| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第1章 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 海藻糖的研究现状概述 | 第11-14页 |
| 1.1.1 海藻糖的性质和功能 | 第11页 |
| 1.1.2 海藻糖的应用 | 第11-13页 |
| 1.1.3 海藻糖的生产制备 | 第13-14页 |
| 1.2 海藻糖合酶研究现状 | 第14-15页 |
| 1.2.1 海藻糖合酶的来源 | 第14-15页 |
| 1.3 海藻糖合酶结构的研究 | 第15-18页 |
| 1.3.1 海藻糖合酶的结构特点 | 第15-17页 |
| 1.3.2 海藻糖合酶催化机制研究 | 第17-18页 |
| 1.4 海藻糖合酶分子改造研究 | 第18-19页 |
| 1.5 研究意义 | 第19-21页 |
| 第2章 海藻糖合酶的异源表达及纯化 | 第21-33页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料和仪器 | 第21-24页 |
| 2.2.1 菌株及载体 | 第21页 |
| 2.2.2 主要仪器和设备 | 第21-22页 |
| 2.2.4 试剂配制方法 | 第22-24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-27页 |
| 2.3.1 PCR扩增海藻糖合酶基因 | 第24页 |
| 2.3.2 海藻糖合酶基因和pGlO1载体的酶切与连接 | 第24-25页 |
| 2.3.3 海藻糖合酶重组子的转化与阳性验证 | 第25-26页 |
| 2.3.4 海藻糖合酶蛋白的表达与纯化 | 第26-27页 |
| 2.4 结果与分析 | 第27-30页 |
| 2.4.1 海藻糖合酶基因的获取 | 第27-28页 |
| 2.4.2 海藻糖合酶的Ni-NTA亲和层析柱纯化 | 第28-29页 |
| 2.4.3 海藻糖合酶的阴离子交换柱纯化 | 第29-30页 |
| 2.4.4 海藻糖合酶的分子筛纯化 | 第30页 |
| 2.5 本章小结 | 第30-33页 |
| 第3章 海藻糖合酶酶学性质的研究 | 第33-43页 |
| 3.1 引言 | 第33页 |
| 3.2 实验材料 | 第33-34页 |
| 3.2.1 缓冲液配制 | 第33页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第33-34页 |
| 3.3 仪器和设备 | 第34-35页 |
| 3.4 方法 | 第35-37页 |
| 3.4.1 海藻糖合酶活测定方法 | 第35页 |
| 3.4.2 海藻糖合酶反应时间测定 | 第35页 |
| 3.4.3 温度对海藻糖合酶的活性及稳定性的影响 | 第35-36页 |
| 3.4.4 pH对海藻糖合酶的活性及稳定性影响 | 第36页 |
| 3.4.5 金属离子及抑制剂对酶活性的影响 | 第36页 |
| 3.4.6 海藻糖合酶的动力学特性测定 | 第36-37页 |
| 3.5 结果与分析 | 第37-41页 |
| 3.5.1 海藻糖合酶活性的测定 | 第37-38页 |
| 3.5.2 反应时间对海藻糖合酶转化率的影响 | 第38页 |
| 3.5.3 温度对海藻糖合酶稳定性及活性的影响 | 第38-39页 |
| 3.5.4 pH对海藻糖合酶稳定性及活性的影响 | 第39页 |
| 3.5.5 金属离子及抑制剂对海藻糖合酶活性的影响 | 第39-40页 |
| 3.5.6 海藻糖合酶动力学参数 | 第40-41页 |
| 3.6 本章小结 | 第41-43页 |
| 第4章 海藻糖合酶的结构分析以及活性改造 | 第43-63页 |
| 4.1 引言 | 第43页 |
| 4.2 材料与设备 | 第43-45页 |
| 4.2.1 菌种与载体 | 第43页 |
| 4.2.2 仪器和设备 | 第43-44页 |
| 4.2.3 化学试剂及药品 | 第44-45页 |
| 4.4 方法 | 第45-51页 |
| 4.4.1 蛋白晶体的培养 | 第45页 |
| 4.4.2 蛋白质晶体衍射及数据收集 | 第45-46页 |
| 4.4.3 硒代蛋白的表达 | 第46页 |
| 4.4.4 海藻糖合酶同源建模及分子对接模拟 | 第46-47页 |
| 4.4.5 海藻糖合酶突变体的构建 | 第47-50页 |
| 4.4.6 海藻糖合酶突变体蛋白的提纯和酶活性测定 | 第50-51页 |
| 4.5 结果与分析 | 第51-61页 |
| 4.5.1 海藻糖合酶TreS的晶体 | 第51-52页 |
| 4.5.2 海藻糖合酶晶体衍射数据 | 第52-53页 |
| 4.5.3 硒代蛋白的表达及其提纯 | 第53-55页 |
| 4.5.4 海藻糖合酶同源建模 | 第55-57页 |
| 4.5.5 海藻糖合酶的分子对接模拟及结构分析 | 第57-59页 |
| 4.5.6 海藻糖合酶结构的改造 | 第59-61页 |
| 4.6 本章小结 | 第61-63页 |
| 第5章 结论与展望 | 第63-65页 |
| 5.1 结论 | 第63页 |
| 5.2 展望 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
| 在学期间主要科研成果 | 第73页 |
