| 中文摘要 | 第8-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 缩略词表 | 第17-20页 |
| 第一部分 GM-CSF抗流感病毒作用机制研究 | 第20-92页 |
| 前言 | 第20-22页 |
| 第一节 实验总体流程 | 第22-27页 |
| 一、材料与方法 | 第22-23页 |
| 1. 材料 | 第22页 |
| 2. 方法 | 第22-23页 |
| 2.1 小鼠分组、造模及给药 | 第22页 |
| 2.2 样本取材及保存 | 第22-23页 |
| 2.3 统计学分析 | 第23页 |
| 二、结果 | 第23-26页 |
| 1. 各组小鼠的肺指数情况 | 第23-24页 |
| 2. 各组小鼠肺大体病变情况 | 第24-26页 |
| 三、讨论 | 第26-27页 |
| 第二节 GM-CSF对模型小鼠肺细胞因子和免疫细胞的调控作用 | 第27-43页 |
| 一、材料与方法 | 第27-29页 |
| 1. 材料 | 第27-28页 |
| 2. 方法 | 第28-29页 |
| 2.1 ELISA法检测小鼠肺细胞因子 | 第28-29页 |
| 2.2 流式细胞术检测小鼠肺免疫细胞 | 第29页 |
| 二、结果 | 第29-40页 |
| 1. 小鼠肺TNF-α、IFN-α、IFN-β、IFN-γ和IL-10水平变化情况 | 第29-33页 |
| 2. 小鼠肺中性粒细胞、单核/巨噬细胞和NK细胞数量占比变化情况 | 第33-40页 |
| 三、讨论 | 第40-43页 |
| 第三节 GM-CSF对模型小鼠肺组织病毒载量的抑制 | 第43-52页 |
| 一、材料与方法 | 第43-48页 |
| 1. 材料 | 第43-44页 |
| 2. 方法 | 第44-48页 |
| 2.1 Trizol法提取肺组织RNA | 第44-45页 |
| 2.2 RT-PCR将mRNA反转录为cDNA | 第45页 |
| 2.3 real time PCR定量分析的质粒对照品的构建 | 第45-47页 |
| 2.4 real time PCR检测肺组织样品中流感病毒M基因的表达 | 第47-48页 |
| 二、结果 | 第48-50页 |
| 1. 流感病毒M基因及GAPDH质粒对照品质量鉴定 | 第48-49页 |
| 2. real time RT-PCR 检测肺组织流感病毒载量的变化情况 | 第49-50页 |
| 三、讨论 | 第50-52页 |
| 第四节 GM-CSF对模型小鼠肺组织NF-κB信号途径的影响 | 第52-70页 |
| 一、材料与方法 | 第52-58页 |
| 1. 材料 | 第52-54页 |
| 2. 方法 | 第54-58页 |
| 2.1 real time RT-PCR检测小鼠肺组织NF-κB、IRF3和IRF7基因的表达水平 | 第54页 |
| 2.2 Western blot检测小鼠肺组织NF-κB及相关蛋白表达 | 第54-57页 |
| 2.3 免疫组化检测小鼠肺组织磷酸化NF-κB的表达 | 第57-58页 |
| 二、结果 | 第58-66页 |
| 1. GM-CSF对模型小鼠肺组织NF-κB基因表达的影响 | 第58-60页 |
| 2. GM-CSF对模型小鼠肺组织IRF3和IRF7基因表达的影响 | 第60-63页 |
| 3. GM-CSF对模型小鼠肺组织NF-κB及相关蛋白表达的影响 | 第63-65页 |
| 4. GM-CSF对小鼠肺组织磷酸化的NF-κB表达的影响 | 第65-66页 |
| 三、讨论 | 第66-70页 |
| 第五节 GM-CSF对模型小鼠肺组织内细胞凋亡的抑制作用 | 第70-83页 |
| 一、材料与方法 | 第70-71页 |
| 1. 材料 | 第70页 |
| 2. 方法 | 第70-71页 |
| 2.1 real time RT-PCR检测模型小鼠肺组织凋亡相关基因的表达 | 第70-71页 |
| 2.2 Western blot检测小鼠肺组织caspase 3、bax和bcl-2蛋白的表达 | 第71页 |
| 2.3 免疫组化检测模型小鼠肺组织cleaved caspase 3的表达 | 第71页 |
| 二、结果 | 第71-79页 |
| 1. GM-CSF对模型小鼠肺细胞凋亡相关基因表达的影响 | 第71-76页 |
| 2. GM-CSF对模型小鼠肺组织caspase 3、cleaved caspase3、bax和bcl-2蛋白表达的影响(Western blot) | 第76-78页 |
| 3. GM-CSF对模型小鼠肺组织cleaved caspase3表达的影响(IHC) | 第78-79页 |
| 三、讨论 | 第79-83页 |
| 第一部分 小结 | 第83-84页 |
| 第一部分 参考文献 | 第84-92页 |
| 第二部分 恩替卡韦黄芩苷组合物抗乙肝病毒药效研究 | 第92-158页 |
| 前言 | 第92-94页 |
| 第一节 黄芩苷抗HBV作用及机制初步研究 | 第94-118页 |
| 一、材料与方法 | 第94-106页 |
| 1. 材料 | 第94-97页 |
| 2. 方法 | 第97-106页 |
| 2.1 HepG2 2.2.15细胞的培养和传代 | 第97-98页 |
| 2.2 黄芩苷对HepG2 2.2.15细胞的细胞毒性检测 | 第98页 |
| 2.3 黄芩苷体外抗HBV活性检测 | 第98-104页 |
| 2.4 HepG2 2.2.15细胞内的肝细胞核因子表达水平的检测 | 第104-106页 |
| 二、结果 | 第106-116页 |
| 1. 黄芩苷对HepG2 2.2.15细胞生长的影响 | 第106页 |
| 2. 黄芩苷对HepG2 2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制 | 第106-107页 |
| 3. 黄芩苷对HepG2 2.2.15细胞上清HBV DNA的抑制 | 第107-109页 |
| 4. 黄芩苷对HepG2 2.2.15细胞内HBV RNA的抑制 | 第109-112页 |
| 5. 黄芩苷对HNF1α、HNF3 β和HNF4α表达的影响 | 第112-116页 |
| 三、讨论 | 第116-118页 |
| 第二节 恩替卡韦黄芩昔组合物(ETV+BA)体外抗野生型HBV作用 | 第118-123页 |
| 一、材料与方法 | 第118-119页 |
| 1. 材料 | 第118页 |
| 2. 方法 | 第118-119页 |
| 2.1 ETV+BA组合物对HepG2 2.2.15细胞毒性的检测 | 第118页 |
| 2.2 ETV+BA组合物抗HBV活性检测 | 第118-119页 |
| 二、结果 | 第119-121页 |
| 1. ETV+BA组合物对HepG2 2.2.15细胞生长的影响 | 第119页 |
| 2. ETV+BA组合物对HepG2 2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制作用 | 第119-120页 |
| 3. ETV+BA组合物对HepG2 2.2.15细胞上清HBV DNA的抑制作用 | 第120-121页 |
| 三、讨论 | 第121-123页 |
| 第三节 HBV拉米夫定耐药细胞模型的构建及恩替卡韦黄芩苷组合物体外抗拉米夫定耐药突变HBV作用 | 第123-140页 |
| 一、材料与方法 | 第123-129页 |
| 1. 材料 | 第123-124页 |
| 2. 方法 | 第124-129页 |
| 2.1 HBV rtM204V+rtL180M突变和建立HBV拉米夫定耐药细胞模型 | 第124-128页 |
| 2.2 履替卡韦黄芩合物体外抗HBV rtM204V+rtL180M突变株活性检测 | 第128-129页 |
| 二、结果 | 第129-138页 |
| 1. HBV rtM204V+rtL180M突变质粒的测序鉴定 | 第129-131页 |
| 2. rtM204V+rtL180M突变HBV在转染细胞内的复制活性 | 第131-133页 |
| 3. ETV+BA组合物体外抗HBV rtM204V+rtL180M突变株作用 | 第133-138页 |
| 三、讨论 | 第138-140页 |
| 第四节 恩替卡韦黄芩苷组合物在鸭乙肝模型中的抗DHBV作用 | 第140-152页 |
| 一、材料与方法 | 第140-146页 |
| 1. 材料 | 第140-142页 |
| 2. 方法 | 第142-146页 |
| 2.1 鸭乙肝模型的构建 | 第142-143页 |
| 2.2 分组、给药及标本取材 | 第143页 |
| 2.3 斑点杂交(Dot blot)检测鸭血清中DHBV DNA水平 | 第143-145页 |
| 2.4 Southern blot检测鸭肝DHBV DNA | 第145-146页 |
| 二、结果 | 第146-150页 |
| 1. DHBV探针的质量鉴定 | 第146页 |
| 2. ETV+BA组合物对鸭乙肝模型血清DHBV DNA的抑制作用 | 第146-149页 |
| 3. ETV+BA组合物对鸭乙肝模型肝组织DHBV DNA的抑制作用 | 第149-150页 |
| 三、讨论 | 第150-152页 |
| 第二部分 小结 | 第152-153页 |
| 展望 | 第153-154页 |
| 第二部分参考文献 | 第154-158页 |
| 在学期间的科研成果 | 第158-159页 |
| 致谢 | 第159-160页 |
| 综述 | 第160-179页 |
| 参考文献 | 第174-179页 |
| 附录一 第一部分中构建的real time PCR定量用质粒对照品测序结果 | 第179-185页 |
| 附录二 第二部分中构建的real time PCR定量用质粒对照品测序结果 | 第185-188页 |
| 附录三 pHBV3.8突变前和rtM204V+rtL180M双突变后的碱基序列比较 | 第188-192页 |
