| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-26页 |
| 1.1 毕赤酵母表达系统 | 第12-13页 |
| 1.2 毕赤酵母高密度发酵 | 第13-20页 |
| 1.2.1 毕赤酵母高密度发酵的一般过程 | 第13-15页 |
| 1.2.2 毕赤酵母高密度发酵的影响因素 | 第15-20页 |
| 1.2.2.1 培养基 | 第15-16页 |
| 1.2.2.2 诱导期培养温度 | 第16页 |
| 1.2.2.3 诱导期培养 pH | 第16-17页 |
| 1.2.2.4 溶氧 | 第17页 |
| 1.2.2.5 补料 | 第17-19页 |
| 1.2.2.6 降低蛋白酶水解作用 | 第19-20页 |
| 1.3 脂肪酶研究进展 | 第20-23页 |
| 1.3.1 脂肪酶简介 | 第20-21页 |
| 1.3.2 脂肪酶应用 | 第21-22页 |
| 1.3.3 脂肪酶生产 | 第22-23页 |
| 1.4 ARL 研究进展 | 第23-24页 |
| 1.5 研究意义及研究内容 | 第24-26页 |
| 1.5.1 研究意义 | 第24-25页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第25-26页 |
| 第二章 诱导期间 pH 及温度对重组毕赤酵母发酵产 ARL 的影响 | 第26-47页 |
| 2.1 引言 | 第26-27页 |
| 2.2 实验材料与培养方法 | 第27-36页 |
| 2.2.1 实验菌株 | 第27页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.3 主要仪器与设备 | 第28页 |
| 2.2.4 培养基及溶液 | 第28-30页 |
| 2.2.4.1 培养基 | 第28-29页 |
| 2.2.4.2 溶液 | 第29-30页 |
| 2.2.5 培养方法 | 第30-31页 |
| 2.2.5.1 菌种保藏 | 第30页 |
| 2.2.5.2 YPD 平板活化菌种 | 第30页 |
| 2.2.5.3 摇瓶培养方法 | 第30页 |
| 2.2.5.4 发酵罐培养方法 | 第30-31页 |
| 2.2.6 检测方法 | 第31-36页 |
| 2.2.6.1 生物量检测 | 第32页 |
| 2.2.6.2 pNP 标准曲线的绘制 | 第32页 |
| 2.2.6.3 ARL 酶活检测 | 第32-33页 |
| 2.2.6.4 细胞破碎方法 | 第33页 |
| 2.2.6.5 AOX 活力测定 | 第33-34页 |
| 2.2.6.6 AOX 标准曲线的制备 | 第34页 |
| 2.2.6.7 ATP 浓度测定 | 第34页 |
| 2.2.6.8 ATP 标准曲线的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.6.9 细胞存活率测定 | 第35页 |
| 2.2.6.10 蛋白酶活力测定 | 第35-36页 |
| 2.2.6.11 胰蛋白酶标准曲线的制备 | 第36页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第36-46页 |
| 2.3.1 pNP 标准曲线绘制 | 第36-37页 |
| 2.3.2 AOX 标准曲线绘制 | 第37页 |
| 2.3.3 ATP 标准曲线绘制 | 第37-38页 |
| 2.3.4 蛋白酶标准曲线绘制 | 第38-39页 |
| 2.3.5 甲醇诱导期间 pH 对重组毕赤酵母发酵产 ARL 的影响 | 第39-41页 |
| 2.3.5.1 摇瓶发酵 | 第39-40页 |
| 2.3.5.2 10L 罐高高密度发酵 | 第40-41页 |
| 2.3.6 诱导期温度对重组毕赤酵母高密度发酵产 ARL 的影响 | 第41-46页 |
| 2.3.6.1 诱导期温度对重组毕赤酵母生长的影响 | 第41-42页 |
| 2.3.6.2 诱导期间温度对重组毕赤酵母发酵产酶的影响 | 第42-43页 |
| 2.3.6.3 诱导期温度对重组毕赤酵母胞内 AOX 比活力的影响 | 第43-44页 |
| 2.3.6.4 诱导期温度对重组毕赤酵母胞内 ATP 比浓度的影响 | 第44页 |
| 2.3.6.5 诱导期温度对重组毕赤酵母细胞存活率的影响 | 第44-45页 |
| 2.3.6.6 诱导期温度对重组毕赤酵母胞外蛋白酶活力的影响 | 第45-46页 |
| 2.4 本章小结 | 第46-47页 |
| 第三章 甲醇诱导策略对重组毕赤酵母发酵产 ARL 的影响 | 第47-60页 |
| 3.1 引言 | 第47页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第47-50页 |
| 3.2.1 实验菌株 | 第47页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第47-48页 |
| 3.2.3 主要仪器和设备 | 第48页 |
| 3.2.4 溶液与培养基 | 第48页 |
| 3.2.4.1 培养基的配置 | 第48页 |
| 3.2.4.2 溶液的配制 | 第48页 |
| 3.2.5 培养方法 | 第48-50页 |
| 3.2.5.1 菌种保藏 | 第48页 |
| 3.2.5.2 YPD 平板活化菌种 | 第48-49页 |
| 3.2.5.3 摇瓶培养方法 | 第49页 |
| 3.2.5.4 发酵罐高密度发酵培养方法 | 第49-50页 |
| 3.2.6 检测与分析方法 | 第50页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第50-59页 |
| 3.3.1 恒定甲醇补料速率实验 | 第50-52页 |
| 3.3.1.1 不同甲醇补料速率对重组毕赤酵母发酵生长的影响 | 第50-51页 |
| 3.3.1.2 不同甲醇补料速率对重组毕赤酵母发酵产 ARL 的影响 | 第51-52页 |
| 3.3.2 甘油甲醇混合补料实验 | 第52-59页 |
| 3.3.2.1 摇瓶水平甘油甲醇混合补料实验 | 第52-53页 |
| 3.3.2.2 甘油甲醇混合碳源补料 10L 罐实验 | 第53-59页 |
| 3.4 本章小结 | 第59-60页 |
| 结论与展望 | 第60-62页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 本论文的创新之处 | 第61页 |
| 展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 附件 | 第71页 |
