| 缩写词 | 第12-13页 |
| 摘要 | 第13-19页 |
| ABSTRACT | 第19-26页 |
| 第一章 引言 | 第27-41页 |
| 1 霍山石斛及其应用与研究 | 第27-28页 |
| 1.1 霍山石斛的生物学特性 | 第27-28页 |
| 1.2 霍山石斛的应用价值及开发利用 | 第28页 |
| 1.3 霍山石斛的开发瓶颈及研究 | 第28页 |
| 2 霍山石斛组织培养研究进展 | 第28-31页 |
| 2.1 霍山石斛离体培养研究现状 | 第28-30页 |
| 2.1.1 组织培养条件的优化 | 第29页 |
| 2.1.2 组织培养方式的优化 | 第29-30页 |
| 2.1.3 组织培养代谢物的研究 | 第30页 |
| 2.2 石斛植物离体培养过程中存在的问题 | 第30-31页 |
| 3 霍山石斛植物生物钟研究进展 | 第31-33页 |
| 3.1 植物生物钟的研究现状 | 第31-32页 |
| 3.2 生物钟对植物代谢产物积累的影响 | 第32-33页 |
| 4 霍山石斛属多糖研究进展 | 第33-34页 |
| 4.1 石斛属植物多糖的药理作用 | 第33页 |
| 4.2 石斛属植物多糖的结构 | 第33页 |
| 4.3 石斛属植物多糖的研究 | 第33-34页 |
| 5 植物MYB转录因子家族的研究进展 | 第34-36页 |
| 5.1 植物中MYB转录因子的研究现状 | 第34-35页 |
| 5.2 植物CCA1基因研究进展 | 第35-36页 |
| 5.3 植物MYB1R1基因的研究 | 第36页 |
| 6 原位基因表达和多糖含量的技术研究进展 | 第36-37页 |
| 6.1 细胞组织器官的原位分子生物学研究技术 | 第37页 |
| 6.2 基因表达和多糖含量的严格对应关系 | 第37页 |
| 7 生长缓慢植物种类的取材瓶颈问题 | 第37-39页 |
| 7.1 原球茎途径 | 第37-38页 |
| 7.2 不同培养方式 | 第38页 |
| 7.3 同步提取RNA及多糖 | 第38-39页 |
| 8 本研究的意义及主要内容 | 第39-41页 |
| 8.1 研究意义和目的 | 第39-40页 |
| 8.1.1 研究意义 | 第39-40页 |
| 8.1.2 研究目的 | 第40页 |
| 8.2 研究内容 | 第40-41页 |
| 8.2.1 霍山石斛不同光周期下离体培养材料的增殖率 | 第40页 |
| 8.2.2 不同光周期对霍山石斛离体培养材料多糖含量的影响 | 第40页 |
| 8.2.3 CCA1基因和MYB1R1基因的克隆、生物信息学分析及表达规律 | 第40页 |
| 8.2.4 同步提取RNA和多糖的技术研究 | 第40页 |
| 8.2.5 离体培养中不同光周期、增殖率、多糖含量及基因表达的综合研究 | 第40-41页 |
| 第二章 不同光周期对霍山石斛离体培养材料增殖的影响 | 第41-62页 |
| 第一节 不同光周期处理对霍山石斛原球茎及试管苗增殖的影响 | 第41-57页 |
| 1 原球茎的性质讨论 | 第41-45页 |
| 2 材料和方法 | 第45-46页 |
| 2.1 材料 | 第45页 |
| 2.2 试验方法 | 第45页 |
| 2.2.1 不同的光周期对霍山石斛原球茎增殖的影响 | 第45页 |
| 2.2.2 基本培养条件 | 第45页 |
| 2.3 计算方法及数据分析 | 第45-46页 |
| 2.3.1 计算方法 | 第45页 |
| 2.3.2 数据分析 | 第45-46页 |
| 3 结果和分析 | 第46-56页 |
| 3.1 不同光周期处理对霍山石斛原球茎增殖的影响 | 第46-49页 |
| 3.2 不同光周期处理下霍山石斛试管苗的增殖变化 | 第49-53页 |
| 3.3 不同光周期对原球茎及试管苗相对增殖的影响 | 第53-56页 |
| 4 讨论 | 第56-57页 |
| 4.1 原球茎及试管苗增殖率受培养时间和光周期的影响的比较 | 第56页 |
| 4.2 光周期对原球茎及试管苗增殖率的影响 | 第56-57页 |
| 第二节 开放式培养 | 第57-61页 |
| 1 材料和方法 | 第57页 |
| 1.1 材料 | 第57页 |
| 1.2 试验方法 | 第57页 |
| 1.3 基本培养条件 | 第57页 |
| 1.4 数据分析 | 第57页 |
| 2 结果和分析 | 第57-61页 |
| 2.1 开放式培养出芽率统计分析 | 第57-58页 |
| 2.2 开放式培养材料表型观察 | 第58-61页 |
| 3 讨论 | 第61页 |
| 本章小结 | 第61-62页 |
| 第三章 不同光周期对霍山石斛离体培养材料多糖含量影响 | 第62-71页 |
| 1 误差分析及研发方案优化讨论 | 第62-63页 |
| 2 材料与方法 | 第63-64页 |
| 2.1 材料 | 第63页 |
| 2.2 测定项目和试验方法 | 第63-64页 |
| 2.2.1 霍山石斛多糖含量的测定 | 第63-64页 |
| 2.3 基本培养条件 | 第64页 |
| 2.4 计算方法和数据分析 | 第64页 |
| 3 结果和分析 | 第64-70页 |
| 3.1 不同光周期处理对霍山石斛原球茎多糖含量的影响 | 第64-65页 |
| 3.2 不同光周期处理对霍山石斛试管苗多糖含量的影响 | 第65-66页 |
| 3.3 不同光周期处理对霍山石斛原球茎及试管苗多糖含量的影响 | 第66-70页 |
| 4 本章小结 | 第70-71页 |
| 第四章 霍山石斛生物钟相关基因CCA1的克隆及生物信息学分析 | 第71-84页 |
| 第一节 霍山石斛CCA1基因的克隆 | 第71-79页 |
| 1 材料与方法 | 第71-73页 |
| 1.1 材料 | 第71页 |
| 1.2 方法 | 第71-73页 |
| 1.2.1 霍山石斛总RNA的提取及cDNA逆转录 | 第71-72页 |
| 1.2.2 CCA1基因克隆 | 第72页 |
| 1.2.3 霍山石斛CCA1基因保守区克隆 | 第72页 |
| 1.2.4 霍山石斛CCA1基因3'RACE引物设计及PCR扩增 | 第72-73页 |
| 1.2.5 霍山石斛CCA1基因5'RACE引物设计及PCR扩增 | 第73页 |
| 1.2.6 霍山石斛CCA1基因全长拼接及ORF验证 | 第73页 |
| 2 结果与分析 | 第73-78页 |
| 2.1 霍山石斛总RNA的提取与质量检测 | 第73-74页 |
| 2.2 霍山石斛CCA1基因保守区的克隆 | 第74-75页 |
| 2.3 霍山石斛开CCA1基因cDNA3'RACE的克隆结果 | 第75页 |
| 2.4 霍山石斛CCA1基因cDNA 5'RACE的克隆结果 | 第75-76页 |
| 2.5 霍山石斛基因全长拼接 | 第76-77页 |
| 2.6 霍山石斛CCA1基因ORF扩增结果 | 第77-78页 |
| 3 讨论 | 第78-79页 |
| 第二节 霍山石斛CCA1基因的生物信息学分析 | 第79-83页 |
| 1 材料和方法 | 第79页 |
| 1.1 材料 | 第79页 |
| 1.2 方法 | 第79页 |
| 2 结果与分析 | 第79-83页 |
| 2.1 CCA1蛋白理化性质预测分析结果 | 第79-80页 |
| 2.2 CCA1蛋白的亲疏水特性预测及分析 | 第80-81页 |
| 2.3 CCA1蛋白的跨膜结构预测与分析 | 第81页 |
| 2.4 CCA1蛋白信号肽预测与分析 | 第81-82页 |
| 2.5 CCA1磷酸化位点的预测分析 | 第82页 |
| 2.6 CCA1蛋白的保守结构域预测与分析 | 第82页 |
| 2.7 MYB1R1蛋白质卷曲螺旋预测与分析 | 第82-83页 |
| 3 讨论 | 第83页 |
| 本章小结 | 第83-84页 |
| 第五章 霍山石斛MYB1R1的克隆及生物信息学分析 | 第84-105页 |
| 第一节 霍山石斛MYB1R1基因的克隆 | 第84-91页 |
| 1. 材料与方法 | 第84-86页 |
| 1.1 材料 | 第84页 |
| 1.2 方法 | 第84-86页 |
| 1.2.1 霍山石斛总RNA的提取及cDNA逆转录 | 第84-85页 |
| 1.2.2 MYB1R1基因克隆 | 第85页 |
| 1.2.3 霍山石斛MYB1R1基因保守区克隆 | 第85页 |
| 1.2.4 霍山石斛MYB1R1基因3'RACE引物设计及PCR扩增 | 第85-86页 |
| 1.2.5 霍山石斛MYB1R1基因5'RACE引物设计及PCR扩增 | 第86页 |
| 1.2.6 霍山石斛MYB1R1基因全长拼接及ORF验证 | 第86页 |
| 2 结果与分析 | 第86-90页 |
| 2.1 霍山石斛MYB1R1基因保守区的克隆 | 第86-87页 |
| 2.2 霍山石斛MYB1R1基因cDNA3'RACE的克隆结果 | 第87页 |
| 2.3 霍山石斛MYB1R1基因cDNA5'RA CE的克隆结果 | 第87-88页 |
| 2.4 霍山石斛MYB1R1基因全长拼接结果 | 第88-89页 |
| 2.5 霍山石斛MYB1R1基因ORF扩增结果 | 第89-90页 |
| 3 讨论 | 第90-91页 |
| 第二节 霍山石斛MYB1R1基因的生物信息学分析 | 第91-95页 |
| 1 材料和方法 | 第91页 |
| 1.1 材料 | 第91页 |
| 1.2 方法 | 第91页 |
| 2 结果与分析 | 第91-95页 |
| 2.1 MYB1R1蛋白理化性质预测与分析 | 第91-92页 |
| 2.2 MYB1R1蛋白亲疏水特性预测与分析 | 第92-93页 |
| 2.3 MYB1R1蛋白跨膜结构预测及分析 | 第93页 |
| 2.4 MYB1R1蛋白的信号肽预测及分析 | 第93-94页 |
| 2.5 MYB1R1磷酸化位点的预测与分析 | 第94页 |
| 2.6 MYB1R1保守结构域的预测与分析 | 第94页 |
| 2.7 MYB1R1蛋白质卷曲螺旋预测与分析 | 第94-95页 |
| 3 讨论 | 第95页 |
| 第三节 霍山石斛MYB1R1基因密码子选用偏好性分析 | 第95-104页 |
| 1 材料与方法 | 第95-96页 |
| 1.1 序列及密码子选用偏好性数据来源 | 第95-96页 |
| 1.2 密码子选用偏好性分析方法 | 第96页 |
| 2 结果与分析 | 第96-103页 |
| 2.1 霍山石斛MYB1R1基因密码子选用偏好性分析 | 第96-98页 |
| 2.1.1 有效密码子数及GC含量 | 第96-97页 |
| 2.1.2 同义密码子相对使用度 | 第97-98页 |
| 2.2 不同物种间MYB1R1密码子选用偏好性比较 | 第98-101页 |
| 2.2.1 有效密码子数及GC含量 | 第98-99页 |
| 2.2.2 基于密码子选用偏好和CDS序列的系统聚类 | 第99-101页 |
| 2.3 霍山石斛MYB1R1受体系统选择 | 第101-103页 |
| 3 讨论 | 第103-104页 |
| 3.1 霍山石斛MYB1R1密码子选用偏好性呈双子叶植物密码子选用偏好规律 | 第103页 |
| 3.2 霍山石斛MYB1R1密码子选用偏好性讨论 | 第103-104页 |
| 本章小结 | 第104-105页 |
| 第六章 霍山石斛生物钟相关基因的定量表达 | 第105-118页 |
| 第一节 不同光周期处理对霍山石斛CCA1基因表达的影响 | 第105-113页 |
| 1 材料和方法 | 第105-107页 |
| 1.1 材料 | 第105页 |
| 1.2 实验试剂及仪器 | 第105页 |
| 1.3 方法 | 第105-107页 |
| 1.3.1 霍山石斛总RNA提取以及纯度、完整性鉴定 | 第105-106页 |
| 1.3.2 cDNA逆转录 | 第106页 |
| 1.3.3 实时荧光定量PCR | 第106-107页 |
| 1.3.4 标准曲线的制定方法 | 第107页 |
| 1.3.5 数据分析 | 第107页 |
| 2 结果和分析 | 第107-112页 |
| 2.1 RNA质量分析 | 第107-108页 |
| 2.2 Actin基因和CCA1基因标准曲线分析 | 第108页 |
| 2.3 不同光周期对霍山石斛CCA1基因及MYB1R1基因的表达分析 | 第108-112页 |
| 2.3.1 不同光周期对CCA1和MYB1R1基因在霍山石斛原球茎中的表达分析 | 第108-109页 |
| 2.3.2 不同光周期对CCA1和MYB1R1基因在霍山石斛试管苗中的表达分析 | 第109-111页 |
| 2.3.3 CCA1和MYB1R1基因在不同光周期下24h内的表达及分析 | 第111-112页 |
| 3 讨论 | 第112-113页 |
| 3.1 CCA1基因和MYB1R1基因在霍山石斛原球茎中表达分析 | 第112页 |
| 3.2 CCA1基因和MYB1R1基因在霍山石斛试管苗内表达量分析 | 第112-113页 |
| 第二节 不同半浸没处理对霍山石斛MYB1R1基因表达的影响 | 第113-117页 |
| 1 材料和方法 | 第113-115页 |
| 1.1 材料 | 第113页 |
| 1.2 实验试剂及仪器 | 第113页 |
| 1.3 方法 | 第113-115页 |
| 1.3.1 霍山石斛总RNA提取以及纯度、完整性鉴定 | 第113页 |
| 1.3.2 cDNA逆转录 | 第113-114页 |
| 1.3.3 实时荧光定量PCR | 第114页 |
| 1.3.4 标准曲线的制定 | 第114页 |
| 1.3.5 数据分析 | 第114-115页 |
| 2 结果与分析 | 第115-117页 |
| 2.1 18SrRNA基因、MYB1R1基因标准曲线分析 | 第115页 |
| 2.2 霍山石斛MYB1R1基因在不同处理条件下的表达分析 | 第115-117页 |
| 3 讨论 | 第117页 |
| 本章小结 | 第117-118页 |
| 第七章 同步提取RNA和多糖的技术 | 第118-122页 |
| 1 多糖含量及基因表达和调控的同步原位实时动态研究 | 第118页 |
| 2 材料和方法 | 第118-120页 |
| 2.1 材料 | 第118-119页 |
| 2.2 试验方法 | 第119-120页 |
| 3 结果 | 第120-121页 |
| 3.1 RNA提取质量 | 第120页 |
| 3.2 多糖提取结果 | 第120-121页 |
| 本章小结 | 第121-122页 |
| 第八章 结论与展望 | 第122-126页 |
| 1 结论 | 第122-125页 |
| 1.1 不同光周期对霍山石斛离体培养材料增殖率具有影响 | 第122-123页 |
| 1.2 不同光周期下霍山石斛离体培养材料多糖含量与光照时间呈正相关 | 第123页 |
| 1.3 霍山石斛CCA1基因和MYB1R1基因的克隆及生物信息学分析 | 第123-124页 |
| 1.4 霍山石斛CCA1基因及MYB1R1基因表达量受光周期影响 | 第124页 |
| 1.5 同步提取RNA和多糖的技术 | 第124-125页 |
| 2 展望 | 第125-126页 |
| 参考文献 | 第126-133页 |
| 附录 | 第133-134页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文情况 | 第134-135页 |
| 致谢 | 第135页 |
