| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-22页 |
| 1.1 CpG ODN研究背景 | 第12-13页 |
| 1.2 CpG ODN结构及功能特点 | 第13-15页 |
| 1.3 CpG对免疫细胞促进作用及影响因素 | 第15-18页 |
| 1.3.1 非特异性免疫细胞 | 第15-16页 |
| 1.3.2 刺激特异性免疫应答细胞 | 第16-17页 |
| 1.3.3 CpG ODN对肿瘤细胞增殖的抑制作用 | 第17-18页 |
| 1.4 CpG ODN对疫苗免疫增强作用的研究 | 第18-19页 |
| 1.5 CpG ODN的修饰及其副作用 | 第19-20页 |
| 1.6 鸭源新城疫研究进展 | 第20-21页 |
| 1.7 CpG ODN对ND疫苗免疫增强作用研究现状 | 第21-22页 |
| 2 材料和方法 | 第22-29页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1CEF增殖及CEF免疫增强作用实验所用试剂 | 第22页 |
| 2.1.2 提取RNA及反转录所用试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 CpG ODN对ND SD03毒株免疫增强作用所用试剂 | 第22页 |
| 2.1.4 抗体及外周血淋巴细胞细胞因子检测 | 第22-23页 |
| 2.1.5 CpG ODN序列 | 第23页 |
| 2.1.6 仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-29页 |
| 2.2.1 利用CEF体外筛选理想的CpG ODN序列 | 第24-26页 |
| 2.2.1.1 MTT法检测CEF增殖反应 | 第24-25页 |
| 2.2.1.1.1 制备鸡胚成纤维细胞 | 第24页 |
| 2.2.1.1.2 CEF铺96孔板 | 第24页 |
| 2.2.1.1.3 MTT法染色测定OD值 | 第24-25页 |
| 2.2.1.1.4 计算刺激指数 | 第25页 |
| 2.2.1.2 相对定量法测相关免疫基因m RNA | 第25-26页 |
| 2.2.1.2.1 Trizol法提取RNA | 第25页 |
| 2.2.1.2.2 相对荧光定量 | 第25-26页 |
| 2.2.2 浓度梯度与时间梯度差异反映CpG ODNs功能差异 | 第26-27页 |
| 2.2.2.1 CEF制备 | 第26页 |
| 2.2.2.2 ODN浓度梯度对细胞因子表达量的影响 | 第26-27页 |
| 2.2.2.3 ODN刺激时间对细胞因子表达量的影响 | 第27页 |
| 2.2.2.4 相对荧光定量方法检测细胞因子 | 第27页 |
| 2.2.2.5 数据处理 | 第27页 |
| 2.2.3 CpG增强NDV（鸭源SD03毒株）灭活苗免疫效力 | 第27-29页 |
| 2.2.3.1 实验用鸡 | 第27页 |
| 2.2.3.2 病毒 | 第27-28页 |
| 2.2.3.2.1 扩毒 | 第27页 |
| 2.2.3.2.2EID50的测定 | 第27页 |
| 2.2.3.2.3 病毒灭活效果检测 | 第27-28页 |
| 2.2.3.3 CpG ODN佐剂 | 第28页 |
| 2.2.3.4 疫苗制备 | 第28页 |
| 2.2.3.5 抗体效价检测 | 第28-29页 |
| 2.2.3.5.1 翅静脉采血 | 第28-29页 |
| 2.2.3.5.2 四单位抗原的制备 | 第29页 |
| 2.2.3.5.3 回归实验验证四单位病毒准确性 | 第29页 |
| 2.2.3.6 活毒攻毒试验 | 第29页 |
| 3 结果 | 第29-44页 |
| 3.1 利用CEF体外筛选理想的CpG ODN序列 | 第29-33页 |
| 3.1.1 CpGODN对CEF刺激指数 | 第29页 |
| 3.1.2 不同CpG ODN对相关免疫基因m RNA表达量的影响 | 第29-33页 |
| 3.1.3 CpG ODN体外筛选结果 | 第33页 |
| 3.2 CpG ODN浓度及刺激时间对免疫相关因子表达量的影响 | 第33-39页 |
| 3.2.1 CpG ODN浓度梯度对免疫相关因子表达量影响 | 第33-36页 |
| 3.2.2 CpG ODN刺激时间对免疫相关因子表达量影响 | 第36-39页 |
| 3.3 CpG ODN对鸭源ND SD03毒株灭活苗免疫增强作用 | 第39-44页 |
| 3.3.1 EID50的测定 | 第39-40页 |
| 3.3.2 体内实验检测细胞因子 | 第40-43页 |
| 3.3.3 HI实验检测抗体效价 | 第43页 |
| 3.3.4 不同免疫鸡只攻毒后健康状况检测 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-53页 |
| 4.1 CEF与淋巴细胞免疫反应及对CpG ODN毒性耐受性比较 | 第45-46页 |
| 4.1.1 CEF与淋巴细胞免疫反应的比较 | 第45页 |
| 4.1.2 CEF细胞毒性耐受性高于淋巴细胞 | 第45-46页 |
| 4.2 利用CEF筛选CpG ODN | 第46-48页 |
| 4.2.1 CEF增殖效果对CpG ODN结构的体现 | 第46-47页 |
| 4.2.2 细胞因子的表达量变化对CpG ODN结构的体现 | 第47-48页 |
| 4.3 浓度及刺激时间差异反映CpG ODN功能差异 | 第48-51页 |
| 4.3.1 浓度梯度反应CpG结构差异 | 第48-49页 |
| 4.3.2 时间梯度反映CpG功能差异 | 第49-51页 |
| 4.4 CpG ODN对ND SD03毒株灭活苗免疫增强作用 | 第51-53页 |
| 4.4.1 CpG ODN与ND SD03灭活苗联合应用提高细胞因子水平 | 第51-52页 |
| 4.4.2 CpG ODN提高血清NDV抗体效价 | 第52页 |
| 4.4.3 CpG ODN实验组对NDV SD03有良好抵抗力 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第61页 |
