| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-25页 |
| ·大环糊精及其研究进展 | 第10-18页 |
| ·大环糊精概述 | 第10-11页 |
| ·大环糊精的命名 | 第11-12页 |
| ·大环糊精的结构性质 | 第12-15页 |
| ·大环糊精的检测鉴定 | 第15-16页 |
| ·包合物 | 第16-17页 |
| ·大环糊精的应用与展望 | 第17-18页 |
| ·大环糊精制备用酶的研究进展 | 第18-20页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第20-23页 |
| ·表达载体pET-GST | 第21页 |
| ·表达宿主菌E.coli BL21 | 第21-22页 |
| ·外源蛋白在大肠杆菌中表达的影响因素 | 第22-23页 |
| ·本研究的内容和意义 | 第23-25页 |
| 第二章 基因工程菌的构建 | 第25-41页 |
| ·材料与仪器 | 第27-29页 |
| ·菌株和质粒 | 第27页 |
| ·主要试剂、培养基和常见溶液配制 | 第27-28页 |
| ·实验仪器 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-34页 |
| ·引物设计 | 第29页 |
| ·菌株培养 | 第29-30页 |
| ·Streptomyces ssp. ST66基因组提取 | 第30页 |
| ·pET-GST质粒提取 | 第30页 |
| ·麦芽糖转糖基酶基因的PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·DNA的双酶切 | 第31页 |
| ·重组质粒的构建 | 第31-32页 |
| ·感受态细胞制备 | 第32页 |
| ·连接产物的转化 | 第32-33页 |
| ·阳性克隆子的筛选 | 第33页 |
| ·DNA测序 | 第33页 |
| ·表达用工程菌的构建和诱导表达 | 第33页 |
| ·麦芽糖转糖基酶活性分析 | 第33-34页 |
| ·结果与讨论 | 第34-40页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第34页 |
| ·PCR扩增麦芽糖转糖基酶基因 | 第34-35页 |
| ·质粒pET-GST提取 | 第35-36页 |
| ·重组阳性克隆子筛选 | 第36-37页 |
| ·Mal Q基因测序 | 第37-38页 |
| ·表达用基因工程菌的构建及初步诱导表达 | 第38-39页 |
| ·酶活力测定 | 第39-40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 第三章 麦芽糖转糖基酶的初步纯化与鉴定 | 第41-51页 |
| ·材料与仪器 | 第41-43页 |
| ·菌株 | 第41-42页 |
| ·主要生化试剂和仪器 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-45页 |
| ·粗酶液的制备 | 第43页 |
| ·Ni-NTA柱亲和色谱 | 第43-44页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第44页 |
| ·淀粉环化实验 | 第44-45页 |
| ·抗葡萄糖淀粉酶淀粉的测定 | 第45页 |
| ·薄层色谱分析 | 第45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-50页 |
| ·阳性重组质粒pET-GST-Mal Q诱导表达SDS-PAGE分析 | 第45-46页 |
| ·亲和色谱纯化目标蛋白 | 第46-47页 |
| ·环化反应液的抗葡萄糖淀粉酶处理分析 | 第47-48页 |
| ·薄层色谱检测 | 第48-50页 |
| ·本章小结 | 第50-51页 |
| 第四章 基因工程菌发酵产酶的研究 | 第51-63页 |
| ·材料与仪器 | 第52页 |
| ·菌株 | 第52页 |
| ·主要生化试剂和仪器 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-56页 |
| ·E.coli BL21/pET-GST-Mal Q生长曲线的测定 | 第52页 |
| ·葡萄糖标准曲线的测定 | 第52-53页 |
| ·酶活的测定 | 第53页 |
| ·E.coli BL21/pET-GST-Mal Q的诱导培养和酶液收集 | 第53-54页 |
| ·薄层色谱检测Amylomaltase的表达 | 第54页 |
| ·不同诱导时间的影响 | 第54页 |
| ·不同诱导温度的影响 | 第54-55页 |
| ·不同IPTG(诱导剂)浓度的影响 | 第55页 |
| ·不同诱导前OD_(600)的影响 | 第55页 |
| ·不同培养转速的影响 | 第55-56页 |
| ·优化诱导发酵条件下基因工程菌产酶 | 第56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-62页 |
| ·生长曲线的绘制 | 第56-57页 |
| ·诱导时间对E.coli BL21/pET-GST-Mal Q发酵产酶影响 | 第57-58页 |
| ·诱导温度对E.coli BL21/pET-GST-Mal Q发酵产酶影响 | 第58-59页 |
| ·IPTG浓度对E.coli BL21/pET-GST-Mal Q发酵产酶影响 | 第59-60页 |
| ·诱导前OD_(600)对E.coli BL21/pET-GST-Mal Q发酵产酶影响 | 第60-61页 |
| ·诱导转速对E.coli BL21/pET-GST-Mal Q发酵产酶影响 | 第61-62页 |
| ·优化诱导发酵条件下基因工程菌产酶分析 | 第62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 第五章 结论与展望 | 第63-65页 |
| ·结论 | 第63-64页 |
| ·展望 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 附录 表达载体pET-GST | 第71-72页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第72页 |
