| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词 | 第18-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-34页 |
| 1.1 设施农业中土壤次生盐渍化概论 | 第21-29页 |
| 1.1.1 设施土壤次生盐渍化形成原因及现状 | 第21-23页 |
| 1.1.2 土壤次生盐渍化对农业生产影响 | 第23-27页 |
| 1.1.2.1 土壤次生盐渍化破坏土壤平衡 | 第23-24页 |
| 1.1.2.2 土壤次生盐渍化对作物生长发育的伤害 | 第24-27页 |
| 1.1.3 设施农业中土壤次生盐渍化防治与解决措施 | 第27-29页 |
| 1.1.3.1 合理施肥与灌溉 | 第27页 |
| 1.1.3.2 合理灌溉 | 第27-28页 |
| 1.1.3.3 推广使用有机肥改良土壤 | 第28页 |
| 1.1.3.4 无土栽培技术的推广应用 | 第28页 |
| 1.1.3.5 外源喷施对作物环境无害物质 | 第28-29页 |
| 1.2 气体信号分子NO在植物中研究现状 | 第29-31页 |
| 1.2.1 植物体内NO合成机制 | 第29-30页 |
| 1.2.2 植物体内NO代谢机制 | 第30页 |
| 1.2.3 植物体内NO功能研究 | 第30-31页 |
| 1.3 植物中血红蛋白功能研究 | 第31-32页 |
| 1.4 植物体中S-亚硝基谷胱甘肽还原酶(GSNOR) | 第32-33页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第33-34页 |
| 第二章 外源施加NO供体对硝酸盐胁迫下菠菜幼苗ROS和RNS代谢的影响 | 第34-51页 |
| 2.1 材料与处理 | 第34-35页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第34页 |
| 2.1.2 试剂 | 第34页 |
| 2.1.3 植物材料处理 | 第34-35页 |
| 2.2 测定指标及方法 | 第35-39页 |
| 2.2.1 鲜重、干重、相对含水量及叶绿素含量的测定 | 第35-36页 |
| 2.2.2 硫代巴比妥酸反应物(TBARS)和H_2O_2含量的测定 | 第36页 |
| 2.2.3 抗氧化酶活性及可溶性蛋白含量的测定 | 第36-37页 |
| 2.2.4 ROS和NO含量测定 | 第37-38页 |
| 2.2.5 NR及NOS活性测定 | 第38-39页 |
| 2.2.6 SNO含量测定 | 第39页 |
| 2.2.7 数据处理 | 第39页 |
| 2.3 结果分析 | 第39-49页 |
| 2.3.1 硝酸盐胁迫对不同抗性菠菜幼苗生长的影响 | 第39-41页 |
| 2.3.2 硝酸盐胁迫对不同抗性品种菠菜幼苗根和叶片中TBARS的影响 | 第41-42页 |
| 2.3.3 硝酸盐胁迫对不同抗性品种菠菜幼苗根和叶片中H_2O_2含量的影响 | 第42-43页 |
| 2.3.4 外源施加NO供体对硝酸盐胁迫下菠菜根中TBARS的影响 | 第43-44页 |
| 2.3.5 外源施加NO供体对硝酸盐胁迫下菠菜幼苗根中ROS的影响 | 第44-45页 |
| 2.3.6 外源施加NO供体对酸盐胁迫下菠菜幼苗根中抗氧化酶活性的影响 | 第45-46页 |
| 2.3.7 外源施加NO供体对硝酸盐胁迫下菠菜根中NR和NOS活性的影响 | 第46-47页 |
| 2.3.8 外源施加NO供体对硝酸盐胁迫下菠菜根中NO含量的影响 | 第47-48页 |
| 2.3.9 外源施加NO供体对硝酸盐胁迫下菠菜根系中SNO含量的影响 | 第48-49页 |
| 2.4 讨论 | 第49-51页 |
| 第三章 硝酸盐胁迫下菠菜SoHb功能分析 | 第51-68页 |
| 3.1 材料与处理 | 第51-53页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第51页 |
| 3.1.2 酶及生化试剂 | 第51页 |
| 3.1.3 菌株与载体 | 第51-52页 |
| 3.1.4 引物 | 第52页 |
| 3.1.5 材料处理 | 第52-53页 |
| 3.1.5.1 菠菜培养与处理 | 第52页 |
| 3.1.5.2 拟南芥培养与处理 | 第52-53页 |
| 3.2 测定指标及方法 | 第53-57页 |
| 3.2.1 总RNA提取 | 第53页 |
| 3.2.2 RNA反转录合成cDNA | 第53-54页 |
| 3.2.3 pET32a-SoHb原核表达载体的构建 | 第54-55页 |
| 3.2.3.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第54-55页 |
| 3.2.3.2 pET32a-SoHb原核表达载体的构建 | 第55页 |
| 3.2.4 pET32a-SoHb重组工程菌的蛋白表达、纯化与多克隆抗体制备 | 第55页 |
| 3.2.5 western blot分析 | 第55-56页 |
| 3.2.6 pET32a-SoHb重组菌的硝化胁迫耐受性分析 | 第56页 |
| 3.2.7 硫代巴比妥酸反应物(TBARS)的测定 | 第56页 |
| 3.2.8 抗氧化酶活性及可溶性蛋白含量的测定 | 第56页 |
| 3.2.9 NO含量测定 | 第56页 |
| 3.2.10 叶绿素荧光测定 | 第56页 |
| 3.2.11 基因表达水平分析 | 第56-57页 |
| 3.2.12 数据处理 | 第57页 |
| 3.3 结果分析 | 第57-66页 |
| 3.3.1 原核表达载体pET32a-SoHb构建 | 第57-58页 |
| 3.3.2 SoHb蛋白诱导与纯化 | 第58-59页 |
| 3.3.3 抗体制备 | 第59页 |
| 3.3.4 pET32a-SoHb对NO耐受性分析 | 第59-60页 |
| 3.3.5 SoHb过表达转基因拟南芥Hb蛋白表达分析 | 第60-61页 |
| 3.3.6 SoHb过表达转基因拟南芥对硝酸盐胁迫耐受性分析 | 第61-62页 |
| 3.3.7 硝酸盐胁迫下转基因植株中抗氧化物酶活性及基因表达分析 | 第62-63页 |
| 3.3.8 SoHb过表达转基因拟南芥中胁迫应答基因表达分析 | 第63-64页 |
| 3.3.9 SoHb过表达转基因拟南芥植株NO的耐受性分析 | 第64-65页 |
| 3.3.10 SoHb过表达转基因拟南芥植株的开花时间分析 | 第65-66页 |
| 3.4 讨论 | 第66-68页 |
| 第四章 菠菜S-亚硝基谷胱甘肽还原酶(SoGSNOR)基因克隆与表达分析 | 第68-88页 |
| 4.1 材料与处理 | 第69-70页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第69页 |
| 4.1.2 材料处理 | 第69页 |
| 4.1.3 菌株与质粒 | 第69页 |
| 4.1.4 酶及生化试剂 | 第69页 |
| 4.1.5 引物 | 第69-70页 |
| 4.2 实验方法 | 第70-76页 |
| 4.2.1 总RNA提取 | 第70页 |
| 4.2.2 RNA反转录合成cDNA | 第70页 |
| 4.2.3 菠菜中S-亚硝基化谷胱甘肽还原酶基因全长的克隆 | 第70-71页 |
| 4.2.3.1 S-亚硝基化谷胱甘肽还原酶基因的5'端序列克隆 | 第70-71页 |
| 4.2.3.2 采用3'RACE获得3'端序列 | 第71页 |
| 4.2.3.3 菠菜S-亚硝基化谷胱甘肽还原酶基因全长克隆 | 第71页 |
| 4.2.4 S-亚硝基谷胱甘肽还原酶基因信息学分析 | 第71-72页 |
| 4.2.5 菠菜不同处理中SoGSNOR基因表达检测 | 第72页 |
| 4.2.6 菠菜不同处理中SoGSNOR蛋白表达检测 | 第72页 |
| 4.2.7 SoGSNOR基因原核表达载体构建 | 第72页 |
| 4.2.8 pET32a-SoGSNOR融合蛋白表达、纯化与多克隆抗体制备 | 第72页 |
| 4.2.9 SoGSNOR基因植物表达载体构建 | 第72-73页 |
| 4.2.10 SoGSNOR基因转化烟草 | 第73页 |
| 4.2.11 转SoGSNOR基因烟草鉴定 | 第73-74页 |
| 4.2.12 硝酸盐胁迫相关S-亚硝基化蛋白分离纯化与鉴定 | 第74-76页 |
| 4.2.13 数据处理 | 第76页 |
| 4.3 结果与分析 | 第76-86页 |
| 4.3.1 SoGSNOR基因的克隆 | 第76-78页 |
| 4.3.2 SoGSNOR的生物信息学分析 | 第78页 |
| 4.3.3 菠菜不同处理中SoGSNOR基因表达检测 | 第78页 |
| 4.3.4 菠菜不同处理中SoGSNOR蛋白表达检测 | 第78-81页 |
| 4.3.5 SoGSNOR的原核表达载体构建与蛋白纯化 | 第81-82页 |
| 4.3.6 SoGSNOR的抗体制备 | 第82-83页 |
| 4.3.7 SoGSNOR基因过表达植物表达载体构建 | 第83-84页 |
| 4.3.8 SoGSNOR的转基因烟草鉴定 | 第84-85页 |
| 4.3.9 硝酸盐胁迫下菠菜叶片中S-亚硝基化蛋白分离纯化与鉴定 | 第85-86页 |
| 4.4 讨论 | 第86-88页 |
| 第五章 总结与展望 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-105页 |
| 附录 攻读硕士期间发表论文 | 第105页 |
