| 论文创新点 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-40页 |
| 第一章 人免疫缺陷病毒的分子生物学 | 第13-28页 |
| 1.1 引言 | 第13-15页 |
| 1.2 HIV病毒的形态结构 | 第15页 |
| 1.3 HIV病毒的流行病学 | 第15-16页 |
| 1.4 HIV病毒的生活周期 | 第16-17页 |
| 1.5 HIV病毒基因组组成及编码蛋白 | 第17-25页 |
| 1.5.1 结构蛋白 | 第18-20页 |
| 1.5.1.1 Gag蛋白 | 第18-19页 |
| 1.5.1.2 Pol蛋白 | 第19页 |
| 1.5.1.3 Env蛋白 | 第19-20页 |
| 1.5.2 调控蛋白 | 第20-22页 |
| 1.5.2.1 Tat蛋白 | 第20-21页 |
| 1.5.2.2 Rev蛋白 | 第21-22页 |
| 1.5.3 辅助蛋白 | 第22-25页 |
| 1.5.3.1 Vif蛋白 | 第22页 |
| 1.5.3.2 Vpr蛋白 | 第22-23页 |
| 1.5.3.3 Vpu蛋白 | 第23-24页 |
| 1.5.3.4 Nef蛋白 | 第24-25页 |
| 1.6 HIV病毒的转录和复制 | 第25-28页 |
| 第二章 人丙型肝炎病毒的分子生物学 | 第28-37页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 HCV病毒的理化特性 | 第28-29页 |
| 2.3 HCV病毒的流行病学 | 第29页 |
| 2.4 HCV病毒的生活周期 | 第29-30页 |
| 2.5 HCV病毒基因组组成及编码蛋白 | 第30-37页 |
| 2.5.1 Core蛋白 | 第31-32页 |
| 2.5.2 膜蛋白E1 | 第32页 |
| 2.5.3 膜蛋白E2 | 第32页 |
| 2.5.4 P7蛋白 | 第32-33页 |
| 2.5.5 NS2蛋白 | 第33页 |
| 2.5.6 NS3蛋白 | 第33-34页 |
| 2.5.7 NS4A蛋白 | 第34页 |
| 2.5.8 NS4B蛋白 | 第34-35页 |
| 2.5.9 NS5A蛋白 | 第35-36页 |
| 2.5.10 NS5B蛋白 | 第36-37页 |
| 第三章 HIV/HCV共感染现状 | 第37-40页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 共感染传播途径 | 第37页 |
| 3.3 共感染临床病程 | 第37-39页 |
| 3.3.1 共感染人群HCV的临床病程 | 第37-38页 |
| 3.3.2 共感染人群HIV的临床病程 | 第38-39页 |
| 3.4 本研究的意义 | 第39-40页 |
| 第二部分 研究工作 | 第40-74页 |
| 第四章 HCV调控HIV-1复制研究 | 第41-46页 |
| 4.1 引言 | 第41页 |
| 4.2 实验材料 | 第41-42页 |
| 4.2.1 质粒、菌种、病毒及细胞系 | 第41页 |
| 4.2.2 细胞培养基 | 第41-42页 |
| 4.2.3 其它实验材料 | 第42页 |
| 4.3 实验方法 | 第42-44页 |
| 4.3.1 转染用质粒DNA的提取和浓度测定 | 第42页 |
| 4.3.2 细胞培养 | 第42-43页 |
| 4.3.2.1 细胞冻存 | 第42页 |
| 4.3.2.2 细胞复苏 | 第42页 |
| 4.3.2.3 细胞传代 | 第42-43页 |
| 4.3.2.4 细胞转染 | 第43页 |
| 4.3.3 体外培养HCV1b病毒(HCVcc)的产生 | 第43页 |
| 4.3.4 HIV-1 p24水平测定 | 第43页 |
| 4.3.5 实验数据处理 | 第43-44页 |
| 4.4 实验结果 | 第44页 |
| 4.5 结果讨论 | 第44-46页 |
| 第五章 HCV NS3蛋白调控HIV-1复制作用方式的研究 | 第46-63页 |
| 5.1 引言 | 第46页 |
| 5.2 实验材料 | 第46-47页 |
| 5.2.1 质粒 | 第46页 |
| 5.2.2 抑制剂和抗体 | 第46页 |
| 5.2.3 EMSA探针及同位素 | 第46-47页 |
| 5.2.4 引物 | 第47页 |
| 5.2.5 其它实验材料 | 第47页 |
| 5.3 实验方法 | 第47-55页 |
| 5.3.1 用于分子克隆的质粒DNA提取 | 第47-48页 |
| 5.3.2 以HCV全基因组为模板扩增HCV编码基因 | 第48页 |
| 5.3.3 PCR产物的凝胶电泳检测和回收 | 第48-49页 |
| 5.3.4 PCR产物及载体质粒的酶切和回收 | 第49页 |
| 5.3.5 目的基因片段与载体的连接 | 第49页 |
| 5.3.6 连接产物的转化 | 第49-51页 |
| 5.3.6.1 电转化大肠杆菌DH5α | 第49-50页 |
| 5.3.6.2 KCM法转化大肠杆菌DH5α | 第50-51页 |
| 5.3.7 阳性克隆的筛选和序列测定 | 第51页 |
| 5.3.8 HIV-1 5'-LTR上NF-κB位点的突变 | 第51-52页 |
| 5.3.8.1 HIV-1 5'-LTR上NF-κB位点突变体的扩增 | 第51-52页 |
| 5.3.8.2 HIV-1 5’-LTR原始模板的降解 | 第52页 |
| 5.3.9 荧光素酶活性的测定 | 第52-53页 |
| 5.3.9.1 荧光素酶报道基因系统原理 | 第52页 |
| 5.3.9.2 荧光素酶活性的测定 | 第52-53页 |
| 5.3.10 蛋白免疫印迹(Western blot) | 第53页 |
| 5.3.11 蛋白质非变性凝胶电泳迁移实验(EMSA) | 第53-55页 |
| 5.3.11.1 5%非变性聚丙烯酰胺凝胶的制备 | 第53-54页 |
| 5.3.11.2 寡聚核苷酸探针的退火 | 第54页 |
| 5.3.11.3 寡聚核苷酸探针的同位素标记 | 第54页 |
| 5.3.11.4 细胞核抽提物的制备 | 第54-55页 |
| 5.3.11.5 细胞核抽提物与标记探针的体外结合 | 第55页 |
| 5.3.11.6 细胞核抽提物的非变性凝胶电泳和显影 | 第55页 |
| 5.3.12 实验数据处理 | 第55页 |
| 5.4 实验结果 | 第55-61页 |
| 5.4.1 HCV蛋白真核表达质粒构建 | 第55-57页 |
| 5.4.2 HIV-1 5’-LTR及NF-κB启动子突变体构建 | 第57-58页 |
| 5.4.3 NS3增强HIV-1复制 | 第58-59页 |
| 5.4.4 NS3激活NF-κB通路增强HIV-1转录 | 第59-61页 |
| 5.5 结果讨论 | 第61-63页 |
| 第六章 协同HCV NS3/4A复合物调控HIV-1复制的HIV-1编码蛋白的确定 | 第63-68页 |
| 6.1 引言 | 第63页 |
| 6.2 实验材料 | 第63页 |
| 6.2.1 质粒 | 第63页 |
| 6.2.2 抗体 | 第63页 |
| 6.2.3 EMSA探针及同位素 | 第63页 |
| 6.2.4 其它实验材料 | 第63页 |
| 6.3 实验方法 | 第63-64页 |
| 6.3.1 分子克隆用质粒DNA提取及分子克隆过程 | 第63页 |
| 6.3.2 细胞转染 | 第63-64页 |
| 6.3.3 HIV-1 p24蛋白浓度测定和荧光素酶活性测定 | 第64页 |
| 6.3.4 蛋白质非变性凝胶电泳迁移实验(EMSA) | 第64页 |
| 6.3.5 实验数据处理 | 第64页 |
| 6.4 实验结果 | 第64-67页 |
| 6.4.1 NS3/4A不能激活HIV-1 5'-LTR活性 | 第64页 |
| 6.4.2 NS3/4A与Vpu共同调节HIV-1 5'-LTR活性 | 第64-65页 |
| 6.4.3 NS3/4A与Vpu协同激活NF-κB通路调节HIV-1转录 | 第65-67页 |
| 6.5 结果讨论 | 第67-68页 |
| 第七章 HCV NS3/4A复合物与HIV-1 Vpu蛋白相互关系的研究 | 第68-74页 |
| 7.1 引言 | 第68页 |
| 7.2 实验材料 | 第68页 |
| 7.2.1 质粒 | 第68页 |
| 7.2.2 抗体 | 第68页 |
| 7.2.3 其它实验材料 | 第68页 |
| 7.3 实验方法 | 第68-69页 |
| 7.3.1 分子克隆用质粒DNA提取及分子克隆过程 | 第68页 |
| 7.3.2 HIV-1 Vpu蛋白丝氨酸突变体构建 | 第68页 |
| 7.3.3 细胞转染 | 第68页 |
| 7.3.4 蛋白免疫印迹(Western blot) | 第68-69页 |
| 7.4 实验结果 | 第69-72页 |
| 7.4.1 C端融合表达GFP的病毒编码蛋白真核表达质粒构建 | 第69页 |
| 7.4.2 Vpu丝氨酸突变体真核表达质粒构建 | 第69-70页 |
| 7.4.3 NS3截短真核表达质粒构建 | 第70页 |
| 7.4.4 NS3降低细胞中Vpu稳定性 | 第70-72页 |
| 7.4.5 Vpu介导细胞内NS4A降解 | 第72页 |
| 7.5 结果讨论 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-94页 |
| 附录Ⅰ 论文中所用实验试剂 | 第94-97页 |
| 附录Ⅱ 论文中所用实验药品配置 | 第97-102页 |
| 附录Ⅲ 论文中所用实验用品和仪器 | 第102-105页 |
| 附录Ⅳ 论文中所用引物 | 第105-107页 |
| 附录Ⅴ 研究生期间发表和待发表的论文 | 第107-108页 |
| 附录Ⅵ 研究生期间参加的学术会议和历练 | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109页 |
