| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-19页 |
| 1.1 薯蓣皂苷概述 | 第9-10页 |
| 1.1.1 薯蓣植物概述 | 第9页 |
| 1.1.2 薯蓣皂苷的化学成分 | 第9-10页 |
| 1.1.3 薯蓣皂苷的药理作用 | 第10页 |
| 1.2 薯蓣皂苷糖苷酶 | 第10-12页 |
| 1.2.1 薯蓣皂苷转化生成薯蓣皂苷元的研究 | 第11页 |
| 1.2.2 薯蓣皂苷糖苷酶简介 | 第11-12页 |
| 1.2.3 薯蓣皂苷糖苷酶研究进展 | 第12页 |
| 1.3 外源基因在原核细胞中的表达 | 第12-14页 |
| 1.3.1 外源基因在大肠杆菌中的表达 | 第12-14页 |
| 1.4 亚克隆 | 第14页 |
| 1.5 巴斯德毕赤酵母真核表达系统概述 | 第14-18页 |
| 1.5.1 巴斯德毕赤酵母表达系统的构成 | 第15-17页 |
| 1.5.1.1 巴斯德毕赤酵母的表达载体 | 第15页 |
| 1.5.1.2 宿主菌 | 第15-17页 |
| 1.5.2 外源基因在毕赤酵母中的表达 | 第17-18页 |
| 1.5.2.1 外源基因在毕赤酵母中的表达的特点 | 第17-18页 |
| 1.6 本论文的主要研究内容 | 第18-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-37页 |
| 2.1 实验材料与设备 | 第19-22页 |
| 2.1.1 菌株与载体 | 第19页 |
| 2.1.2 培养基 | 第19-20页 |
| 2.1.3 仪器与设备 | 第20-21页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-37页 |
| 2.2.1 薯蓣皂苷糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第22-29页 |
| 2.2.1.1 培养基的选择 | 第22-23页 |
| 2.2.1.2 菌体的诱导 | 第23页 |
| 2.2.1.3 菌体的收集与处理 | 第23页 |
| 2.2.1.4 细胞破碎 | 第23-24页 |
| 2.2.1.5 转基因大肠杆菌产酶蛋白的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.1.6 转基因大肠杆菌产酶蛋白的活性检测 | 第25-26页 |
| 2.2.1.7 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测重组蛋白分子量 | 第26-29页 |
| 2.2.2 薯蓣皂苷糖苷酶基因的真核亚克隆 | 第29-34页 |
| 2.2.2.1 重组质粒的构建 | 第29-32页 |
| 2.2.2.2 转化及重组子的筛选 | 第32-33页 |
| 2.2.2.3 电转化与筛菌 | 第33-34页 |
| 2.2.3 薯蓣皂苷糖苷酶基因在毕赤酵母中的诱导表达 | 第34-37页 |
| 2.2.3.1 毕赤酵母的诱导培养 | 第34-35页 |
| 2.2.3.2 蛋白含量的测定 | 第35-36页 |
| 2.2.3.3 转基因毕赤酵母产酶蛋白的提取 | 第36页 |
| 2.2.3.4 转基因毕赤酵母产酶蛋白的活性测定 | 第36页 |
| 2.2.3.5 转基因毕赤酵母产酶蛋白的分子量测定 | 第36-37页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第37-51页 |
| 3.1 薯蓣皂苷糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第37-41页 |
| 3.1.1 大肠杆菌培养基的选择 | 第37-38页 |
| 3.1.2 菌体生长状况的确定 | 第38页 |
| 3.1.3 菌体破碎方法的确定 | 第38页 |
| 3.1.3.1 超声波破碎方法的优化 | 第38页 |
| 3.1.4 转基因大肠杆菌产酶蛋白的活性检测 | 第38-40页 |
| 3.1.5 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测重组蛋白分子量 | 第40-41页 |
| 3.2 薯蓣皂苷糖苷酶基因的真核亚克隆 | 第41-44页 |
| 3.2.1 含目的基因质粒的酶切鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2.2 重组质粒的构建 | 第42页 |
| 3.2.3电转化与筛菌 | 第42-44页 |
| 3.3 薯蓣皂苷糖苷酶基因在毕赤酵母菌中的表达 | 第44-51页 |
| 3.3.1 产蛋白浓度的测定 | 第44-46页 |
| 3.3.2 转基因毕赤酵母产酶蛋白的活性测定 | 第46-49页 |
| 3.3.2.1 最佳诱导培养时间的确定 | 第46-47页 |
| 3.3.2.2 甲醇诱导浓度 | 第47-49页 |
| 3.3.3 转基因毕赤酵母产酶蛋白的分子量测定 | 第49-51页 |
| 第四章 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
