| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第11-17页 |
| 1.1 帕金森病病理特征 | 第11页 |
| 1.2 星形胶质细胞及功能 | 第11-12页 |
| 1.3 星形胶质细胞与PD的关系 | 第12-13页 |
| 1.3.1 星形胶质细胞在PD中的保护作用 | 第13页 |
| 1.3.2 星形胶质细胞在PD中的毒性作用 | 第13页 |
| 1.4 突触核蛋白病理特征及 β-syn突变体 | 第13-14页 |
| 1.5 星形胶质细胞与 α-syn突触核蛋白的研究 | 第14-15页 |
| 1.6 星形胶质细胞S100β 的表达与PD的研究 | 第15页 |
| 1.7 星形胶质细胞GFAP的表达 | 第15-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-31页 |
| 2.1 Flag-β-syn WT、V70M与P123H重组质粒的表达和U251稳定表达 β-syn细胞株的建立及验证 | 第17-22页 |
| 2.1.1 主要仪器及设备 | 第17页 |
| 2.1.2 试剂及配制方法 | 第17-19页 |
| 2.1.3 细胞的传代培养 | 第19-20页 |
| 2.1.4 摸索抗生素的最适工作浓度 | 第20页 |
| 2.1.5 质粒转染、药杀筛选 | 第20-21页 |
| 2.1.6 免疫印迹样品蛋白裂解 | 第21页 |
| 2.1.7 免疫印迹 | 第21-22页 |
| 2.2 免疫荧光双标实验和细胞的增殖毒性释放的检测 | 第22-24页 |
| 2.2.1 主要仪器与设备 | 第22页 |
| 2.2.2 常用试剂及配制 | 第22-23页 |
| 2.2.3 免疫细胞化学 | 第23页 |
| 2.2.4 LDH细胞毒性检测 | 第23-24页 |
| 2.2.5 WST-1 细胞存活率检测 | 第24页 |
| 2.3 U251 Flag-β-syn稳转细胞与SH-SY5Y神经元细胞共培养 | 第24-26页 |
| 2.3.1 主要仪器与设备 | 第24页 |
| 2.3.2 主要试剂及配制方法 | 第24-25页 |
| 2.3.3 收集U251 Flag-β-syn稳转细胞条件性培养液检测 | 第25页 |
| 2.3.4 收集U251 Flag-β-syn稳转细胞与SH-SY5Y神经元细胞共培养 | 第25-26页 |
| 2.3.5 TUNEL细胞凋亡检测 | 第26页 |
| 2.4 星形胶质细胞特异敲进 β-syn V70M基因的小鼠检测 | 第26-30页 |
| 2.4.1 主要仪器与设备 | 第26-27页 |
| 2.4.2 主要试剂及配制方法 | 第27-28页 |
| 2.4.3 鼠尾提取 | 第28页 |
| 2.4.4 鼠尾基因型检测 | 第28-29页 |
| 2.4.5 小鼠行为学检测 | 第29-30页 |
| 2.4.6 小鼠各脑区蛋白提取 | 第30页 |
| 2.5 统计学分析 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-50页 |
| 3.1 检测 β-syn重组质粒在U251细胞内的表达 | 第31-33页 |
| 3.1.1 Western blotting检测重组质粒在U251细胞内的表达 | 第31页 |
| 3.1.2 免疫荧光检测重组质粒Flag-β-syn在U251细胞内的表达 | 第31-32页 |
| 3.1.3 β-syn野生及突变体影响U251细胞存活率及细胞毒性 | 第32-33页 |
| 3.2 U251稳定表达重组质粒Flag-β-syn细胞系的建立 | 第33页 |
| 3.3 U251稳定表达重组质粒Flag-β-syn对U251细胞的影响 | 第33-38页 |
| 3.3.1 β-syn野生及突变体在U251稳转细胞系中的表达 | 第33-34页 |
| 3.3.2 U251稳转细胞系中 β-syn的表达对 α-syn的影响 | 第34-36页 |
| 3.3.3 检测稳转细胞系中 β-syn的表达对U251细胞的影响 | 第36-38页 |
| 3.4 U251稳定表达重组质粒Flag-β-syn培养液中 β-syn的分泌 | 第38-39页 |
| 3.5 U251稳定表达重组质粒Flag-β-syn对SH-SY5Y神经元的影响 | 第39-44页 |
| 3.5.1 WST-1 检测稳转U251细胞条件性培养液对SH-SY5Y存活率的影响 | 第39-40页 |
| 3.5.2 TUNEL检测U251条件性培养液对SH-SY5Y凋亡的影响 | 第40-41页 |
| 3.5.3 Western blotting检测U251条件性培养液对SH-SY5Y凋亡的影响 | 第41页 |
| 3.5.4 稳转U251的条件性培养液对SH-SY5Y内 α-syn表达的影响 | 第41-43页 |
| 3.5.5 U251条件性培养液对SH-SY5Y轴突长度的影响 | 第43-44页 |
| 3.6 β-syn从U251稳转细胞中转移至神经元SH-SY5Y中 | 第44-46页 |
| 3.7 星形胶质细胞特异表达 β-syn V70M的转基因小鼠检测 | 第46-50页 |
| 3.7.1 星形胶质细胞特异表达 β-syn V70M的转基因小鼠基因型检测 | 第46-47页 |
| 3.7.2 星形胶质细胞特异敲进 β-syn V70M的转基因小鼠行为学检测 | 第47-49页 |
| 3.7.3 星形胶质细胞特异敲进 β-syn V70M的转基因小鼠蛋白免疫检测 | 第49-50页 |
| 4 结论 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58-60页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第60-61页 |
