 | 第39页 |
| 2.1.8.2 重组融合蛋白包涵体的纯化 | 第39-40页 |
| 2.1.8.3 重组融合蛋白包涵体蛋白的复性 | 第40页 |
| 2.1.9 重组融合蛋白内毒素的去除 | 第40页 |
| 2.1.10 重组融合蛋白内毒素的测定 | 第40-41页 |
| 2.1.11 SDS-PAGE | 第41页 |
| 2.1.12 Western blotting分析 | 第41页 |
| 2.2 结果 | 第41-50页 |
| 2.2.1 Flgellin-FMDV重组融合基因的构建 | 第41-44页 |
| 2.2.2 Flgellin-FMDV重组融合基因的酶切鉴定 | 第44-45页 |
| 2.2.3 Flgellin-FMDV重组融合蛋白的表达和纯化 | 第45-48页 |
| 2.2.4 Flgellin-FMDV重组融合蛋白蛋白浓度的测定 | 第48-49页 |
| 2.2.5 Flgellin-FMDV重组融合蛋白的残余内毒素含量的测定 | 第49-50页 |
| 2.3 讨论 | 第50-51页 |
| 2.4 小结 | 第51-53页 |
| 第三章 重组融合蛋白的功能鉴定 | 第53-59页 |
| 3.1 材料和方法 | 第53-55页 |
| 3.1.1 质粒和细胞 | 第53页 |
| 3.1.2 试验试剂及耗材 | 第53-54页 |
| 3.1.3 试验仪器和设备 | 第54页 |
| 3.1.4 口蹄疫O型液相阻断ELISA(LPB-ELISA) | 第54页 |
| 3.1.5 双抗夹心ELISA法分析重组蛋白的抗原性 | 第54-55页 |
| 3.1.6 hTLR5 质粒转染RAW264.7 细胞 | 第55页 |
| 3.1.7 重组融合蛋白的TLR5 特异性生物测定 | 第55页 |
| 3.2 结果 | 第55-57页 |
| 3.2.1 重组融合蛋白的抗原性 | 第55-56页 |
| 3.2.2 重组融合蛋白的TLR5 生物活性 | 第56-57页 |
| 3.3 讨论 | 第57-58页 |
| 3.4 小结 | 第58-59页 |
| 第四章 重组融合蛋白的免疫原性及保护效力 | 第59-76页 |
| 4.1 材料和方法 | 第59-62页 |
| 4.1.1 病毒、细胞与实验动物 | 第59页 |
| 4.1.2 试验试剂及耗材 | 第59-60页 |
| 4.1.3 试验仪器和设备 | 第60页 |
| 4.1.4 小鼠免疫 | 第60页 |
| 4.1.5 豚鼠免疫和攻毒保护试验 | 第60-61页 |
| 4.1.6 豚鼠的GPID50测定 | 第61页 |
| 4.1.7 血清抗体的ELISA检测 | 第61页 |
| 4.1.8 病毒中和试验 | 第61-62页 |
| 4.1.9 淋巴细胞增殖试验 | 第62页 |
| 4.1.10 细胞因子水平检测 | 第62页 |
| 4.1.11 统计学分析 | 第62页 |
| 4.2 结果 | 第62-74页 |
| 4.2.1 鞭毛蛋白-FMDV融合蛋白诱导小鼠产生高水平FMDV特异性IgG反应 | 第62-65页 |
| 4.2.2 FTME融合蛋白通过肌肉和皮下途径诱导了类似强度的抗体反应 | 第65-66页 |
| 4.2.3 FTME与其它指定佐剂之间没有观察到协同作用 | 第66-68页 |
| 4.2.4 鞭毛蛋白-FMDV融合蛋白在豚鼠体内的免疫原性 | 第68-70页 |
| 4.2.5 鞭毛蛋白-FMDV蛋白诱导豚鼠细胞因子水平和细胞免疫应答 | 第70-72页 |
| 4.2.6 豚鼠测毒试验 | 第72-73页 |
| 4.2.7 重组融合蛋白对豚鼠攻毒的保护效力 | 第73-74页 |
| 4.3 讨论 | 第74-75页 |
| 4.4 小结 | 第75-76页 |
| 第五章 全文结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-92页 |
| 附录 | 第92-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 作者简历 | 第95页 |
