中文摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
第1章 引言 | 第11-30页 |
1.1 抗虫基因的来源及其作用机制 | 第11-16页 |
1.1.1 Bt基因 | 第12-14页 |
1.1.2 高等植物抗虫基因 | 第14-16页 |
1.2 转Bt基因水稻研究进展 | 第16-19页 |
1.2.1 转基因作物研究概况 | 第16-18页 |
1.2.2 转Bt基因水稻培育 | 第18-19页 |
1.3 转Bt基因作物抗性产生管理策略 | 第19-22页 |
1.3.1 低剂量接合生物天敌策略 | 第19页 |
1.3.2 转基因植物Bt毒素的组织或时空特异性表达 | 第19-20页 |
1.3.3 基因聚合策略 | 第20-21页 |
1.3.4 高剂量-庇护所策略 | 第21-22页 |
1.4 转基因检测技术研究进展 | 第22-26页 |
1.4.1 PCR检测技术 | 第22-25页 |
1.4.2 蛋白质检测方法 | 第25-26页 |
1.5 转基因植物T-DNA插入位点侧翼序列扩增方法 | 第26-28页 |
1.5.1 反向PCR | 第26-27页 |
1.5.2 质粒拯救 | 第27页 |
1.5.3 PCR步移 | 第27-28页 |
1.5.4 热不对称交错PCR | 第28页 |
1.6 研究目的与意义 | 第28-30页 |
第2章 材料与方法 | 第30-45页 |
2.1 实验材料 | 第30-32页 |
2.1.1 供试植物材料 | 第30-31页 |
2.1.2 植物表达载体 | 第31页 |
2.1.3 实验昆虫 | 第31-32页 |
2.1.4 实验试剂 | 第32页 |
2.1.5 实验仪器 | 第32页 |
2.2 实验方法 | 第32-45页 |
2.2.1 Basta抗感性筛选 | 第32-33页 |
2.2.2 PCR检测 | 第33-34页 |
2.2.3 实时荧光定量PCR检测 | 第34-35页 |
2.2.4 水稻Bt蛋白测定 | 第35-38页 |
2.2.5 Southern blot检测 | 第38-42页 |
2.2.6 室内抗虫性鉴定 | 第42-43页 |
2.2.7 外源基因插入位点分析 | 第43-45页 |
第3章 结果与分析 | 第45-59页 |
3.1 转cry2A*/cry1C*基因水稻筛选 | 第45-47页 |
3.1.1 Basta抗感性检测 | 第45页 |
3.1.2 胶体金免疫层析及PCR检测 | 第45-47页 |
3.2 转cry2A*/cry1C*水稻目的基因表达量 | 第47-55页 |
3.2.1 mRNA表达量测定 | 第47-51页 |
3.2.2 Bt蛋白表达量测定 | 第51-55页 |
3.3 转cry2A*/cry1C*水稻目的基因拷贝数 | 第55-56页 |
3.4 转cry2A*/cry1C*基因水稻室内抗虫性鉴定 | 第56-57页 |
3.5 cry2A*基因插入位点 | 第57-59页 |
第4章 讨论 | 第59-62页 |
4.1 目的基因的筛选 | 第59页 |
4.2 Bt蛋白与水稻抗虫性分析 | 第59-60页 |
4.3 寒区超级早粳稻的培育 | 第60-62页 |
第5章 结论 | 第62-63页 |
参考文献 | 第63-76页 |
附录 | 第76-81页 |
附录1 碱法小量制备质粒DNA | 第76页 |
附录2 CTAB大量法提取DNA | 第76-77页 |
附录3 质粒提取相关试剂配方 | 第77-78页 |
附录4 水稻DNA提取相关试剂配方 | 第78-79页 |
附录5 Southern blot相关试剂配方 | 第79-80页 |
附录6 Bt蛋白相关试剂配方 | 第80页 |
附录7 其他相关试剂配方 | 第80-81页 |
致谢 | 第81页 |