| 符号说明 | 第5-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1. 引言 | 第14-19页 |
| 1.1 猪呼吸道疾病综合征研究进展 | 第14-15页 |
| 1.1.1 PRDC发病原因 | 第14页 |
| 1.1.2 PRDC发病特点 | 第14-15页 |
| 1.1.3 PRDC诱发症状 | 第15页 |
| 1.1.4 PRDC防制建议 | 第15页 |
| 1.2 TREM研究进展 | 第15-19页 |
| 1.2.1 TREM2基因定位及分子结构 | 第16-17页 |
| 1.2.2 TREM2的信号通路 | 第17页 |
| 1.2.3 TREM2对炎症反应的调控作用 | 第17-18页 |
| 1.2.4 TREM2与其他疾病 | 第18-19页 |
| 1.3 本研究的内容、目的与意义 | 第19页 |
| 2. 材料及方法 | 第19-36页 |
| 2.1 猪TERM2基因的基因克隆与序列的生物信息学分析 | 第19-21页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 试验中所需的溶液及配置方法 | 第19-20页 |
| 2.1.4 猪TREM2扩增引物设计 | 第20页 |
| 2.1.5 猪TREM2基因克隆 | 第20-21页 |
| 2.1.6 猪TREM2序列及序列的生物信息学分析 | 第21页 |
| 2.2 猪TREM2原核表达载体的构建、表达及纯化 | 第21-29页 |
| 2.2.1 载体及菌株 | 第21页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第22页 |
| 2.2.4 试验中所需的试剂及配置方法 | 第22-23页 |
| 2.2.5 猪TREM2原核表达引物的设计 | 第23-24页 |
| 2.2.6 猪TREM2胞外区基因克隆 | 第24-25页 |
| 2.2.7 猪TREM2胞外区原核表达载体的构建 | 第25-27页 |
| 2.2.8 重组菌株的培养 | 第27页 |
| 2.2.9 IPTG诱导重组菌表达 | 第27页 |
| 2.2.10 SDS-PAGE | 第27页 |
| 2.2.11 诱导表达条件的优化 | 第27页 |
| 2.2.12 表达的重组蛋白的可溶性检测 | 第27-28页 |
| 2.2.13 重组蛋白的纯化及鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3 多克隆抗体的制备及应用 | 第29-36页 |
| 2.3.1 试验菌株、载体、动物及细胞 | 第29页 |
| 2.3.2 试验中所需的仪器主要仪器 | 第29页 |
| 2.3.3 试验所需试剂及溶液的配置方法 | 第29-31页 |
| 2.3.4 多克隆抗体的制备 | 第31-32页 |
| 2.3.5 真核表达质粒的构建 | 第32-34页 |
| 2.3.6 真核重组质粒的大提 | 第34页 |
| 2.3.7 CHO细胞的培养 | 第34-35页 |
| 2.3.8 CHO细胞的转染 | 第35页 |
| 2.3.9 转染样品蛋白的处理 | 第35-36页 |
| 2.3.10 Western-Blot | 第36页 |
| 3. 结果与分析 | 第36-47页 |
| 3.1 目的基因的克隆及序列的生物信息学分析 | 第36-41页 |
| 3.1.1 基因克隆 | 第36-37页 |
| 3.1.2 测序结果 | 第37-38页 |
| 3.1.3 序列的生物信息学分析 | 第38-41页 |
| 3.2 原核表达载体的构建、表达及纯化 | 第41-44页 |
| 3.2.1 猪TREM2分子胞外区克隆 | 第41页 |
| 3.2.2 原核重组表达质粒的双酶切鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2.3 初步表达时间优化 | 第42页 |
| 3.2.4 IPTG浓度 | 第42-43页 |
| 3.2.5 表达蛋白的可溶性检测 | 第43页 |
| 3.2.6 蛋白纯化 | 第43-44页 |
| 3.2.7 Western-Blot | 第44页 |
| 3.3 多克隆抗体的制备及检测 | 第44-47页 |
| 3.3.1 真核重组质粒的双酶切鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3.2 真核表达质粒的Western-Blot结果 | 第45页 |
| 3.3.3 猪肺泡巨噬细胞的Weatern-Blot结果 | 第45-47页 |
| 4. 讨论 | 第47-49页 |
| 5. 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 个人简介 | 第55-56页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第56页 |
