| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 综述与导言 | 第10-21页 |
| 1.1 链霉菌 | 第10页 |
| 1.2 抗生素 | 第10-14页 |
| 1.2.1 抗生素简介 | 第10页 |
| 1.2.2 抗生素的分类 | 第10-11页 |
| 1.2.3 抗性基因 | 第11-12页 |
| 1.2.4 抗性基因产生的途经 | 第12-13页 |
| 1.2.5 抗生素面临的挑战 | 第13页 |
| 1.2.6 新型抗生素的探索 | 第13-14页 |
| 1.3 Bagremycins | 第14-17页 |
| 1.3.1 Bagremycins简介 | 第14-15页 |
| 1.3.2 Bagremycins的生物活性 | 第15-16页 |
| 1.3.3 Bagremycins的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.4 MFS家族(Major Facilitator Superfamily) | 第17-19页 |
| 1.4.1 MFS家族简介 | 第17页 |
| 1.4.2 MFS家族的转运机制 | 第17-18页 |
| 1.4.3 结构特点 | 第18-19页 |
| 1.4.4 医学重要性 | 第19页 |
| 1.5 本课题意义和研究目标 | 第19-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-36页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第21-28页 |
| 2.1.1 化学药品及生物试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.2 常用培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.3 缓冲液及配方 | 第23-24页 |
| 2.1.4 本课题涉及的菌种 | 第24-25页 |
| 2.1.5 本课题涉及的质粒 | 第25页 |
| 2.1.6 本课题用到的引物 | 第25-27页 |
| 2.1.7 本课题用到的抗生素 | 第27页 |
| 2.1.8 仪器和设备 | 第27页 |
| 2.1.9 Marker | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-36页 |
| 2.2.1 不同菌株的培养 | 第28页 |
| 2.2.2 菌种的保藏 | 第28-29页 |
| 2.2.3 大肠杆菌DH5α和ET12567/pUZ8002的感受态细胞制备 | 第29页 |
| 2.2.4 DNA的连接与CaCl_2转化法 | 第29页 |
| 2.2.5 大肠杆菌质粒的抽提 | 第29页 |
| 2.2.6 DNA片段胶回收 | 第29页 |
| 2.2.7 链霉菌基因组提取方法 | 第29页 |
| 2.2.8 DNA酶切体系 | 第29-30页 |
| 2.2.9 Infusion连接的克隆方法 | 第30页 |
| 2.2.10 链霉菌RNA抽提 | 第30页 |
| 2.2.11 bagJ、 bagL、bagS、bagN、 bagMN的基因敲除 | 第30-32页 |
| 2.2.12 bagJ基因的回补、过表达与异源表达 | 第32页 |
| 2.2.13 HPLC方法检测发酵产物 | 第32页 |
| 2.2.14 抑菌圈实验 | 第32-33页 |
| 2.2.15 BagJ对TK64菌丝形态的影响 | 第33页 |
| 2.2.16 BagJ在细胞膜上的定位 | 第33-36页 |
| 第三章 结果与分析 | 第36-64页 |
| 3.1 bagJ等疑似Bagremycin生物合成相关基因的生物信息学预测分析 | 第36-37页 |
| 3.1.1 与Bagremycins生物合成相关的基因 | 第36页 |
| 3.1.2 S.sp. TU4128基因组上部分基因的生物信息学功能预测 | 第36-37页 |
| 3.2 bagJ、bagL、bagS、bagN、 bagMN与Bagremycins生物合成相关性的鉴定 | 第37-48页 |
| 3.2.1 五个敲除质粒的构建 | 第38-41页 |
| 3.2.2 接合转移 | 第41-43页 |
| 3.2.3 二次重组子的筛选与鉴定 | 第43-46页 |
| 3.2.4 HPLC检测发酵产物 | 第46-48页 |
| 3.3 bagJ的生物信息学比对 | 第48-51页 |
| 3.3.1 BagJ的序列比对 | 第48-49页 |
| 3.3.2 BagJ的二级结构预测 | 第49-50页 |
| 3.3.3 BagJ的建模及系统发育分析 | 第50-51页 |
| 3.4 回补与过表达bagJ基因 | 第51-56页 |
| 3.4.1 bagJ回补质粒的构建 | 第52-53页 |
| 3.4.2 接合转移 | 第53页 |
| 3.4.3 HPLC分析发酵产物 | 第53-55页 |
| 3.4.4 bagJ过表达株中Bagremycins产量大幅度增加 | 第55-56页 |
| 3.5 bagJ为S.sp.TU4128的抗性基因 | 第56-58页 |
| 3.5.1 bagJ敲除株对Bagremycins粗提液耐受性降低 | 第56-57页 |
| 3.5.2 BagJ可以赋予TK64对Bagremycins的抗性 | 第57-58页 |
| 3.6 BagJ对其他物质转运能力的研究 | 第58-60页 |
| 3.7 BagJ定位在细胞膜上 | 第60-64页 |
| 3.7.1 BagJ对TK64菌丝形态的影响 | 第60-61页 |
| 3.7.2 Western-blotting和激光共聚焦显微镜观察验证BagJ的定位 | 第61-64页 |
| 第四章 分析与讨论 | 第64-70页 |
| 4.1 关于BagJ蛋白功能研究的总结和讨论 | 第64-66页 |
| 4.1.1 bagJ编码的蛋白为MFS家族的转运蛋白 | 第64-65页 |
| 4.1.2 BagJ与胞外抗生素含量有关 | 第65页 |
| 4.1.3 BagJ通过外排的机制行使对Bagremycins的抗性 | 第65-66页 |
| 4.1.4 BagJ为MFS家族的逆向转运蛋白 | 第66页 |
| 4.1.5 融合红色荧光蛋白检测BagJ在细胞膜上的定位 | 第66页 |
| 4.2 关于BagN、BagM蛋白功能的预测 | 第66-68页 |
| 4.2.1 BagN、BagM的生物信息学分析 | 第66-67页 |
| 4.2.2 课题组BagN、BagM的研究进展 | 第67-68页 |
| 4.2.3 Bagremycins生物合成途径的推测 | 第68页 |
| 4.3 本课题重要结论 | 第68-70页 |
| 第五章 课题展望 | 第70-71页 |
| 5.1 关于BagJ的研究 | 第70页 |
| 5.2 关于BagN和BagM功能的研究 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
