致谢 | 第4-9页 |
摘要 | 第9-11页 |
第一章 文献综述 | 第11-19页 |
1.1 乙型脑炎简介 | 第11-14页 |
1.1.1 乙型脑炎及其危害 | 第11-12页 |
1.1.2 乙型脑炎病毒简介 | 第12-13页 |
1.1.3 乙型脑炎病毒入侵过程及其致病机理 | 第13-14页 |
1.2 IFITM研究进展 | 第14-16页 |
1.2.1 IFITM家族简介 | 第14-15页 |
1.2.2 IFITM的抗病毒功能及可能的机制 | 第15-16页 |
1.3 ABHD16A研究进展 | 第16-19页 |
1.3.1 ABHD家族概述 | 第16-18页 |
1.3.1.1 ABHD的生理调节功能 | 第16页 |
1.3.1.2 ABHD作为潜在的药物靶点 | 第16-17页 |
1.3.1.3 ABHD具有多种酶活性 | 第17页 |
1.3.1.4 ABHD与肿瘤发生 | 第17-18页 |
1.3.2 ABHD16A生物学功能 | 第18-19页 |
第二章 引言 | 第19-21页 |
2.1 研究的目的与意义 | 第19页 |
2.2 主要研究内容 | 第19-20页 |
2.3 技术路线 | 第20-21页 |
第三章 猪IFITMs抗乙型脑炎病毒作用的研究 | 第21-39页 |
3.1 材料与方法 | 第21-34页 |
3.1.1 材料 | 第21-23页 |
3.1.1.1 实验材料 | 第21页 |
3.1.1.2 实验仪器 | 第21-22页 |
3.1.1.3 实验试剂与耗材 | 第22-23页 |
3.1.2 方法 | 第23-34页 |
3.1.2.1 细胞培养 | 第23-24页 |
3.1.2.2 sIFITMs真核表达载体的构建 | 第24-28页 |
3.1.2.3 sIFITMs过表达细胞系的构建 | 第28-30页 |
3.1.2.4 sIFITMs敲除载体的构建 | 第30-31页 |
3.1.2.5 病毒感染 | 第31-32页 |
3.1.2.6 RT-PCR检测病毒 | 第32-33页 |
3.1.2.7 Western Blot检测蛋白表达 | 第33-34页 |
3.2 结果与分析 | 第34-39页 |
3.2.1 sIFITMs真核表达载体构建的结果 | 第34-35页 |
3.2.2 sIFITMs敲除载体构建的结果 | 第35-36页 |
3.2.3 sIFITMs过表达细胞系的构建与筛选 | 第36页 |
3.2.4 过表达sIFITMs对JEV病毒复制的影响 | 第36-38页 |
3.2.5 敲除sIFITMs对JEV病毒复制的影响 | 第38-39页 |
第四章 sIFITM1与sABHD16A相互作用的研究 | 第39-58页 |
4.1 材料与方法 | 第39-47页 |
4.1.1 材料 | 第39-40页 |
4.1.1.1 实验材料 | 第39页 |
4.1.1.2 实验仪器 | 第39页 |
4.1.1.3 实验试剂与耗材 | 第39-40页 |
4.1.2 方法 | 第40-47页 |
4.1.2.1 sABHD16A生物信息学分析 | 第40-42页 |
4.1.2.2 sABHD16A基因克隆与表达载体构建 | 第42-43页 |
4.1.2.3 sABHD16A功能初探 | 第43-44页 |
4.1.2.4 酵母双杂交载体构建 | 第44页 |
4.1.2.5 sIFITMs与sABHD16A的酵母双杂交系统分析 | 第44-46页 |
4.1.2.6 sIFITMs与sABHD16A的亚细胞定位 | 第46-47页 |
4.2 结果与分析 | 第47-56页 |
4.2.1 ABHD16A的多序列比对结果 | 第47页 |
4.2.2 系统进化树构建结果 | 第47-48页 |
4.2.3 sABHD16A理化性质的预测 | 第48-49页 |
4.2.4 sabhd16a基因克隆和表达载体构建结果 | 第49-52页 |
4.2.5 探究sABHD16A功能的结果 | 第52页 |
4.2.6 sIFITMs与sABHD16A酵母双杂交结果 | 第52-54页 |
4.2.7 sIFITM1与sABHD16A的亚细胞定位结果 | 第54-56页 |
4.3 讨论 | 第56-58页 |
第五章 sIFITM1抗病毒机制的初步探究 | 第58-68页 |
5.1 材料与方法 | 第58-61页 |
5.1.1 材料 | 第58页 |
5.1.1.1 实验材料 | 第58页 |
5.1.1.2 实验仪器 | 第58页 |
5.1.1.3 实验试剂与耗材 | 第58页 |
5.1.2 方法 | 第58-61页 |
5.1.2.1 sabhd16a敲除载体构建 | 第58页 |
5.1.2.2 sabhd16a敲除载体的转染 | 第58-59页 |
5.1.2.3 敲除sabhd16a基因细胞系的构建与筛选 | 第59页 |
5.1.2.4 敲除sabhd16a对JEV复制的影响 | 第59-60页 |
5.1.2.5 过表达sABHD16A对JEV复制的影响 | 第60页 |
5.1.2.6 sIFITM1与sABHD16A共表达对JEV复制的探究 | 第60页 |
5.1.2.7 sIFITM1S-棕榈酰化位点突变体构建 | 第60-61页 |
5.1.2.8 sIFITM1S-棕榈酰化位点突突变体对JEV复制的影响 | 第61页 |
5.2 结果与分析 | 第61-67页 |
5.2.1 sabhd16a基因敲除载体构建的结果 | 第61-62页 |
5.2.2 sabhd16a敲除的结果 | 第62页 |
5.2.3 基因敲除sabhd16a细胞系构建结果 | 第62-63页 |
5.2.4 敲除sabhd16对JEV复制影响 | 第63页 |
5.2.5 过表达sABHD16A对JEV复制影响 | 第63-64页 |
5.2.6 sIFITM1与sABHD16A共表达对JEV复制影响的结果 | 第64-65页 |
5.2.7 sIFITM1S-棕榈酰化位点突变体构建的结果 | 第65-66页 |
5.2.8 sIFITM1S-棕榈酰化位点突变体对JEV复制的影响 | 第66-67页 |
5.3 讨论 | 第67-68页 |
第六章 sIFITMs与sABHD16A对炎症因子表达的影响 | 第68-73页 |
6.1 材料与方法 | 第68-69页 |
6.1.1 材料 | 第68页 |
6.1.1.1 实验材料 | 第68页 |
6.1.1.2 实验仪器 | 第68页 |
6.1.1.3 实验试剂与耗材 | 第68页 |
6.1.2 方法 | 第68-69页 |
6.1.2.1 感染JEV病毒对sifitm1与sabhd16a表达的影响 | 第68页 |
6.1.2.2 sIFITM1、sABHD16A在炎症因子表达中的影响 | 第68-69页 |
6.2 结果与分析 | 第69-72页 |
6.2.1 JEV感染对sifitm1与sabhd16a表达的影响 | 第69-70页 |
6.2.2 过表达sIFITM1、sABHD16A对炎症因子表达影响的结果 | 第70-72页 |
6.3 讨论 | 第72-73页 |
第七章 结论与展望 | 第73-74页 |
7.1 结论 | 第73页 |
7.2 展望 | 第73-74页 |
附表:引物序列 | 第74-75页 |
参考文献 | 第75-84页 |
ABSTRACT | 第84-86页 |