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DON诱导断奶仔猪神经毒性的作用机理研究

致谢第5-6页
摘要第6-8页
ABSTRACT第8-11页
主要符号注释表第17-19页
文献综述第19-26页
引言第26-27页
1 材料与方法第27-36页
    1.1 试验动物第27页
    1.2 试剂材料第27-28页
    1.3 仪器第28页
    1.4 禾谷镰刀菌的产毒培养第28-29页
        1.4.1 复苏禾谷镰刀菌第28页
        1.4.2 配制禾谷镰刀菌孢子液第28页
        1.4.3 制备玉米产毒培养基第28-29页
    1.5 霉变玉米中DON的测定第29页
        1.5.1 样品的预处理第29页
        1.5.2 样品检测第29页
    1.6 断奶仔猪DON体内试验第29页
        1.6.1 试验动物的选择、分组与管理第29页
        1.6.2 样品采集与处理第29页
    1.7 日粮组成第29-30页
    1.8 DON对海马组织形态的影响第30-31页
        1.8.1 4%多聚甲醛固定液的配制第30页
        1.8.2 组织包埋第30页
        1.8.3 切片第30页
        1.8.4 HE染色第30-31页
    1.9 电镜观察DON对仔猪海马组织超微结构的影响第31页
        1.9.1 组织包埋第31页
        1.9.2 铅铀双重染色第31页
    1.10 仔猪脑组织中氧化与抗氧化指标的测定第31页
    1.11 仔猪脑组织中神经递质浓度的测定第31-32页
    1.12 仔猪脑组织中钙离子浓度的测定第32页
    1.13 仔猪脑组织中CaM和CaMKⅡ mRNA基因相对表达量的检测第32-33页
        1.13.1 引物设计与合成第32页
        1.13.2 总RNA的提取第32-33页
        1.13.3 基因反转录第33页
        1.13.4 qRT-PCR扩增第33页
        1.13.5 实时荧光定量PCR检测第33页
    1.14 Westernblotting法检测仔猪脑组织中钙调通路中相关蛋白的表达第33-35页
        1.14.1 组织蛋白的提取第33页
        1.14.2 组织蛋白的浓度检测第33-34页
        1.14.3 凝胶电泳步骤第34-35页
    1.15 数据处理第35-36页
2 结果与分析第36-50页
    2.1 DON对仔猪海马组织形态的影响第36-38页
        2.1.1 DON对仔猪海马组织形态的影响第36-37页
        2.1.2 DON对海马组织超微结构的影响第37-38页
    2.2 仔猪脑组织中脂质过氧化指标的检测第38-41页
        2.2.1 DON对仔猪脑组织中SOD水平的影响第38页
        2.2.2 DON对仔猪脑组织中GSH-Px水平的影响第38-39页
        2.2.3 DON对仔猪脑组织中MDA水平的影响第39-40页
        2.2.4 DON对仔猪脑组织中NO水平的影响第40-41页
    2.3 仔猪脑组织中神经递质的检测第41-44页
        2.3.1 DON对仔猪脑组织中5-HT水平的影响第41页
        2.3.2 DON对仔猪脑组织中NE水平的影响第41-42页
        2.3.3 DON对仔猪脑组织中DA水平的影响第42-43页
        2.3.4 DON对仔猪脑组织中GABA水平的影响第43页
        2.3.5 DON对仔猪脑组织中ACH水平的影响第43-44页
    2.4 仔猪脑组织中钙离子浓度的检测第44-45页
    2.5 仔猪脑组织中钙调相关mRNA表达量检测结果第45-48页
        2.5.1 PCR产物凝胶电泳第45-46页
        2.5.2 仔猪脑组织中CaMmRNA相对表达量结果第46-47页
        2.5.3 仔猪脑组织中CaMKⅡ mRNA相对表达量结果第47-48页
    2.6 DON对仔猪脑组织中钙调通路相关蛋白水平的影响第48-50页
        2.6.1 DON对仔猪脑组织中CaM蛋白水平的影响第48-49页
        2.6.2 DON对仔猪脑组织中CaMKⅡ蛋白磷酸化水平的影响第49-50页
3 讨论第50-53页
    3.1 DON对海马组织结构的影响第50页
    3.2 DON对仔猪脑组织脂质过氧化的影响第50-51页
    3.3 DON对仔猪脑组织中神经递质的影响第51页
    3.4 DON诱导神经毒性的钙调蛋白通路作用机制第51-53页
4 结论第53-54页
参考文献第54-61页
作者简介第61-62页
附录第62-70页

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