摘要 | 第3-5页 |
ABSTRACT | 第5-6页 |
中英文符号对照表 | 第9-10页 |
一 前言 | 第10-14页 |
二 材料和方法 | 第14-27页 |
(一) 实验材料 | 第14-17页 |
1 质粒、细菌和菌株 | 第14页 |
2 抗体 | 第14页 |
3 生化试剂及试剂盒 | 第14-15页 |
4 主要实验仪器 | 第15-16页 |
5 主要试剂的配制方法 | 第16-17页 |
(二) 实验方法 | 第17-27页 |
1 表达载体的构建 | 第17-19页 |
2 稳转细胞的筛选和鉴定 | 第19-20页 |
3 激光共聚焦显微镜检测 OX1R 和 KOR 的共定位表达 | 第20页 |
4 BRET 技术检测 OX1R 和 KOR 之间的关系 | 第20-21页 |
5 双荧光素酶法检测细胞内报告基因 SRE、CRE 和 NFAT 的含量 | 第21-22页 |
6 细胞内钙离子含量的检测 | 第22-23页 |
7 ELISA 法检测细胞内 cAMP 的含量 | 第23-24页 |
8 Western Blot 检测 OX1R/KOR 异源二聚体对 CREB 磷酸化的影响 | 第24-27页 |
三 实验结果 | 第27-38页 |
(一) EGFP-OX1R 重组融合载体的构建和表达 | 第27页 |
(二) 稳转细胞的鉴定 | 第27-28页 |
(三) 激光共聚焦显微镜检测 OX1R 和 KOR 的共定位表达 | 第28-29页 |
(四) BRET 检测 OX1R 和 KOR 之间的异源二聚化 | 第29-31页 |
(五) 双荧光素酶法检测细胞内报告基因 CRE、SRE 和 NFAT 的含量 | 第31-33页 |
(六) 细胞内钙离子含量的测定 | 第33-34页 |
(七) 细胞内 cAMP 含量的检测 | 第34-35页 |
(八) Western blot 检测 OX1R/KOR 异源二聚体使 CREB 活性增强 | 第35-38页 |
四 讨论 | 第38-40页 |
五 结论 | 第40-41页 |
参考文献 | 第41-45页 |
综述 | 第45-50页 |
参考文献 | 第47-50页 |
已发表文章 | 第50-51页 |
致谢 | 第51页 |