| 中文摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-23页 |
| 1 TLRs概述 | 第10-15页 |
| 1.1 TLRs与其配体复合物 | 第10-11页 |
| 1.2 TLR信号通路的负调节 | 第11-13页 |
| 1.2.1 调节因子-TLRs的可溶形式 | 第11-13页 |
| 1.3 TLR信号通路在免疫应答中的整合作用 | 第13-15页 |
| 2 TLR5介导的信号通路 | 第15-18页 |
| 3 TLR介导的信号通路对疾病研究的意义 | 第18页 |
| 参考文献 | 第18-23页 |
| 第二章 鸭TLR5分子的原核表达及其单克隆抗体的制备 | 第23-49页 |
| 1 生物材料与试剂 | 第23-24页 |
| 1.1 细菌、细胞和质粒 | 第23页 |
| 1.2 主要试剂 | 第23-24页 |
| 1.3 主要仪器 | 第24页 |
| 1.4 实验动物 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-34页 |
| 2.1 抗原的制备鉴定 | 第24-28页 |
| 2.1.1 引物设计 | 第24页 |
| 2.1.2 TLR5(ECD)基因的扩增和鉴定 | 第24页 |
| 2.1.3 重组克隆质粒pMD-20T-TLR5的构建与鉴定 | 第24-25页 |
| 2.1.4 重组原核质粒pCold Ⅰ-TLR5和pGEX-6p-1-TLR5的构建和鉴定 | 第25-26页 |
| 2.1.5 重组菌pCold-Ⅰ-TLR5/BL21(DE3)和pGEX-6p-1-TLR5/BL21(DE3)构建 | 第26-27页 |
| 2.1.6 rHis-TLR5和rGST-TLR5蛋白的纯化 | 第27页 |
| 2.1.7 重组真核表达质粒pcDNA3.1-TLR5的鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2 鸭TLR5单克隆抗体的制备与鉴定 | 第28-34页 |
| 2.2.1 动物免疫 | 第28页 |
| 2.2.2 细胞融合 | 第28-29页 |
| 2.2.2.1 饲养细胞的制备 | 第28页 |
| 2.2.2.2 小鼠骨髓瘤细胞系SP2/0的制备 | 第28页 |
| 2.2.2.3 小鼠脾脏细胞的制备 | 第28-29页 |
| 2.2.2.4 杂交瘤的细胞融合 | 第29页 |
| 2.2.3 杂交瘤细胞的筛选 | 第29-31页 |
| 2.2.3.1 间接ELISA检测方法的建立 | 第29-30页 |
| 2.2.3.2 阳性杂交瘤细胞系的建立 | 第30页 |
| 2.2.3.3 阳性杂交瘤细胞的亚克隆 | 第30页 |
| 2.2.3.4 阳性杂交瘤细胞的冻存 | 第30-31页 |
| 2.2.4 单克隆抗体的大量制备与纯化 | 第31页 |
| 2.2.5 腹水和细胞上清效价的测定 | 第31页 |
| 2.2.6 单克隆抗体亚类的测定 | 第31-32页 |
| 2.2.7 Western blotting鉴定 | 第32页 |
| 2.2.8 瞬时转染HEK293T细胞的间接免疫荧光 | 第32-33页 |
| 2.2.9 流式细胞术分析 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-46页 |
| 3.1 重组原核质粒pCold-Ⅰ-TLR5和pGEX-6p-1-TLR5的构建与鉴定 | 第34-36页 |
| 3.1.1 TLR5(ECD)基因序列的扩增 | 第34页 |
| 3.1.2 重组质粒pMD-20T-TLR5的构建与鉴定 | 第34-35页 |
| 3.1.3 重组原核质粒pCold-Ⅰ-TLR5和pGEX-6p-1-TLR5的构建与鉴定 | 第35-36页 |
| 3.2 重组菌pCold-Ⅰ-TLR/BL21(DE3)和pGEX-6p-1-TLR5/BL21(DE3)的构建与表达 | 第36-39页 |
| 3.2.1 重组菌pCold-Ⅰ-TLR5/BL21(DE3)和pGEX-6p-1-TLR5/BL21(DE3)的构建 | 第36-37页 |
| 3.2.2 重组菌Pcold Ⅰ-TLR5/BL21(DE3)和pGEX-6p-1-TLR5/BL21(DE3)的原核表达 | 第37-38页 |
| 3.2.3 rHis-TLR5蛋白和rGST-TLR5蛋白的鉴定 | 第38-39页 |
| 3.3 rHis-TLR5蛋白和rGST-TLR5蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| 3.4 重组真核质粒pcDNA3.1-TLR5的鉴定 | 第40-41页 |
| 3.5 间接ELISA检测方法的建立 | 第41页 |
| 3.6 阳性杂交瘤细胞系的建立 | 第41页 |
| 3.7 腹水的纯化 | 第41-42页 |
| 3.8 单克隆抗体效价及亚类的测定 | 第42-43页 |
| 3.9 Western blotting分析 | 第43-44页 |
| 3.10 间接免疫荧光 | 第44-45页 |
| 3.11 流式细胞术分析 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
