| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文缩略词表 | 第6-11页 |
| 1 前言 | 第11-24页 |
| 1.1 Sohlh1基因与生殖 | 第12-15页 |
| 1.1.1 Sohlh1基因的转录调控机制 | 第13-15页 |
| 1.1.2 Sohlh1基因的最新研究进展 | 第15页 |
| 1.2 CRISPR/Cas9系统 | 第15-19页 |
| 1.2.1 CRISPR/Cas9系统的组成 | 第16页 |
| 1.2.2 CRISPR/Cas9系统的作用机制 | 第16-17页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas9系统的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2.4 CRISPR/Cas9系统的应用 | 第18-19页 |
| 1.3 四环素诱导表达调控系统 | 第19-21页 |
| 1.3.1 四环素调控系统的作用机制 | 第19-21页 |
| 1.3.2 四环素调控系统的研究进展 | 第21页 |
| 1.3.3 四环素调控系统的应用 | 第21页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第21-23页 |
| 1.5 研究技术路线 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第24页 |
| 2.1.2 质粒和细胞株 | 第24页 |
| 2.1.3 试剂与耗材 | 第24-25页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.5 主要试剂配制 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-46页 |
| 2.2.1 猪Sohlh1基因的扩增 | 第27-31页 |
| 2.2.2 PCW-Cas9载体的优化 | 第31-32页 |
| 2.2.3 plv-sgRNA载体的改造 | 第32-34页 |
| 2.2.4 Sohlh1基因靶位点确定 | 第34-39页 |
| 2.2.5 plv-sgRNA-2A-GFP特异性载体的构建 | 第39-40页 |
| 2.2.6 重组质粒的慢病毒包装 | 第40-42页 |
| 2.2.7 慢病毒侵染细胞及药物筛选 | 第42-43页 |
| 2.2.8 Western blot检测 | 第43-45页 |
| 2.2.9 筛选细胞系阳性比例鉴定 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-56页 |
| 3.1 猪Sohlh1基因测序结果 | 第46页 |
| 3.2 PCW-Cas9载体的优化结果 | 第46-48页 |
| 3.3 转Cas9基因细胞系的检测 | 第48页 |
| 3.4 plv-sgRNA载体的改造结果 | 第48-49页 |
| 3.5 sgRNA活性位点筛选 | 第49-53页 |
| 3.5.1 Sohlh1基因靶位点的选择 | 第49-50页 |
| 3.5.2 U6-sgRNA瞬时表达元件构建结果 | 第50-51页 |
| 3.5.3 Sohlh1基因敲除结果鉴定 | 第51页 |
| 3.5.4 个靶位点敲除分析 | 第51-53页 |
| 3.6 构建sgRNA特异性表达载体结果 | 第53-54页 |
| 3.7 sgRNA特异性载体的慢病毒包装结果 | 第54页 |
| 3.8 慢病毒侵染细胞及药物筛选结果 | 第54-55页 |
| 3.9 阳性细胞筛选结果 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-61页 |
| 4.1 靶基因的选择 | 第56-57页 |
| 4.2 低脱靶效率Cas9载体的优化 | 第57-58页 |
| 4.3 四环素诱导系统与CRISPR/Cas9系统的结合 | 第58-59页 |
| 4.4 慢病毒转染 | 第59页 |
| 4.5 可诱导型Sohlh1基因敲除细胞系的应用 | 第59-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 附录 | 第70-77页 |
| 附录1 PCW-e SpCas9（1.1）质粒图谱 | 第70-71页 |
| 附录2 eSpCas9（1.1）基因序列 | 第71-74页 |
| 附录3 eSpCas9（1.1）位点突变测序结果 | 第74-75页 |
| 附录4 Sohlh1 mRNA | 第75-76页 |
| 附录5 plv-sgRNA-2A-GFP改造过程 | 第76-77页 |
| 附录6 Tet-on系统与CRISPR/Cas9系统工作原理 | 第77页 |
