| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 外文缩略表 | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 猪细小病毒研究进展 | 第11-21页 |
| 1 流行病学 | 第11页 |
| 2 临床症状及病理变化 | 第11-12页 |
| 3 致病机理 | 第12-14页 |
| 4 基因组结构与特征 | 第14-15页 |
| 5 编码蛋白 | 第15-16页 |
| 5.1 非结构蛋白 | 第15页 |
| 5.2 结构蛋白 | 第15-16页 |
| 5.2.1 VP1蛋白 | 第15页 |
| 5.2.2 VP2蛋白 | 第15-16页 |
| 5.2.3 VP3蛋白 | 第16页 |
| 6 疫苗 | 第16-17页 |
| 7 常用实验室检测方法 | 第17-18页 |
| 7.1 分子生物学检测方法 | 第17页 |
| 7.2 血清学检测方法 | 第17-18页 |
| 8 猪细小病毒家族分类 | 第18-21页 |
| 8.1 PPV1 | 第18页 |
| 8.2 PPV2 | 第18-19页 |
| 8.3 PPV3 | 第19页 |
| 8.4 PPV4 | 第19页 |
| 8.5 PPV5 | 第19-20页 |
| 8.6 PPV6 | 第20页 |
| 8.7 PPV7 | 第20-21页 |
| 第二章 猪细小病毒1型VP2蛋白的原核表达、Ni-NTA纯化及鉴定 | 第21-41页 |
| 1 试验材料 | 第21-23页 |
| 1.1 病毒、质粒、菌株及细胞 | 第21页 |
| 1.2 酶和主要试剂 | 第21页 |
| 1.3 试验主要试剂配置 | 第21-23页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第23页 |
| 2 试验方法 | 第23-30页 |
| 2.1 pMD18-T-PPV1-VP2重组载体的构建及鉴定 | 第23-25页 |
| 2.1.1 引物设计及合成 | 第23-24页 |
| 2.1.2 病毒培养及DNA提取 | 第24页 |
| 2.1.3 PPV1 VP2基因的PCR扩增 | 第24-25页 |
| 2.1.4 pMD18-T-PPV1-VP2克隆载体的构建与转化 | 第25页 |
| 2.1.5 pMD18-T-PPV1-VP2重组质粒的鉴定 | 第25页 |
| 2.2 pET30a-PPV1-VP2原核表达载体的构建及鉴定 | 第25-27页 |
| 2.2.1 引物设计及合成 | 第25-26页 |
| 2.2.2 PPV1 VP2基因的PCR扩增 | 第26页 |
| 2.2.3 pET30a-PPV1-VP2重组质粒的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.4 pET30a-PPV1-VP2重组质粒的鉴定 | 第27页 |
| 2.3 pET30a-PPV1-VP2的诱导表达，纯化及Western blot鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3.1 重组VP2蛋白表达条件的优化，可溶性分析 | 第27-28页 |
| 2.3.2 重组VP2蛋白的表达 | 第28页 |
| 2.4 重组VP2蛋白的Ni-NTA亲和层析纯化，复性及反应原性分析 | 第28-30页 |
| 2.4.1 重组VP2蛋白的Ni-NTA亲和层析纯化 | 第28-29页 |
| 2.4.2 重组VP2蛋白的复性 | 第29页 |
| 2.4.3 重组VP2蛋白的反应原性分析 | 第29-30页 |
| 3 试验结果 | 第30-39页 |
| 3.1 PK-15 细胞培养、接毒 | 第30页 |
| 3.2 PPV1 VP2基因的扩增及pMD18-T-PPV1-VP2重组质粒的鉴定 | 第30-31页 |
| 3.3 PPV1 VP2基因的PCR扩增 | 第31-32页 |
| 3.4 pET30a-PPV1-VP2重组质粒的鉴定 | 第32-33页 |
| 3.5 重组VP2蛋白的表达 | 第33-37页 |
| 3.6 重组VP2蛋白的Ni-NTA亲和层析纯化 | 第37-38页 |
| 3.7 重组VP2蛋白的Western blot鉴定 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 抗PPV1 VP2蛋白的多克隆抗体的制备、鉴定及纯化 | 第41-50页 |
| 1 试验材料 | 第41-42页 |
| 1.1 试验动物 | 第41页 |
| 1.2 主要试剂 | 第41页 |
| 1.3 试验主要试剂配置 | 第41-42页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第42页 |
| 2 试验方法 | 第42-44页 |
| 2.1 多克隆抗体的制备 | 第42页 |
| 2.2 多克隆抗体的反应原性检测 | 第42-43页 |
| 2.3 多克隆抗体效价的检测 | 第43页 |
| 2.4 多克隆抗体的纯化 | 第43-44页 |
| 2.4.1 多克隆抗体的硫酸铵沉淀纯化 | 第43-44页 |
| 2.4.2 多克隆抗体的Protein A亲和层析纯化 | 第44页 |
| 3 试验结果 | 第44-49页 |
| 3.1 多克隆抗体的反应原性检测结果 | 第44-45页 |
| 3.2 多克隆抗体效价的检测结果 | 第45-47页 |
| 3.3 多克隆抗体的硫酸铵沉淀纯化结果 | 第47-48页 |
| 3.4 多克隆抗体的Protein A亲和层析纯化结果 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-50页 |
| 第四章 PPV1间接ELISA检测方法建立 | 第50-61页 |
| 1 试验材料 | 第50-51页 |
| 1.1 抗原与血清 | 第50页 |
| 1.2 主要试剂及试剂盒 | 第50页 |
| 1.3 试验主要试剂的配置 | 第50-51页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第51页 |
| 2 试验方法 | 第51-53页 |
| 2.1 PPV1间接ELISA方法的操作流程 | 第51页 |
| 2.2 抗原最佳包被浓度，血清最佳稀释度和二抗最佳稀释度的确定 | 第51-52页 |
| 2.3 阴、阳性临界值的确定 | 第52页 |
| 2.4 检测方法的重复性分析 | 第52页 |
| 2.5 检测方法的分析敏感性分析 | 第52-53页 |
| 2.6 检测方法的分析特异性分析 | 第53页 |
| 2.7 检测方法的临床敏感性分析 | 第53页 |
| 2.8 检测方法的临床特异性分析 | 第53页 |
| 3 试验结果 | 第53-59页 |
| 3.1 抗原最佳包被浓度，血清最佳稀释度和二抗最佳稀释度的确定结果 | 第53-55页 |
| 3.2 Cut off值的确定结果 | 第55-56页 |
| 3.3 检测方法的重复性分析结果 | 第56页 |
| 3.4 检测方法的分析敏感性分析结果 | 第56-57页 |
| 3.5 检测方法的分析特异性分析结果 | 第57页 |
| 3.6 检测方法的临床敏感性分析结果 | 第57-58页 |
| 3.7 检测方法的临床特异性分析结果 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 全文结论 | 第61-62页 |
| 附录一 | 第62-63页 |
| 附录二 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71-72页 |
| 导师简介 | 第72-73页 |
