| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 主要缩略词表 | 第10-15页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-22页 |
| 1 阿魏酸酯酶的发现及来源 | 第16页 |
| 2 阿魏酸酯酶的分类与性质 | 第16页 |
| 3 阿魏酸酯酶的结构和催化机制 | 第16-17页 |
| 4 阿魏酸酯酶的异源表达 | 第17-18页 |
| 5 阿魏酸酯酶的高效表达策略 | 第18-19页 |
| 6 阿魏酸酯酶的应用 | 第19-20页 |
| 6.1 释放阿魏酸 | 第19页 |
| 6.2 制浆造纸 | 第19页 |
| 6.3 饲料工业 | 第19-20页 |
| 7 存在的问题、本研究的目的、内容和意义 | 第20-22页 |
| 7.1 存在的问题 | 第20页 |
| 7.2 本研究的目的 | 第20页 |
| 7.3 本研究的内容 | 第20-21页 |
| 7.4 本研究的意义 | 第21页 |
| 7.5 本研究的技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 试验研究 | 第22-54页 |
| 试验一 阿魏酸酯酶A双拷贝基因工程菌的构建及其酶学性质的研究 | 第22-46页 |
| 1 前言 | 第22-23页 |
| 2 试验材料 | 第23-26页 |
| 2.1 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2.2 工具酶和试剂 | 第23页 |
| 2.3 主要试剂的配制 | 第23-24页 |
| 2.4 培养基 | 第24-25页 |
| 2.5 主要仪器 | 第25-26页 |
| 3 试验方法 | 第26-34页 |
| 3.1 黑曲霉菌株的培养 | 第26页 |
| 3.2 黑曲霉总RNA的提取 | 第26页 |
| 3.3 黑曲霉阿魏酸酯酶A全长基因序列的克隆及其鉴定 | 第26-28页 |
| 3.4 不含信号肽的阿魏酸酯酶A基因的获得与鉴定 | 第28页 |
| 3.5 重组表达质粒pPIC9K-AnFaeA和pPICZαA-AnFaeA的构建 | 第28-30页 |
| 3.6 阿魏酸酯酶A单拷贝基因工程菌的构建与筛选 | 第30-31页 |
| 3.7 阿魏酸酯酶A双拷贝基因工程菌的构建与筛选 | 第31-32页 |
| 3.8 阿魏酸酯酶A双拷贝基因工程菌的PCR鉴定 | 第32-33页 |
| 3.9 重组蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第33页 |
| 3.10 Western-blot分析 | 第33页 |
| 3.11 阿魏酸酯酶A的糖基化分析 | 第33页 |
| 3.12 优化阿魏酸酯酶A双拷贝基因工程菌的培养条件 | 第33-34页 |
| 3.13 阿魏酸酯酶A双拷贝基因工程菌的遗传稳定性分析 | 第34页 |
| 3.14 酶学性质分析 | 第34页 |
| 4 结果与分析 | 第34-43页 |
| 4.1 黑曲霉阿魏酸酯酶A全长基因的克隆及其鉴定 | 第35-36页 |
| 4.2 不含信号肽的阿魏酸酯酶A基因序列的PCR扩增 | 第36页 |
| 4.3 重组表达质粒pPIC9K-AnFaeA和pPICZαA-AnFaeA的构建 | 第36-38页 |
| 4.4 阿魏酸酯酶A单拷贝基因工程菌的构建与筛选 | 第38页 |
| 4.5 阿魏酸酯酶A双拷贝基因工程菌的构建与筛选 | 第38页 |
| 4.6 阿魏酸酯酶A双拷贝基因工程菌的PCR鉴定 | 第38-39页 |
| 4.7 重组蛋白的SDS-PAGE电泳鉴定 | 第39页 |
| 4.8 Western-blot分析 | 第39页 |
| 4.9 阿魏酸酯酶A的糖基化分析 | 第39-40页 |
| 4.10 优化阿魏酸酯酶A双拷贝基因工程菌的培养条件 | 第40-41页 |
| 4.11 阿魏酸酯酶A双拷贝基因工程菌的遗传稳定性 | 第41-42页 |
| 4.12 酶学性质的研究 | 第42-43页 |
| 5 讨论 | 第43-45页 |
| 6 小结 | 第45-46页 |
| 试验二 阿魏酸酯酶A对小鼠免疫原性的研究 | 第46-54页 |
| 1 前言 | 第46页 |
| 2 试验材料 | 第46-47页 |
| 2.1 试验动物与试剂 | 第47页 |
| 2.2 试验日粮 | 第47页 |
| 3 试验方法 | 第47-48页 |
| 3.1 试验设计 | 第47页 |
| 3.2 动物饲养管理 | 第47页 |
| 3.3 记录小鼠的采食量和体重变化 | 第47-48页 |
| 3.4 样品的采集及处理 | 第48页 |
| 3.5 阿魏酸酯酶A反应原性的检测 | 第48页 |
| 3.6 血清样品中IFN-γ、IL-4和IgG含量的检测 | 第48页 |
| 3.7 数据处理 | 第48页 |
| 4 结果和分析 | 第48-52页 |
| 4.1 小鼠的采食量和体重变化 | 第48-49页 |
| 4.2 阿魏酸酯酶A反应原性的鉴定 | 第49页 |
| 4.3 血清样品中IFN-γ含量的测定 | 第49-50页 |
| 4.4 血清样品中IL-4含量的测定 | 第50-51页 |
| 4.5 血清样品中IgG含量的测定 | 第51-52页 |
| 5 讨论 | 第52-53页 |
| 6 小结 | 第53-54页 |
| 第三章 全文总结 | 第54-55页 |
| 1 本研究结论 | 第54页 |
| 2 本研究创新点 | 第54页 |
| 3 进一步待研究的问题 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 个人简历 | 第65页 |
