| 中文摘要 | 第1-16页 |
| Abstract | 第16-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-39页 |
| 1 猪细小病毒研究概述 | 第19-26页 |
| ·猪细小病毒病的发生与流行特点 | 第19-20页 |
| ·猪细小病毒病原学 | 第20-23页 |
| ·病毒特性 | 第20-21页 |
| ·猪细小病毒基因组结构 | 第21-22页 |
| ·基因组产物 | 第22-23页 |
| ·猪细小病毒病疫苗研究进展 | 第23-26页 |
| ·灭活疫苗 | 第23-24页 |
| ·弱毒疫苗 | 第24页 |
| ·新型疫苗 | 第24-26页 |
| 2 猪圆环病毒概述 | 第26-34页 |
| ·猪圆环病毒病的发生与流行特点 | 第26-27页 |
| ·猪圆环病毒病原学 | 第27-31页 |
| ·猪圆环病毒病原特性 | 第27-28页 |
| ·猪圆环病毒基因组结构 | 第28-29页 |
| ·猪圆环病毒基因组产物 | 第29-31页 |
| ·PCV2与免疫的关系 | 第31页 |
| ·猪圆环病毒疫苗研究进展 | 第31-34页 |
| ·PCV灭活疫苗 | 第32页 |
| ·PCV弱毒疫苗 | 第32-33页 |
| ·核酸疫苗 | 第33页 |
| ·重组活载体疫苗 | 第33-34页 |
| ·其他 | 第34页 |
| 3. 核酸疫苗研究进展 | 第34-35页 |
| 4. 伪狂犬病毒载体研究进展 | 第35-37页 |
| 5. 本文研究的目的和意义 | 第37-39页 |
| 第二章 四川省PPV与PCV2病原流行病学调查 | 第39-47页 |
| 1 试验材料与方法 | 第39-41页 |
| ·实验材料 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39-40页 |
| ·样品的收集 | 第40页 |
| ·样品的处理 | 第40页 |
| ·检测方法 | 第40-41页 |
| 2. 实验结果 | 第41-44页 |
| ·总体阳性率 | 第41-42页 |
| ·各生产阶段阳性率 | 第42-43页 |
| ·猪场阳性率 | 第43-44页 |
| 3. 讨论 | 第44-46页 |
| 4 小结 | 第46-47页 |
| 第三章 PPV和PCV2核酸疫苗的构建 | 第47-69页 |
| 1 材料与方法 | 第47-57页 |
| ·质粒、菌株及细胞 | 第47页 |
| ·主要试剂及药品 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47-48页 |
| ·真核表达载体PCI-VP2的构建 | 第48-51页 |
| ·质粒pMD-VP2的小量制备 | 第48-49页 |
| ·PPV VP2基因亚克隆 | 第49-50页 |
| ·真核表达载体pCI-VP2的构建 | 第50-51页 |
| ·真核表达载体PCI-ORF2的构建 | 第51-53页 |
| ·质粒pMD-ORF2的小量制备 | 第51页 |
| ·PCV2 ORF2基因亚克隆 | 第51-52页 |
| ·真核表达载体pCI-ORF2的构建 | 第52-53页 |
| ·真核表达载体pCI-VP2-ORF2的构建 | 第53-54页 |
| ·质粒pCI-VP2和pCI-ORF2的小量制备 | 第53页 |
| ·pCI-VP2和ORF2基因的酶切与回收 | 第53页 |
| ·连接与转化 | 第53页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第53-54页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第54页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第54页 |
| ·重组质粒转染VERO细胞 | 第54-55页 |
| ·pCI-VP2、pCI-ORF2和pCI-VP2-ORF2质粒DNA的抽提 | 第54页 |
| ·pCI-VP2、pCI-ORF2和pCI-VP2-ORF2质粒DNA的转染 | 第54-55页 |
| ·重组质粒表达分析 | 第55-57页 |
| ·真核表达转录RT-PCR检测 | 第55页 |
| ·SDS-PAGE及Western blotting分析 | 第55-57页 |
| ·间接免疫荧光检测 | 第57页 |
| 2. 实验结果 | 第57-65页 |
| ·真核表达载体pCI-VP2的构建 | 第57-58页 |
| ·PPV VP2基因的PCR扩增 | 第57-58页 |
| ·pMD-VP2(A)的酶切鉴定 | 第58页 |
| ·pCI-VP2的酶切鉴定 | 第58页 |
| ·真核表达载体PCI-ORF2的构建 | 第58-60页 |
| ·PCV2 ORF2基因的PCR扩增 | 第58-59页 |
| ·pMD-ORF2(A)的酶切鉴定 | 第59页 |
| ·pCI-ORF2的酶切鉴定 | 第59-60页 |
| ·真核表达载体PCI-VP2-ORF2的构建 | 第60-62页 |
| ·pCI-VP2-ORF2的酶切鉴定 | 第60页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第60页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第60-62页 |
| ·重组质粒表达分析 | 第62-65页 |
| ·真核表达转录RT-PCR检测 | 第62页 |
| ·SDS-PAGE与Western blotting分析 | 第62页 |
| ·间接免疫荧光检测 | 第62-65页 |
| 3. 讨论 | 第65-68页 |
| ·核酸疫苗的设计 | 第65-66页 |
| ·目的基因的选择 | 第65-66页 |
| ·表达载体的选择 | 第66页 |
| ·重组质粒的构建策略 | 第66-67页 |
| ·融合基因的设计 | 第66-67页 |
| ·重组构建技术 | 第67页 |
| ·关于表达 | 第67-68页 |
| 4. 小结 | 第68-69页 |
| 第四章 PPV和PCV2核酸疫苗对小鼠免疫效果研究 | 第69-84页 |
| 1 材料与方法 | 第69-75页 |
| ·质粒和实验动物 | 第69页 |
| ·主要试剂及药品 | 第69页 |
| ·主要仪器 | 第69-70页 |
| ·质粒DNA的大量抽提与纯化 | 第70页 |
| ·质粒DNA的免疫 | 第70页 |
| ·T淋巴细胞数量的动态变化检测 | 第70-71页 |
| ·脾淋巴细胞增殖反应(MTT比色法) | 第71页 |
| ·抗体检测 | 第71-72页 |
| ·PPV抗体检测 | 第71-72页 |
| ·PCV2抗体检测 | 第72页 |
| ·细胞因子检测 | 第72-73页 |
| ·IL-2检测 | 第72-73页 |
| ·IL-4检测 | 第73页 |
| ·IFN-γ检测 | 第73页 |
| ·重组质粒安全性研究 | 第73-74页 |
| ·统计学分析 | 第74-75页 |
| 2. 实验结果 | 第75-79页 |
| ·T淋巴细胞数量的动态变化检测 | 第75页 |
| ·脾淋巴细胞增殖反应的检测(MTT比色法) | 第75-76页 |
| ·抗体水平检测 | 第76-78页 |
| ·PPV抗体检测 | 第76-77页 |
| ·PCV2抗体检测 | 第77-78页 |
| ·细胞因子检测 | 第78-79页 |
| ·IL-2检测 | 第78页 |
| ·IL-4检测 | 第78-79页 |
| ·IFN-γ检测 | 第79页 |
| ·重组质粒安全性研究 | 第79页 |
| 3. 讨论 | 第79-83页 |
| ·核酸疫苗对小鼠免疫效力的研究 | 第79-80页 |
| ·核酸疫苗的免疫途径与剂量 | 第80-81页 |
| ·细胞免疫应答 | 第81页 |
| ·体液免疫应答 | 第81-82页 |
| ·核酸疫苗的安全性 | 第82-83页 |
| 4. 小结 | 第83-84页 |
| 第五章 PPV-PCV2-PRV三价基因工程疫苗PRV SA215(D1)的构建 | 第84-99页 |
| 1 材料与方法 | 第85-91页 |
| ·质粒、菌株及细胞 | 第85页 |
| ·主要试剂及药品 | 第85页 |
| ·主要仪器 | 第85页 |
| ·质粒PCI-VP2-ORF2的小量制备 | 第85-86页 |
| ·PPI-2.EGFP.VP2.ORF2的构建 | 第86页 |
| ·质粒pPI-2.EGFP与pCI-VP2-ORF2的酶切回收 | 第86页 |
| ·连接与转化 | 第86页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第86-87页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第86-87页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第87页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第87页 |
| ·PPV-PCV2-PRV三价基因工程疫苗PRV SA215(D1)的构建 | 第87-89页 |
| ·pPI-2.EGFP.VP2.ORF2质粒DNA的抽提 | 第87-88页 |
| ·PRV SA215病毒DNA的抽提 | 第88-89页 |
| ·pPI-2.EGFP.VP2.ORF2质粒与PRV SA215 DNA共转染Vero细胞 | 第89页 |
| ·重组病毒的筛选 | 第89-90页 |
| ·重组病毒表达分析 | 第90-91页 |
| ·SDS-PAGE及Western blotting分析 | 第90页 |
| ·间接免疫荧光分析 | 第90-91页 |
| 2. 实验结果 | 第91-94页 |
| ·PPI-2.EGFP.VP2.ORF2的鉴定 | 第91-92页 |
| ·pPI-2.EGFP.VP2.ORF2的酶切鉴定 | 第91页 |
| ·pPI-2.EGFP.VP2.ORF2的PCR鉴定 | 第91-92页 |
| ·pPI-2.EGFP.VP2.ORF2的序列测定 | 第92页 |
| ·重组PRV SA215(D1)的构建与筛选 | 第92-93页 |
| ·重组PRV SA215(D1)的PCR鉴定 | 第93页 |
| ·PRV SA215(D1)的表达分析 | 第93-94页 |
| ·SDS-PAGE及Western blotting分析 | 第93-94页 |
| ·间接免疫荧光分析 | 第94页 |
| 3. 讨论 | 第94-98页 |
| ·伪狂犬病病毒载体的优越性 | 第94-96页 |
| ·重组病毒PRV SA215(D1)的构建 | 第96-97页 |
| ·外源基因在伪狂犬病病毒载体中的表达 | 第97-98页 |
| 4. 小结 | 第98-99页 |
| 第六章 PRV SA215(D1)部分生物学特性研究 | 第99-115页 |
| 1 材料与方法 | 第99-103页 |
| ·细胞、疫苗和实验动物 | 第99页 |
| ·主要试剂及药品 | 第99-100页 |
| ·主要仪器 | 第100页 |
| ·PRV SA215(D1)在VERO细胞上的致病效应观察 | 第100页 |
| ·蚀斑试验 | 第100页 |
| ·一步生长曲线测定 | 第100页 |
| ·PRV SA215(D1)与亲本毒株SA215形态学比较 | 第100页 |
| ·PRV SA215(D1)的遗传稳定性检测 | 第100-101页 |
| ·PRV SA215(D1)对小鼠的安全性与免疫保护试验 | 第101页 |
| ·PRV SA215(D1)对小鼠的安全性试验 | 第101页 |
| ·PRV SA215(D1)对小鼠的免疫保护试验 | 第101页 |
| ·PRV SA215(D1)对仔猪的免疫性实验 | 第101-103页 |
| ·试验分组 | 第101页 |
| ·外周T淋巴细胞亚群数量的检测 | 第101-102页 |
| ·PRV、PPV、PCV2抗体检测 | 第102页 |
| ·细胞因子检测 | 第102-103页 |
| 2 试验结果 | 第103-112页 |
| ·PRV SA215(D1)在VERO细胞上的致病效应观察 | 第103-104页 |
| ·噬斑形态观察 | 第104-105页 |
| ·一步生长曲线测定 | 第105页 |
| ·PRV SA215(D1)与亲本毒株PRV SA215形态学比较 | 第105-106页 |
| ·PRV SA215(D1)的遗传稳定性检测 | 第106-107页 |
| ·PRV SA215(D1)对小鼠的安全性与免疫保护 | 第107页 |
| ·PRV SA215(D1)对小鼠的安全性试验 | 第107页 |
| ·PRV SA215(D1)对小鼠的免疫保护试验 | 第107页 |
| ·PRV SA215(D1)对仔猪的免疫性实验 | 第107-110页 |
| ·外周T淋巴细胞亚群数量的检测 | 第107-108页 |
| ·PRV抗体检测 | 第108-109页 |
| ·PPV抗体检测 | 第109页 |
| ·PCV2抗体检测 | 第109-110页 |
| ·细胞因子检测 | 第110-112页 |
| ·IL-2检测 | 第110-111页 |
| ·IL-4检测 | 第111页 |
| ·IFN-γ检测 | 第111-112页 |
| 3. 讨论 | 第112-114页 |
| ·重组病毒PRV SA215(D1)的培养增殖特性 | 第112-113页 |
| ·安全性试验 | 第113页 |
| ·PRV SA215(D1)对仔猪的免疫效果 | 第113-114页 |
| 4. 小结 | 第114-115页 |
| 本研究的创新之处 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 个人简介 | 第127-128页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第128页 |
