| 中文摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 引言 | 第7-9页 |
| 第1章 实验材料 | 第9-12页 |
| 1.1 主要试剂 | 第9-10页 |
| 1.2 主要仪器 | 第10页 |
| 1.3 主要试剂配制 | 第10-11页 |
| 1.4 组织来源 | 第11-12页 |
| 第2章 实验方法 | 第12-21页 |
| 2.1 人退变髓核细胞的原代培养、传代、冻存、复苏及鉴定 | 第12-15页 |
| 2.1.1 人退变髓核细胞的原代单层培养 | 第12页 |
| 2.1.2 人退变髓核细胞的消化传代 | 第12页 |
| 2.1.3 人退变髓核细胞的冻存及复苏 | 第12-13页 |
| 2.1.4 人退变髓核细胞的鉴定 | 第13-15页 |
| 2.2 MMP-3sh RNA慢病毒载体构建 | 第15-16页 |
| 2.3 MMP-3sh RNA慢病载体在人退变髓核中的筛选 | 第16-19页 |
| 2.3.1 慢病毒侵染效率评价 | 第16-17页 |
| 2.3.2 MMP-3sh RNA慢病毒载体的侵染 | 第17页 |
| 2.3.3 Real-Time PCR检测目的基因m RNA水平 | 第17-18页 |
| 2.3.4 Real-Time PCR检测MMP-3 基因不同时间点的表达 | 第18页 |
| 2.3.5 Western-Blot检测目的蛋白表达水平 | 第18-19页 |
| 2.3.6 Western-Blot检测MMP-3 蛋白不同时间点的表达水平 | 第19页 |
| 2.4 最佳干扰片段MMP-3sh RNA慢病毒载体侵染人退变髓核细胞的生物学效应 | 第19-20页 |
| 2.4.1 最佳干扰片段MMP-3sh RNA慢病毒载体侵染人退变髓核细胞 | 第19-20页 |
| 2.4.2 Real-Time PCR检测MMP-3、Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达水平 | 第20页 |
| 2.4.3 Western-Blot检测MMP-3、Ⅱ型胶原和蛋白多糖蛋白表达水平 | 第20页 |
| 2.5 统计学方法 | 第20-21页 |
| 第3章 实验结果 | 第21-36页 |
| 3.1 人退变髓核细胞培养及鉴定结果 | 第21-24页 |
| 3.1.1 人退变髓核细胞形态学观察 | 第21-22页 |
| 3.1.2 人退变髓核细胞的鉴定 | 第22-24页 |
| 3.2 MMP-3sh RNA载体构建及慢病毒包装结果 | 第24-26页 |
| 3.2.1 PCR鉴定构建的慢病毒载体结果 | 第24页 |
| 3.2.2 基因测序结果 | 第24-25页 |
| 3.2.3 病毒滴度测定 | 第25-26页 |
| 3.3 MMP-3sh RNA慢病毒载体在人退变髓核细胞中筛选结果 | 第26-31页 |
| 3.3.1 慢病毒侵染人退变髓核细胞的效率评价及MOI计算 | 第26-27页 |
| 3.3.2 重组MMP-3sh RNA慢病毒载体对人退变髓核细胞的侵染结果 | 第27-28页 |
| 3.3.3 MMP-3sh RNA转染人退变髓核细胞后MMP-3m RNA表达抑制水平 | 第28-30页 |
| 3.3.4 MMP-3sh RNA转染人退变髓核细胞后MMP-3 蛋白表达抑制水平 | 第30-31页 |
| 3.4 MMP3-sh RNA3(6076)转染人退变髓核细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖的效应 | 第31-36页 |
| 3.4.1 MMP-3m RNA和MMP-3 蛋白的干扰效果检测 | 第31-33页 |
| 3.4.2 Real-Time PCR检测Ⅱ型胶原和蛋白多糖m RNA表达情况 | 第33-34页 |
| 3.4.3 Western Blot检测Ⅱ型胶原和蛋白多糖蛋白表达 | 第34-36页 |
| 讨论 | 第36-40页 |
| 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| 综述：腰椎间盘退变基因治疗研究进展 | 第45-60页 |
| 综述参考文献 | 第55-60页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第60-61页 |
| 附录 | 第61-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
