| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第17-25页 |
| 1.1 α-熊果苷简介 | 第17-19页 |
| 1.1.1 熊果苷概况 | 第17页 |
| 1.1.2 熊果苷美白作用机理 | 第17-18页 |
| 1.1.3 熊果苷制备方法 | 第18-19页 |
| 1.2 微生物表面展示系统 | 第19-23页 |
| 1.2.1 微生物表面展示系统进展 | 第19-21页 |
| 1.2.2 革兰氏阴性细菌表面展示系统 | 第21页 |
| 1.2.3 革兰氏阴性细菌表面展示系统构成 | 第21-23页 |
| 1.2.4 细菌表面展示特点 | 第23页 |
| 1.3 本课题创新点 | 第23-25页 |
| 第二章 α葡糖基转移酶表面展示系统的构建 | 第25-49页 |
| 2.1 材料与方法 | 第25-29页 |
| 2.1.1 试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第26-27页 |
| 2.1.3 培养基 | 第27-28页 |
| 2.1.4 主要试剂配方 | 第28-29页 |
| 2.2 实验流程 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-39页 |
| 2.3.1 嗜麦芽黄单胞菌Xanthomonas Maltophilia基因组的提取 | 第30-31页 |
| 2.3.2 XgtA基因的扩增 | 第31-32页 |
| 2.3.3 连接pMD18-T载体 | 第32-33页 |
| 2.3.4 热击法转化 | 第33页 |
| 2.3.5 蓝白斑筛选 | 第33页 |
| 2.3.6 菌落PCR | 第33-34页 |
| 2.3.7 PMD18-T质粒提取 | 第34页 |
| 2.3.8 Inak基因的扩增 | 第34-35页 |
| 2.3.9 pET28a质粒的提取 | 第35页 |
| 2.3.10 双酶切Inak基因和pET28a质粒 | 第35-36页 |
| 2.3.11 酶切产物回收 | 第36页 |
| 2.3.12 Inak和pET28a连接 | 第36-37页 |
| 2.3.13 双酶切XgtA和pET28a-Inak | 第37页 |
| 2.3.14 目的基因XgtA和载体pET28a-Inak连接 | 第37页 |
| 2.3.15 Inak-X西A基因的扩增 | 第37-38页 |
| 2.3.16 双酶切pET28a和Inak-XgtA | 第38页 |
| 2.3.17 目的基因Inak-XgtA和载体pET28a连接 | 第38-39页 |
| 2.3.18 目的基因XgtA和载体pET28a连接 | 第39页 |
| 2.3.19 重组质粒的转化 | 第39页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第39-48页 |
| 2.4.1 嗜麦芽黄单胞菌Xanthomonas Maltophilia基因组的提取 | 第39-40页 |
| 2.4.2 重组载体pET28a-Inak-XgtA-His的构建 | 第40-48页 |
| 2.4.3 重组载体pET28a-XgtA的构建 | 第48页 |
| 2.5 本章小结 | 第48-49页 |
| 第三章 α葡糖基转移酶XgtA在大肠杆菌表面的表达 | 第49-65页 |
| 3.1 材料与方法 | 第49-51页 |
| 3.1.1 试剂 | 第49-50页 |
| 3.1.2 仪器设备 | 第50-51页 |
| 3.2 实验方法 | 第51-56页 |
| 3.2.1 α葡糖基转移酶XgtA的诱导表达 | 第51-52页 |
| 3.2.2 流式细胞分析 | 第52-53页 |
| 3.2.3 荧光共聚焦分析 | 第53页 |
| 3.2.4 α葡糖基转移酶XgtA诱导条件的优化 | 第53-56页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第56-64页 |
| 3.3.1 α葡糖基转移酶XgtA的诱导表达 | 第56-57页 |
| 3.3.2 流式细胞分析 | 第57-58页 |
| 3.3.3 荧光显微镜分析 | 第58-59页 |
| 3.3.4 α葡糖基转移酶XgtA诱导条件的确定 | 第59-64页 |
| 3.4 本章小结 | 第64-65页 |
| 第四章 重组菌的筛选 | 第65-75页 |
| 4.1 材料与方法 | 第65-66页 |
| 4.1.1 试剂 | 第65页 |
| 4.1.2 仪器设备 | 第65-66页 |
| 4.2 实验方法 | 第66-68页 |
| 4.2.1 梯度平板法初筛 | 第66-67页 |
| 4.2.2 点种法复筛 | 第67-68页 |
| 4.2.3 重组菌初步催化反应 | 第68页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第68-73页 |
| 4.3.1 重组菌株筛选 | 第68-72页 |
| 4.3.2 重组菌初步催化反应 | 第72-73页 |
| 4.4 本章小结 | 第73-75页 |
| 第五章 全细胞催化反应及耐受性提高 | 第75-97页 |
| 5.1 材料与方法 | 第75-76页 |
| 5.1.1 试剂 | 第75-76页 |
| 5.1.2 仪器设备 | 第76页 |
| 5.2 实验方法 | 第76-83页 |
| 5.2.1 α-熊果苷的生物合成反应式 | 第77页 |
| 5.2.2 催化反应结束时间的确定 | 第77页 |
| 5.2.3 反应底物的比较 | 第77-79页 |
| 5.2.4 反应温度的确定 | 第79页 |
| 5.2.5 反应pH值的确定 | 第79页 |
| 5.2.6 反应底物摩尔比的确定 | 第79-80页 |
| 5.2.7 反应初始底物浓度的确定 | 第80页 |
| 5.2.8 添加黄原胶对菌体耐受性的影响 | 第80-81页 |
| 5.2.9 添加抗坏血酸对菌体耐受性的影响 | 第81页 |
| 5.2.10 浓缩菌体对转化率的影响 | 第81-82页 |
| 5.2.11 大孔树脂固定化底物对菌体耐受性的影响 | 第82-83页 |
| 5.3 实验结果与讨论 | 第83-94页 |
| 5.3.1 催化反应结束时间的确定 | 第83-84页 |
| 5.3.2 反应底物的比较 | 第84-85页 |
| 5.3.3 反应温度的确定 | 第85页 |
| 5.3.4 反应pH值的确定 | 第85-86页 |
| 5.3.5 反应底物摩尔比的确定 | 第86-87页 |
| 5.3.6 反应初始底物浓度的确定 | 第87-89页 |
| 5.3.7 添加黄原胶对菌体耐受性的影响 | 第89-90页 |
| 5.3.8 添加抗坏血酸对菌体耐受性的影响 | 第90-92页 |
| 5.3.9 浓缩菌体对转化率的影响 | 第92-93页 |
| 5.3.10 大孔树脂固定化底物对菌体耐受性的影响 | 第93-94页 |
| 5.4 本章小结 | 第94-97页 |
| 第六章 结论与展望 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-105页 |
| 致谢 | 第105-107页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第107-109页 |
| 作者及导师简介 | 第109-110页 |
| 附件 | 第110-111页 |
