| 中文摘要 | 第1-16页 |
| Abstract | 第16-21页 |
| 第一章 文献综述 | 第21-57页 |
| 1 日本乙型脑炎病毒 | 第21-57页 |
| ·乙型脑炎 | 第21-22页 |
| ·乙脑的流行 | 第22-24页 |
| ·乙脑的传播 | 第24-26页 |
| ·分子生物学 | 第26-34页 |
| ·JEV的形态及基因结构 | 第26-29页 |
| ·病毒蛋白 | 第29-34页 |
| ·乙脑的疫苗研究进展 | 第34-57页 |
| ·鼠脑灭活苗 | 第35-37页 |
| ·地鼠肾细胞灭活疫苗 | 第37-38页 |
| ·Vero细胞灭活苗 | 第38-39页 |
| ·减毒活疫苗 | 第39-42页 |
| ·兽用疫苗 | 第42-43页 |
| ·发展中疫苗 | 第43-57页 |
| 第二章 四川省部分猪场伪狂犬和乙型脑炎和的血清流行病学调查 | 第57-87页 |
| 1 材料与方法 | 第58-62页 |
| ·实验材料 | 第58页 |
| ·样品采集 | 第58页 |
| ·检测试剂 | 第58页 |
| ·主要仪器 | 第58页 |
| ·检测方法 | 第58-62页 |
| ·PRV gE(gpI)抗体ELISA | 第58-59页 |
| ·PRV gB抗体ELISA | 第59-60页 |
| ·JEV抗体ELISE检测方法 | 第60-61页 |
| ·JEV病原的RT-PCR检测方法 | 第61-62页 |
| 2 结果 | 第62-78页 |
| ·PRV的检测 | 第62-71页 |
| ·四川省不同地区各猪场猪只PRV gE抗体的检测结果 | 第62-66页 |
| ·不同类别猪群RPVgE抗体阳性情况 | 第66-67页 |
| ·不同养殖规模猪场PVRgE抗体阳’’1l情况 | 第67-68页 |
| ·不同养殖规模猪场中不同类别猪群砂V野毒感染的情况 | 第68-69页 |
| ·四川省不同地区各猪场猪只猪伪狂犬gB抗体的检测结果 | 第69-70页 |
| ·四川省不同类别猪群PVRgB抗体的检测结果 | 第70-71页 |
| ·JEV的检测 | 第71-78页 |
| ·四川省不同地区各猪场JEV抗体ELISA检测情况 | 第71-73页 |
| ·不同类别猪群的JEV抗体情况 | 第73-75页 |
| ·四川省各猪场不同月份送检样品的JEV抗体情况 | 第75页 |
| ·四川省各猪场送检样品不同月份不同类别猪群JEV抗体阳性情况 | 第75-77页 |
| ·四川省各猪场送检样品不同季度不同类别猪群的JEV抗体阳性情况 | 第77-78页 |
| ·JEV病原的特异性RT-PCR检测结果 | 第78页 |
| 3 讨论 | 第78-86页 |
| ·关于四川省猪场伪狂犬血清学检测 | 第78-82页 |
| ·关于四川省猪场乙脑抗体和抗原的检测 | 第82-86页 |
| 4 小结 | 第86-87页 |
| 第三章 乙脑E基因多抗原表位基因的设计和原核表达 | 第87-104页 |
| 1 材料与方法 | 第88-94页 |
| ·材料 | 第88页 |
| ·质粒、菌株和细胞 | 第88页 |
| ·酶和其它试剂 | 第88页 |
| ·仪器设备 | 第88页 |
| ·实验方法 | 第88-94页 |
| ·JEVE基因多抗原表位的设计和选择 | 第88页 |
| ·JEVE基因多抗原表位串联基因的设计及合成 | 第88-89页 |
| ·JEVE基因多抗原表位串联基因原核表达载体的构建 | 第89-91页 |
| ·多表位重组表达质粒的诱导表达 | 第91-94页 |
| 2 结果 | 第94-99页 |
| ·JEVE蛋白抗原表位的预测与选择 | 第94-96页 |
| ·JEVE蛋白多表位串联基因的设计与合成 | 第96-97页 |
| ·JEVE基因多表位串联基因的抗原参数分析 | 第97-98页 |
| ·重组原核表达载体pE-Te的酶切鉴定 | 第98页 |
| ·JEV多表位重组质粒表达产物的SDS-APGE和Westernblot鉴定 | 第98-99页 |
| 3 讨论 | 第99-103页 |
| 4 小结 | 第103-104页 |
| 第四章 猪细小病毒VP2蛋白N端甘氨酸富集区的缺失对病毒样颗粒形成及免疫原性的影响 | 第104-118页 |
| 1. 材料与方法 | 第104-108页 |
| ·毒株、菌株、质粒和细胞 | 第104-105页 |
| ·主要试剂 | 第105页 |
| ·仪器设备和实验动物 | 第105页 |
| ·VP2缺失基因和完整基因的PCR扩增、克隆及序列测定 | 第105-106页 |
| ·引物设计与合成 | 第105页 |
| ·VP2缺失基因和完整基因的PCR扩增、克隆及序列测定 | 第105-106页 |
| ·重组真核表达载体pCI-△VP2和pCI-VP2的构建 | 第106页 |
| ·重组质粒pCI-△VP2和pCI-VP2的表达 | 第106-107页 |
| ·重组质粒pCI-△VP2和pCI-VP2的转染Vero细胞 | 第106页 |
| ·重组质粒的表达产物Western-blotting检测和间接免疫荧光检测 | 第106页 |
| ·表达产物的电镜观察 | 第106页 |
| ·VLPs的粗纯及免疫电镜观察 | 第106-107页 |
| ·红细胞凝集试验 | 第107页 |
| ·AVP2真核表达的免疫原性的研究 | 第107-108页 |
| ·实验动物分组与免疫 | 第107页 |
| ·PPV抗体监测 | 第107页 |
| ·T淋巴细胞转化实验 | 第107页 |
| ·T淋巴细胞亚群的动态监测 | 第107-108页 |
| 2 结果 | 第108-113页 |
| ·PPV△VP2和VP2 PCR扩增及分析 | 第108-109页 |
| ·含PPV△VP2和VP2真核表达载体的构建 | 第109页 |
| ·重组质粒的表达产物SDS-PAGE和Western-blotting检测 | 第109-110页 |
| ·重组质粒表达的间接免疫荧光检测 | 第110页 |
| ·表达产物的电镜观察 | 第110-111页 |
| ·表达产物的免疫电镜观察 | 第111页 |
| ·红细胞凝聚试验 | 第111页 |
| ·小鼠的体液免疫应答 | 第111-112页 |
| ·免疫小鼠脾细胞增殖试验 | 第112页 |
| ·T淋巴细胞亚群动态结果 | 第112-113页 |
| 3 讨论 | 第113-116页 |
| 4 小结 | 第116-118页 |
| 第五章 密码子优化的JEV多抗原表位与PPV VP2嵌合真核表达载体的构建. | 第118-136页 |
| 1 材料和方法 | 第118-126页 |
| ·毒株、质粒和细胞 | 第118页 |
| ·主要试剂 | 第118-119页 |
| ·仪器设备 | 第119页 |
| ·JEV多抗原表位串联基因的密码子优化设计和合成 | 第119页 |
| ·PPV VP2基因的扩增 | 第119-120页 |
| ·重组真核表达载体pCI-e的构建 | 第120-121页 |
| ·密码子优化的e基因和pCI-neo的酶切回收 | 第121页 |
| ·密码子优化的e基因与pCI-neo的连接 | 第121页 |
| ·pCI-e的酶切鉴定 | 第121页 |
| ·重组真核表达载体pCI-Ve的构建 | 第121-124页 |
| ·PPV VP2的扩增和TA克隆质粒构建 | 第121-122页 |
| ·密码子优化的e基因的酶切回收 | 第122页 |
| ·T-VP2066的酶切回收 | 第122-123页 |
| ·密码子优化的JEV多抗原表位e与PPV VP2嵌合基因的连接 | 第123页 |
| ·T-Ve的酶切鉴定 | 第123页 |
| ·真核表达载体pCI-Ve的构建 | 第123-124页 |
| ·真核表达载体pCI-Ve的酶切鉴定 | 第124页 |
| ·重组真核表达载体pCI-e和pCI-Ve的表达 | 第124-126页 |
| ·重组真核表达载体pCI-e和pCI-Ve的转染 | 第124-125页 |
| ·重组质粒表达产物的Western-boltting检测 | 第125页 |
| ·重组质粒pCI-e和pCI-Ve真核表达的间接免疫荧光检测 | 第125-126页 |
| ·真核表达载体pCI-Ve表达产物的电镜观察 | 第126页 |
| 2 结果 | 第126-132页 |
| ·JEV多抗原表位串联基因e的密码子优化和合成 | 第126-128页 |
| ·重组真核表达载体pCI-e的酶切鉴定 | 第128页 |
| ·PPV VP2的扩增和TA克隆质粒的鉴定 | 第128页 |
| ·T-Ve的酶切鉴定 | 第128-129页 |
| ·真核表达载体pCI-Ve的酶切鉴定 | 第129-130页 |
| ·重组质粒pCI-e和pCI-Ve真核表达产物的SDS-PAGE和Western-blotting检测 | 第130页 |
| ·重组质粒pCI-e和pCI-Ve真核表达的间接免疫荧光检测 | 第130-131页 |
| ·真核表达载体pCI-Ve表达产物的电镜观察 | 第131-132页 |
| 3 讨论 | 第132-135页 |
| ·JEV多抗原表位DNA疫苗的构建 | 第132页 |
| ·JEV多抗原表位串联基因的密码子优化 | 第132-133页 |
| ·JEV多抗原表位真核表达载体的选择 | 第133-134页 |
| ·用PPV VP2展示JEV多抗原表位的策略 | 第134-135页 |
| 4 小结 | 第135-136页 |
| 第六章 密码子优化的JEV多抗原表位e与PPV VP2嵌合真核表达载体的免疫原性 | 第136-159页 |
| 1.材料和方法 | 第137-142页 |
| ·毒株、质粒和细胞 | 第137页 |
| ·主要试剂 | 第137页 |
| ·实验动物 | 第137页 |
| ·表达质粒的大量制备 | 第137页 |
| ·实验动物分组与免疫 | 第137-138页 |
| ·JEV和PPV的抗体监测 | 第138页 |
| ·T淋巴细胞转化实验 | 第138页 |
| ·T淋巴细胞数量的检测 | 第138-139页 |
| ·细胞因子的定量检测 | 第139-140页 |
| ·JEV中和试验 | 第140-141页 |
| ·JEV CQRC-1株TCID_(50)值的测定 | 第140页 |
| ·免疫组JEV中和抗体滴度测定 | 第140-141页 |
| ·PPV血凝抑制试验 | 第141页 |
| ·免疫小鼠的JEV攻毒试验 | 第141-142页 |
| 2 结果 | 第142-150页 |
| ·小鼠的JEV抗体监测 | 第142-143页 |
| ·小鼠的PPV抗体监测 | 第143-144页 |
| ·免疫小鼠的脾细胞增殖实验检测结果 | 第144-145页 |
| ·T淋巴细胞数量的检测 | 第145页 |
| ·免疫小鼠细胞因子的定量检测 | 第145-148页 |
| ·JEV CQRC-1株TCID_(50)值的测定 | 第148页 |
| ·中和抗体滴度测定 | 第148-149页 |
| ·PPV血凝抑制试验 | 第149-150页 |
| ·免疫小鼠的JEV攻毒试验 | 第150页 |
| 3 讨论 | 第150-158页 |
| ·PPV VP2和乙脑多抗原表位的研究 | 第150-151页 |
| ·JEV和PPV新型二价DNA疫苗的免疫 | 第151-152页 |
| ·JEV和PPV新型二价DNA疫苗的免疫途径 | 第152页 |
| ·重组质粒的体液免疫应答 | 第152-154页 |
| ·重组质粒的细胞免疫 | 第154-156页 |
| ·中和抗体和攻毒保护 | 第156页 |
| ·提高重组质粒免疫效果的策略 | 第156-158页 |
| 4 小结 | 第158-159页 |
| 第七章 猪乙型脑炎病毒-细小病毒-伪狂犬病毒活载体疫苗的研究 | 第159-190页 |
| 1. 材料和方法 | 第159-160页 |
| ·毒株、质粒和细胞 | 第159-160页 |
| ·主要试剂 | 第160页 |
| ·仪器设备和实验动物 | 第160页 |
| 2 实验方法 | 第160-167页 |
| ·PRV转移载体pPI-Ve的构建 | 第160-161页 |
| ·PRV转移载体pPI-Ve的构建 | 第160-161页 |
| ·PRV移载体pPI-Ve的酶切鉴定和PCR鉴定 | 第161页 |
| ·PRV移载体pPI-Ve的转染和绿色荧光表达观察 | 第161页 |
| ·PRV重组嵌合基因Ve活载体疫苗株的获得 | 第161-164页 |
| ·PRV转移载体pPI-Ve质粒的制备 | 第161页 |
| ·PRV SA215病毒基因组的提取 | 第161-162页 |
| ·脂质体介导的共转染 | 第162-163页 |
| ·重组病毒的空斑筛选 | 第163-164页 |
| ·重组病毒的PCR鉴定 | 第164页 |
| ·重组病毒的Western-boltting检测 | 第164页 |
| ·重组PRV病毒株SA215(G)的部分生物学特性研究 | 第164-165页 |
| ·在Vero细胞上的致病效应观察 | 第164页 |
| ·重组病毒的电镜观察 | 第164页 |
| ·重组病毒的TCID_(50)测定 | 第164-165页 |
| ·重组PRV病毒株SA215(G)对仔猪的免疫原性试验 | 第165-167页 |
| ·重组PRV病毒株SA215(G)对仔猪的安全性试验 | 第165页 |
| ·仔猪的分组和免疫 | 第165页 |
| ·免疫猪的JEV、PPV和PRV的抗体监测 | 第165页 |
| ·免疫组JEV中和抗体滴度测定 | 第165页 |
| ·免疫组PRV中和抗体滴度测定 | 第165-166页 |
| ·血凝抑制试验(HI)检测抗猪细小病毒抗体 | 第166页 |
| ·细胞因子的定量检测 | 第166-167页 |
| 3 结果 | 第167-181页 |
| ·PRV转移载体pPI-Ve的构建(图7-1) | 第167-170页 |
| ·PRV转移载体pPI-Ve的酶切鉴定和PCR鉴定 | 第167-168页 |
| ·PRV转移载体pPI-Ve的酶切鉴定和PCR鉴定 | 第168-169页 |
| ·PRV转移载体pPI-Ve在Vero细胞中表达观察 | 第169-170页 |
| ·重组PRV SA215(G)的构建与筛选 | 第170-171页 |
| ·重组PRV SA215(G)的筛选和PCR鉴定 | 第170页 |
| ·重组病毒PRV SA215(G)的Western-blotting检侧 | 第170-171页 |
| ·重组PRV病毒株SA215(G)的部分生物学特性研究结果 | 第171-174页 |
| ·在Vero细胞上的致病效应观察 | 第171-172页 |
| ·重组病毒的电镜观察 | 第172-173页 |
| ·重组病毒的TCID_(50)测定 | 第173-174页 |
| ·重组PRV病毒株SA215(G)对仔猪的免疫原性试验结果 | 第174-181页 |
| ·重组PRV病毒株SA215(G)对仔猪的安全性试验 | 第174页 |
| ·免疫猪的PPV抗体监测 | 第174-175页 |
| ·免疫猪的JEV抗体监测 | 第175-176页 |
| ·免疫猪的PRV抗体监测 | 第176-177页 |
| ·免疫组JEV中和抗体效价测定 | 第177-178页 |
| ·免疫组PRV中和抗体滴度测定 | 第178页 |
| ·血凝抑制试验(HI)检测抗猪细小病毒抗体 | 第178-179页 |
| ·细胞因子的定量检测 | 第179-181页 |
| 4 讨论 | 第181-189页 |
| ·JEV、PPV和PRV三联疫苗的意义 | 第181-182页 |
| ·PRV载体的选择 | 第182-183页 |
| ·转移载体的构建 | 第183-184页 |
| ·提高同源重组效率的方法 | 第184-185页 |
| ·重组病毒PRV SA215(G)的筛选 | 第185-186页 |
| ·重组病毒PRV SA215(G)的表达 | 第186-187页 |
| ·重组病毒PRV SA215(G)的部分生物学特性研究 | 第187页 |
| ·重组病毒PRV SA215(G)的对仔猪的安全性 | 第187页 |
| ·重组病毒PRV SA215(G)的免疫应答 | 第187-189页 |
| 5 小结 | 第189-190页 |
| 本研究的创新点 | 第190-191页 |
| 参考文献 | 第191-199页 |
| 致谢 | 第199-200页 |
| 个人简介 | 第200-201页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第201页 |
