中文摘要 | 第3-4页 |
ABSTRACT | 第4-5页 |
第一章 文献综述 | 第9-34页 |
1.1 包含体蛋白质 | 第9-13页 |
1.1.1 包含体的特点 | 第9-11页 |
1.1.2 影响包含体蛋白质复性的关键因素 | 第11-13页 |
1.2 核糖核酸酶 A | 第13-18页 |
1.2.1 核糖核酸酶 A 的结构 | 第13-14页 |
1.2.2 核糖核酸酶 A 的性质和用途 | 第14-15页 |
1.2.3 核糖核酸酶 A 复性研究的进展 | 第15-18页 |
1.3 蛋白质复性策略 | 第18-33页 |
1.3.1 基于变性剂去除的蛋白质复性策略 | 第19-21页 |
1.3.2 基于添加剂辅助的蛋白质复性策略 | 第21-32页 |
1.3.3 基于复性物理环境调控的蛋白质复性策略 | 第32-33页 |
1.4 本文的主要研究目的和内容 | 第33-34页 |
第二章 新型氧化还原系统辅助核糖核酸酶 A 包含体复性 | 第34-57页 |
2.1 引言 | 第34-35页 |
2.2 实验材料和设备 | 第35-38页 |
2.3 实验方法 | 第38-46页 |
2.3.1 商品化核糖核酸酶 A 的变性 | 第38页 |
2.3.2 核糖核酸酶 A 包含体的制备 | 第38-39页 |
2.3.3 核糖核酸酶 A 包含体的溶解和变性 | 第39页 |
2.3.4 蛋白质浓度的测定(Bradford 法) | 第39-40页 |
2.3.5 SDS-PAGE 电泳 | 第40-41页 |
2.3.6 氧化剂己酰胱胺(HCA)的制备 | 第41-42页 |
2.3.7 核糖核酸酶 A 的复性 | 第42页 |
2.3.8 重组核糖核酸酶 A 的纯化 | 第42-43页 |
2.3.9 核糖核酸酶 A 的酶活检测 | 第43-45页 |
2.3.10 核糖核酸酶 A 的酶催化动力学测定 | 第45-46页 |
2.3.11 圆二色光谱表征 | 第46页 |
2.4 结果与讨论 | 第46-56页 |
2.4.1 氧化还原系统 ArSH/HCA 的建立和优化 | 第46-50页 |
2.4.2 氧化还原系统 ArSH/HCA 的应用 | 第50-54页 |
2.4.3 核糖核酸酶 A 包含体复性产物的表征 | 第54-56页 |
2.5 本章小结 | 第56-57页 |
第三章 同电荷介质辅助高浓度核糖核酸酶 A 包含体复性 | 第57-69页 |
3.1 引言 | 第57-58页 |
3.2 实验材料和设备 | 第58-59页 |
3.3 实验方法 | 第59-61页 |
3.3.1 同电荷介质的制备和表征 | 第59-60页 |
3.3.2 核糖核酸酶 A 包含体的溶解和变性 | 第60页 |
3.3.3 核糖核酸酶 A 包含体的复性 | 第60-61页 |
3.3.4 核糖核酸酶 A 的酶活检测 | 第61页 |
3.4 结果与讨论 | 第61-67页 |
3.4.1 高浓度核糖核酸酶 A 包含体的直接稀释复性 | 第61-64页 |
3.4.2 同电荷介质辅助高浓度核糖核酸酶 A 包含体复性 | 第64-67页 |
3.5 本章小结 | 第67-69页 |
第四章 人工分子伴侣辅助高浓度核糖核酸酶 A 包含体复性和纯化 | 第69-86页 |
4.1 引言 | 第69-70页 |
4.2 实验材料和设备 | 第70页 |
4.3 实验方法 | 第70-71页 |
4.3.1 核糖核酸酶 A 包含体的溶解和变性 | 第70页 |
4.3.2 核糖核酸酶 A 包含体的复性 | 第70-71页 |
4.3.3 核糖核酸酶 A 复性溶液浊度的测定 | 第71页 |
4.3.4 核糖核酸酶 A 复性溶液成分的分析 | 第71页 |
4.4 结果与讨论 | 第71-85页 |
4.4.1 人工分子伴侣辅助高浓度核糖核酸酶 A 包含体复性 | 第71-74页 |
4.4.2 高脲浓度下人工分子伴侣的蛋白质纯化作用 | 第74-81页 |
4.4.3 低脲浓度下人工分子伴侣的蛋白质纯化作用 | 第81-85页 |
4.5 本章小结 | 第85-86页 |
第五章 结论与展望 | 第86-88页 |
5.1 全文总结 | 第86-87页 |
5.2 创新点 | 第87页 |
5.3 对今后工作的建议与展望 | 第87-88页 |
参考文献 | 第88-103页 |
发表论文和科研情况说明 | 第103-104页 |
附录一 实验中试剂配制方法 | 第104-105页 |
附录二 Bradford 蛋白质标准曲线 | 第105-106页 |
附录三 HCA 质谱鉴定结果 | 第106-107页 |
附录四 核糖核酸酶 A 酶活标准曲线 | 第107-108页 |
致谢 | 第108页 |