| 致谢 | 第5-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第13-22页 |
| 第一章 绪论 | 第22-58页 |
| 1.1 癌症的基因治疗 | 第22-23页 |
| 1.2 基因输送技术 | 第23-30页 |
| 1.2.1 物理输送 | 第23-24页 |
| 1.2.2 病毒载体 | 第24-25页 |
| 1.2.3 非病毒载体 | 第25-30页 |
| 1.3 细胞水平上非病毒载体的基因输送屏障 | 第30-40页 |
| 1.3.1 细胞内吞 | 第32-36页 |
| 1.3.2 内含/溶酶体逃逸 | 第36-38页 |
| 1.3.3 进入细胞核 | 第38-40页 |
| 1.3.4 纳米复合物解离 | 第40页 |
| 1.4 刺激响应型基因输送体系 | 第40-50页 |
| 1.4.1 酯酶响应 | 第41-42页 |
| 1.4.2 酸响应 | 第42-43页 |
| 1.4.3 ATP响应 | 第43-44页 |
| 1.4.4 GSH还原响应 | 第44-46页 |
| 1.4.5 光响应 | 第46-47页 |
| 1.4.6 氧化响应 | 第47-50页 |
| 1.5 基于硼酸/酯的氧化响应及应用 | 第50-53页 |
| 1.6 课题的提出和研究内容 | 第53-58页 |
| 1.6.1 蛋白吸附决定PEI纳米复合物的理化特性及基因输送 | 第53-55页 |
| 1.6.2 PEI复合物在整体和单细胞水平上的基因表达 | 第55页 |
| 1.6.3 ROS响应降解去电荷型硫鎓聚合物的合成制备及肿瘤基因输送中的应用 | 第55-58页 |
| 第二章 蛋白吸附决定PEI纳米复合物的理化特性及基因输送 | 第58-105页 |
| 2.1 引言 | 第58-59页 |
| 2.2 实验材料和仪器 | 第59-62页 |
| 2.2.1 实验药品及试剂 | 第59-61页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第61页 |
| 2.2.3 细胞系 | 第61页 |
| 2.2.4 工作溶液 | 第61-62页 |
| 2.3 实验方法 | 第62-75页 |
| 2.3.1 纳米复合物的制备 | 第62页 |
| 2.3.2 纳米复合物的粒径分布和表面电荷测定 | 第62-63页 |
| 2.3.3 纳米复合物形态观察 | 第63页 |
| 2.3.4 纳米复合物的凝胶阻滞电泳实验 | 第63页 |
| 2.3.5 溴化乙锭(ethidium bromide,EB)排阻实验 | 第63-64页 |
| 2.3.6 纳米复合物的细胞毒性 | 第64页 |
| 2.3.7 氯离子响应型荧光染料MEQ-OSu的制备 | 第64-66页 |
| 2.3.8 PEI-MEQ的合成与制备 | 第66页 |
| 2.3.9 纳米复合物的体外细胞转染 | 第66-67页 |
| 2.3.10 PEI包被的纳米金制备 | 第67页 |
| 2.3.11 纳米金标记DNA | 第67页 |
| 2.3.12 细胞TEM | 第67-68页 |
| 2.3.13 DNA和PEI的标记 | 第68-69页 |
| 2.3.14 细胞内吞抑制剂对纳米复合物细胞摄取的影响 | 第69页 |
| 2.3.15 氯喹对1/1/40荧光素酶转染效率的影响 | 第69-70页 |
| 2.3.16 制备FITC标记的BSA纳米颗粒 | 第70页 |
| 2.3.17 激光共聚焦显微镜成像 | 第70-71页 |
| 2.3.18 Mander系数计算 | 第71页 |
| 2.3.19 纳米复合物在细胞内所处环境的pH值 | 第71-72页 |
| 2.3.20 纳米复合物的溶血能力 | 第72-73页 |
| 2.3.21 peGFP和纳米复合物的微注射 | 第73页 |
| 2.3.22 多纳米颗粒追踪(multiple particle tracking,MPT)分析 | 第73-75页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第75-103页 |
| 2.4.1 蛋白吸附对纳米复合物粒径和表面电荷的影响 | 第75-76页 |
| 2.4.2 复合物的形貌 | 第76-77页 |
| 2.4.3 盐离子和蛋白对复合物粒径的影响 | 第77-78页 |
| 2.4.4 盐离子和蛋白对复合物稳定性的影响 | 第78-79页 |
| 2.4.5 盐离子对复合物的渗透性 | 第79-82页 |
| 2.4.6 复合物的细胞毒性 | 第82-83页 |
| 2.4.7 体外荧光素酶和绿色荧光素酶的表达转染 | 第83-86页 |
| 2.4.8 细胞内吞速率对转染效率的影响 | 第86页 |
| 2.4.9 细胞内吞途径对转染效率的影响 | 第86-88页 |
| 2.4.10 细胞内膜滞留现象 | 第88-92页 |
| 2.4.11 多颗粒追踪(multiple particle tracking,MPT)检测复合物在细胞中的运动 | 第92-95页 |
| 2.4.12 内含/溶酶体通路 | 第95-99页 |
| 2.4.13 复合物的囊泡逃逸 | 第99-101页 |
| 2.4.14 通过微注射实现囊泡逃逸对转染的影响 | 第101-103页 |
| 2.5 本章小结 | 第103-105页 |
| 第三章 PEI复合物在整体和单细胞水平上的基因表达 | 第105-131页 |
| 3.1 引言 | 第105-106页 |
| 3.2 实验材料和仪器 | 第106-108页 |
| 3.2.1 实验药品及试剂 | 第106-107页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第107页 |
| 3.2.3 细胞系 | 第107页 |
| 3.2.4 工作溶液 | 第107-108页 |
| 3.3 实验方法 | 第108-112页 |
| 3.3.1 纳米复合物的体外转染 | 第108-109页 |
| 3.3.2 激光共聚焦显微镜成像 | 第109-110页 |
| 3.3.3 由活细胞的时间推移图像分析eGFP表达动力学 | 第110页 |
| 3.3.4 通过RT-qPCR检测细胞内mRNA含量 | 第110页 |
| 3.3.5 细胞倍增时间检测 | 第110-111页 |
| 3.3.6 DNA入核及纳米复合物解离的定量计算 | 第111-112页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第112-129页 |
| 3.4.1 孵育时间相关的荧光素酶表达和复合物内吞 | 第112-113页 |
| 3.4.2 转染时间相关的荧光素酶表达与mRNA转录 | 第113-114页 |
| 3.4.3 DNA总量和浓度对转染的影响 | 第114-116页 |
| 3.4.4 peGFP和pRFP共表达实验 | 第116-118页 |
| 3.4.5 单细胞水平上eGFP的实时表达 | 第118-125页 |
| 3.4.6 复合物的解离与入核 | 第125-129页 |
| 3.5 本章小结 | 第129-131页 |
| 第四章 ROS响应型硫鎓聚合物的合成与表征 | 第131-159页 |
| 4.1 引言 | 第131-132页 |
| 4.2 实验材料和仪器 | 第132-133页 |
| 4.2.1 实验药品及试剂 | 第132-133页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第133页 |
| 4.3 实验方法 | 第133-139页 |
| 4.3.1 合成路线1:硫醚聚合物与4-溴甲基苯硼酸反应 | 第133-135页 |
| 4.3.2 合成路线2:含硼酸/酯结构的硫醚聚合物甲基化反应 | 第135-139页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第139-158页 |
| 4.4.1 合成路线1:硫醚聚合物与4-溴甲基苯硼酸反应 | 第139-144页 |
| 4.4.2 合成路线2:含硼酸/酯结构的硫醚聚合物甲基化反应 | 第144-157页 |
| 4.4.3 2,6-二羟甲基苯酚的合成 | 第157-158页 |
| 4.5 本章小结 | 第158-159页 |
| 第五章 ROS响应降解去电荷型硫鎓聚合物用于基因输送 | 第159-203页 |
| 5.1 引言 | 第159页 |
| 5.2 实验材料和仪器 | 第159-162页 |
| 5.2.1 实验药品及试剂 | 第159-160页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第160-161页 |
| 5.2.3 细胞系及实验动物 | 第161-162页 |
| 5.2.4 工作溶液 | 第162页 |
| 5.3 实验方法 | 第162-171页 |
| 5.3.1 质粒的扩增与提取 | 第162-163页 |
| 5.3.2 纳米复合物的制备 | 第163页 |
| 5.3.3 纳米复合物的粒径分布和表面电荷测定 | 第163-164页 |
| 5.3.4 硫鎓聚合物的氧化响应及纳米复合物的解体 | 第164页 |
| 5.3.5 透射电镜观测纳米复合物形态 | 第164页 |
| 5.3.6 纳米复合物的凝胶阻滞电泳实验 | 第164页 |
| 5.3.7 细胞毒性实验 | 第164-165页 |
| 5.3.8 纳米复合物的体外细胞转染 | 第165-166页 |
| 5.3.9 2',7'-二氯二氢荧光素乙酸乙酯(H_2DCFDA)检测HeLa细胞内ROS浓度 | 第166-167页 |
| 5.3.10 细胞内吞抑制剂对纳米复合物细胞摄取的影响 | 第167页 |
| 5.3.11 Mander系数计算 | 第167-168页 |
| 5.3.12 吖啶橙荧光定量分析 | 第168页 |
| 5.3.13 激光共聚焦显微镜观测细胞晚期凋亡实验 | 第168页 |
| 5.3.14 腹腔移植瘤体内转染实验 | 第168-171页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第171-202页 |
| 5.4.1 硫鎓聚合物的ROS响应 | 第171-173页 |
| 5.4.2 纳米复合物的凝胶阻滞电泳实验 | 第173-174页 |
| 5.4.3 纳米复合物的粒径和表面电荷 | 第174-175页 |
| 5.4.4 透射电镜(TEM)观测纳米复合物的形貌 | 第175页 |
| 5.4.5 纳米复合物粒径和表面电荷的ROS响应 | 第175-176页 |
| 5.4.6 纳米复合物的细胞毒性 | 第176-177页 |
| 5.4.7 纳米复合物的细胞转染 | 第177-181页 |
| 5.4.8 ROS依赖的细胞转染 | 第181-183页 |
| 5.4.9 细胞内吞途径研究 | 第183-184页 |
| 5.4.10 纳米复合物与溶酶体的重合 | 第184-188页 |
| 5.4.11 内含/溶酶体逃逸 | 第188-189页 |
| 5.4.12 纳米复合物在细胞内ROS响应后的解离 | 第189-195页 |
| 5.4.13 输送治疗基因诱导体外癌细胞凋亡 | 第195-197页 |
| 5.4.14 腹腔瘤模型的转染实验 | 第197页 |
| 5.4.15 腹腔移植瘤的抑瘤实验 | 第197-202页 |
| 5.5 本章小结 | 第202-203页 |
| 第六章 结论和展望 | 第203-207页 |
| 6.1 论文小结 | 第203-204页 |
| 6.2 研究展望 | 第204-207页 |
| 参考文献 | 第207-231页 |
| 作者简历及在校期间所取得的科研成果 | 第231-232页 |
